外排泵抑制劑對(duì)銅綠假單胞菌耐藥性的影響--田菁菁

1、外排泵抑制劑對(duì)銅綠假單胞菌耐藥性的影響外排泵抑制劑對(duì)銅綠假單胞菌耐藥性的影響專(zhuān)業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)學(xué)號(hào)：學(xué)號(hào)：20112637姓名：田菁菁姓名：田菁菁 前 言 銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa(Pseudomonas aeruginosa，Pa)Pa)為臨床上最常見(jiàn)的引起嚴(yán)重醫(yī)院感染的條件致為臨床上最常見(jiàn)的引起嚴(yán)重醫(yī)院感染的條件致病菌，主要感染醫(yī)院內(nèi)免疫力低下患者，其高度病菌，主要感染醫(yī)院內(nèi)免疫力低下患者，其高度耐藥和多重耐藥性使得治療成為一大難題。隨著耐藥和多重耐藥性使得治療成為一大難題。隨著碳青霉烯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物臨床應(yīng)用的日碳青霉烯類(lèi)

2、、氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物臨床應(yīng)用的日益廣泛，銅綠假單胞菌對(duì)這兩類(lèi)抗菌藥物的耐藥益廣泛，銅綠假單胞菌對(duì)這兩類(lèi)抗菌藥物的耐藥率也逐漸上升，目前國(guó)內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，其耐率也逐漸上升，目前國(guó)內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，其耐藥與主動(dòng)外排泵的過(guò)度表達(dá)有關(guān)。藥與主動(dòng)外排泵的過(guò)度表達(dá)有關(guān)。細(xì)菌的耐藥機(jī)制細(xì)菌的耐藥機(jī)制1 1、產(chǎn)生滅活酶、產(chǎn)生滅活酶, ,使抗菌藥物失活或結(jié)構(gòu)改變。使抗菌藥物失活或結(jié)構(gòu)改變。2 2、改變細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性、改變細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性, ,使抗菌藥物不能進(jìn)使抗菌藥物不能進(jìn)入菌體內(nèi)。入菌體內(nèi)。3 3、細(xì)菌體內(nèi)抗菌藥物作用的靶位結(jié)構(gòu)改變、細(xì)菌體內(nèi)抗菌藥物作用的靶位結(jié)構(gòu)改變, ,使之使之不能與抗菌藥物合。不

3、能與抗菌藥物合。4 4、形成代謝拮抗劑與藥物爭(zhēng)奪靶酶。、形成代謝拮抗劑與藥物爭(zhēng)奪靶酶。5 5、通過(guò)、通過(guò)主動(dòng)外排主動(dòng)外排作用作用, ,將藥物排出菌體外。將藥物排出菌體外。6 6、細(xì)菌分泌細(xì)胞外多糖蛋白復(fù)合物將自身包繞、細(xì)菌分泌細(xì)胞外多糖蛋白復(fù)合物將自身包繞形成細(xì)菌生物被膜。形成細(xì)菌生物被膜。 外排泵抑制劑（外排泵抑制劑（EPIs) 外排泵抑制劑外排泵抑制劑(EPIs)(EPIs)不僅可以抑制耐藥細(xì)菌對(duì)不僅可以抑制耐藥細(xì)菌對(duì)藥物的外排藥物的外排, ,恢復(fù)其對(duì)藥物的敏感性恢復(fù)其對(duì)藥物的敏感性, ,提高耐藥細(xì)提高耐藥細(xì)菌的臨床治療效果菌的臨床治療效果, ,而且在改善某些藥物的藥動(dòng)學(xué)而且在改善某些藥物

4、的藥動(dòng)學(xué)特性特性( (如提高口服藥物的吸收如提高口服藥物的吸收, ,降低肝、腎清除率降低肝、腎清除率) )方面也有廣泛的用途。方面也有廣泛的用途。 外排泵抑制劑（外排泵抑制劑（EPIs)EPIs)的作用機(jī)制分為的作用機(jī)制分為: : (1) (1)干擾外排泵組裝干擾外排泵組裝; ; (2) (2)阻斷外排泵能量來(lái)源阻斷外排泵能量來(lái)源; ; (3) (3)阻礙底物通過(guò)外排通道阻礙底物通過(guò)外排通道; ; (4) (4)機(jī)制未知。機(jī)制未知。材料和方法材料和方法菌菌 株株 30 30株銅綠假單胞菌來(lái)源于株銅綠假單胞菌來(lái)源于某醫(yī)院臨床標(biāo)本，剔除重復(fù)菌某醫(yī)院臨床標(biāo)本，剔除重復(fù)菌株。經(jīng)梅里埃株。經(jīng)梅里埃Vit

5、ek-32Vitek-32型細(xì)菌型細(xì)菌鑒定系統(tǒng)鑒定。質(zhì)控菌株為銅鑒定系統(tǒng)鑒定。質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌綠假單胞菌ATCC27853ATCC27853。藥品和試劑藥品和試劑 亞胺培南亞胺培南(IMP)(IMP)、美羅培南、美羅培南(MEP)(MEP)，購(gòu)于沈陽(yáng)制藥有限公司；購(gòu)于沈陽(yáng)制藥有限公司； 環(huán)丙沙星環(huán)丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟沙星及左氧氟沙星(LVLX)(LVLX)，購(gòu)于深圳生物制品檢定所；，購(gòu)于深圳生物制品檢定所； PANPAN、奧美拉唑、奧美拉唑、MHMH瓊脂培養(yǎng)基，瓊脂培養(yǎng)基，購(gòu)于美國(guó)購(gòu)于美國(guó)SigmaSigma公司。公司。瓊脂對(duì)倍稀釋法瓊脂對(duì)倍稀釋法 培養(yǎng)基制備使用培養(yǎng)基

