傷寒副傷寒甲二聯(lián)菌苗制造及檢定規(guī)程

1、傷寒副傷寒甲二聯(lián)菌苗制造及檢定規(guī)程本品系用傷寒、副傷寒甲菌培育后取菌苔制成懸液，加甲醛 殺菌，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成每 ml含傷寒1.5億菌，副 傷寒甲1.5億菌制成。用于預(yù)防傷寒、副傷寒甲。1菌種1.1 菌種來源制造傷寒、副傷寒甲二聯(lián)菌苗用的菌種及檢定菌種用的診斷 血清，應(yīng)由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。1.2菌種檢定檢定菌種可用pH7.27.4的肉湯瓊脂、馬丁瓊脂或其他適 宜的培養(yǎng)基。培養(yǎng)特性制造菌苗的菌株應(yīng)具有的典型的形態(tài)、培養(yǎng)和生化特性。血清凝集試驗(yàn)用37C培養(yǎng)1820小時(shí)的培養(yǎng)物以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀 釋成含菌6億/ml，與相應(yīng)的傷寒、副傷寒甲菌診斷血清作定量 凝集試驗(yàn)，搖

2、勻后37C過夜，以肉眼見到凝集（+）之血清最高 稀釋度為凝集反應(yīng)之效價(jià)。凝集價(jià)不應(yīng)低于血清原效價(jià)之半。并 用傷寒Vi及0血清做凝集試驗(yàn)，應(yīng)與Vi血清有凝集，與O血清 不凝集，或僅有較低凝集。123毒力試驗(yàn)用37C培育1216小時(shí)的瓊脂培養(yǎng)物以生理鹽水稀釋，傷寒稀釋成6億/ml、3億/ml、1.5億/ml及0.75億/ml，副傷寒 甲稀釋成15億/ml、7.5億/ml及3.75億/ml等濃度的菌液（根 據(jù)菌種毒力情況可作更改也可增加稀釋度）。第一稀釋度菌懸液腹腔注射體重 1416g小白鼠至少5只， 每只0.5ml，觀察3天，使小白鼠于感染后3天內(nèi)全部死亡的最 小劑量為1個(gè)致死量（LD）,傷寒菌種

3、1LD應(yīng)不超過1.5億菌， 副傷寒甲菌種不超過7.5億菌。毒性試驗(yàn)用37 C培育1820小時(shí)瓊脂培養(yǎng)物混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)，56C加溫1小時(shí)（或其他方法殺菌），不加防腐劑。殺 菌試驗(yàn)合格后稀釋成每 ml含菌60、30及15億共3個(gè)濃度，每 一濃度的菌懸液以0.5ml腹腔注射體重1518g小白鼠5只，觀 察3天，注射7.5億菌之小白鼠應(yīng)全部生存，注射15億菌的5只小白鼠可有3只死亡。免疫力試驗(yàn)按傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗制造及檢定規(guī)程125項(xiàng)進(jìn)行。126抗原性試驗(yàn)選體重2kg左右之健康家兔至少3只，用免疫力試驗(yàn)所用之 菌液靜脈注射3次，每次0.5ml，第1次注射7億菌，第2次14 億菌，第

4、3次21億菌，每次間隔7天。末次注射后1014天采 血做定量凝集試驗(yàn)測定效價(jià)。 傷寒菌免疫的血清對(duì)免疫菌效價(jià)應(yīng) 不低于1 : 12800,副傷寒甲效價(jià)不低于 1 : 6400, 2/3家兔血清 之凝集價(jià)達(dá)上述要求即為合格。1.3菌種保存菌種應(yīng)凍干保存，凍干菌種保存于 28C。菌種凍干后應(yīng)抽取樣品按 項(xiàng)進(jìn)行檢查，合格后可使用3年。以后每次生產(chǎn)前必須檢查全部特性一次，合格者可繼續(xù)使 用2年。2菌苗制造制造傷寒、副傷寒甲二聯(lián)菌苗所用的每一菌種選用2個(gè)菌2.1菌種凍干菌種啟開后檢查菌形、純度及進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)(傷寒 菌加用Vi血清)，合格后即可使用。每啟開 1支凍干菌種用于 生產(chǎn)不超過6代。2.2制造

5、用培養(yǎng)基用pH7.27.4的馬丁瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。2.3原液制造接種采用涂種，接種后置 37C培育1824小時(shí)。采集采集前應(yīng)逐瓶檢查，有雜菌者廢棄。刮取菌苔混懸于磷酸鹽 緩沖生理鹽水中。純菌試驗(yàn)原液采集后應(yīng)逐瓶取樣接種瓊脂斜面1管，于37 C培育2天，2426C1天，有雜菌生長應(yīng)廢棄。殺菌原液用甲醛溶液殺菌，各種原液加入甲醛溶液濃度如下：傷寒菌原液不超過1.1%土 0.1% ( ml /ml )副傷寒甲菌原液不超過 1.4%土 0.1%(ml /ml)。加殺菌劑后的原液應(yīng)放在 37C，不得超過7天，以后保存 于28°C。無菌試驗(yàn)純菌試驗(yàn)合格的原液，應(yīng)取樣接種不含瓊脂的硫乙醇酸鹽

6、培 養(yǎng)基及普通瓊脂斜面各1管，放37C培育5天，有本菌生長， 可加倍量復(fù)試一次；有雜菌生長應(yīng)廢棄。原液合并無菌試驗(yàn)合格之原液，安不同菌株或不同制造日期分別過濾 合并，合并后應(yīng)加不超過 0.5%(g/ml)的苯酚或其他適宜之防腐 劑，保存于28C。2.4原液檢定鏡檢菌形應(yīng)正常，無雜菌。凝集試驗(yàn)原液與相應(yīng)血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，其凝集效價(jià)不應(yīng)低于血清原 效價(jià)之半。243無菌試驗(yàn)按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。244濃度測定應(yīng)按中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量檢定部門會(huì)同測定濃度。免疫力試驗(yàn)原液于無菌試驗(yàn)合格后與質(zhì)量檢定部門會(huì)同進(jìn)行。抽驗(yàn)批數(shù)應(yīng)不少于生產(chǎn)批數(shù)的1/5。方法同項(xiàng)，唯所用小白鼠每組 至少15只。對(duì)傷寒或副傷

7、寒甲毒菌之攻擊，均應(yīng)保護(hù)60%、白鼠活存為合格。2.5原液保存原液應(yīng)保存于28C。原液自采集之日起至用于菌苗稀釋 時(shí)不得少于4個(gè)月，保存效期自采集之日起為 2年半。2.6菌苗稀釋原液配合稀釋前應(yīng)先將不同菌種所制之原液按比例配合。 每一種菌所 加的菌數(shù)與應(yīng)加菌數(shù)在總菌數(shù)不變的原則下， 允許兩種菌之間在 20%勺范圍內(nèi)互有增減；同一種菌不同菌株之原液按等量混合，但每個(gè)菌株所加的菌數(shù)與應(yīng)加菌數(shù)在總菌數(shù)不變的原則下，允許兩個(gè)菌株之間在40%范圍內(nèi)互有增減。262菌苗稀釋稀釋菌苗用含0.25%0.5% (g /ml )苯酚或其他