6、制備使用MHMH瓊脂，按商品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，瓊脂，按商品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行配制，pH7.2-7.4pH7.2-7.4。 含藥瓊脂平板制備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將已倍比稀釋的含藥瓊脂平板制備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將已倍比稀釋的不同濃度的抗菌藥物分別加入已加熱溶解，并在不同濃度的抗菌藥物分別加入已加熱溶解，并在45-45-5050水浴中平衡的水浴中平衡的MHMH瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂厚度瓊脂厚度3-4mm3-4mm。配制好的含藥瓊脂平板應(yīng)裝入密封塑。配制好的含藥瓊脂平板應(yīng)裝入密封塑料袋中，置料袋中，置2-82-8冰箱可貯存冰箱可貯存5 5天。天。 接種物制備與接種制備濃度相當(dāng)

7、于接種物制備與接種制備濃度相當(dāng)于0.50.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管的菌懸液，再的菌懸液，再110110稀釋?zhuān)远帱c(diǎn)接種器吸取制備好菌稀釋?zhuān)远帱c(diǎn)接種器吸取制備好菌液（約液（約1-2l1-2l）接種于瓊脂平板表面，每點(diǎn)菌數(shù)約為）接種于瓊脂平板表面，每點(diǎn)菌數(shù)約為104CFU104CFU，形成直徑為，形成直徑為5-8mm5-8mm的菌斑。接種好后置的菌斑。接種好后置3535孵孵育育16-20h16-20h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。試驗(yàn)分組試驗(yàn)分組生長(zhǎng)對(duì)照組：生長(zhǎng)對(duì)照組： 制備僅含外排泵抑制劑制備僅含外排泵抑制劑(EPIs) PAN(EPIs) PAN和奧美和奧美拉唑的培養(yǎng)基。拉唑的培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)組

8、：實(shí)驗(yàn)組： PANPAN與亞胺培南與亞胺培南(IMP)(IMP)、美羅培南、美羅培南(MEP)(MEP)聯(lián)合聯(lián)合時(shí)為時(shí)為40g/mL40g/mL，與環(huán)丙沙星，與環(huán)丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟及左氧氟沙星沙星(LVLX)(LVLX)時(shí)為時(shí)為20g/mL20g/mL； 奧美拉唑與亞胺培南奧美拉唑與亞胺培南(IMP)(IMP)、美羅培南、美羅培南(MEP)(MEP)、環(huán)丙沙星環(huán)丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟沙星及左氧氟沙星(LVLX)(LVLX)聯(lián)合時(shí)聯(lián)合時(shí)均為均為20g/mL20g/mL。結(jié)果判斷方法結(jié)果判斷方法 將平板置于暗色、無(wú)反光物體表面上判斷試驗(yàn)終點(diǎn)，按照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)

9、準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推薦方法測(cè)定并讀取結(jié)果。以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度為MIC。比較應(yīng)用EPI前后菌株對(duì)4種抗菌藥物MIC值的變化，MIC降低為原值的1/4或更低則判斷為外排泵陽(yáng)性株。 結(jié)果和討論結(jié)果和討論預(yù)測(cè)結(jié)果預(yù)測(cè)結(jié)果1. PAN1. PAN對(duì)碳青霉烯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物抗菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物抗菌活性的影響活性的影響 PAN濃度為40g/mL時(shí)，能明顯增強(qiáng)碳青霉烯類(lèi)對(duì)銅綠假單胞菌的抗菌活性，PAN濃度為20g/mL時(shí)，即能明顯增強(qiáng)氟喹諾酮類(lèi)對(duì)銅綠假單胞菌的抗菌活性。2.2.奧美拉唑?qū)μ?/p>

10、青霉烯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物抗奧美拉唑?qū)μ记嗝瓜╊?lèi)、氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物抗菌活性的影響菌活性的影響 奧美拉唑20g/mL時(shí)，對(duì)碳青霉烯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)的抗菌活性影響均較小 討論分析討論分析 PAN PAN即即MC-207110MC-207110是通過(guò)結(jié)合外排泵相應(yīng)位是通過(guò)結(jié)合外排泵相應(yīng)位點(diǎn)以阻止其他底物與該位點(diǎn)的結(jié)合，減少藥物的點(diǎn)以阻止其他底物與該位點(diǎn)的結(jié)合，減少藥物的外排。外排。PANPAN除了能抑制銅綠假單胞菌除了能抑制銅綠假單胞菌RNDRND型外排型外排泵，還可抑制其他一些革蘭陰性菌的泵，還可抑制其他一些革蘭陰性菌的RNDRND型外排泵，型外排泵，如沙門(mén)菌屬、大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克如沙門(mén)菌屬、大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌等。雷伯菌等。 奧美拉唑?yàn)閵W美拉唑?yàn)镠+-K+-ATPH+-K+-ATP酶酶( (又稱(chēng)質(zhì)子泵又稱(chēng)質(zhì)子泵) )抑制抑制劑，通過(guò)破壞跨膜電化學(xué)梯度，從而阻斷外排泵劑，通過(guò)破壞跨膜電化學(xué)梯度，從而阻斷外排泵能量來(lái)源，影響藥物的外排。能量來(lái)源，影響藥物的外排。AeschKmannAeschKmann等已證等已證明它可以抑制金葡菌明它可以抑制金葡菌NorANorA外排泵，可使外排泵，可使NorANorA高表高表達(dá)株的諾氟沙星、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星達(dá)株的諾氟沙星、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星MICMIC降低降低至原值的至原值的1/4-1/81/4-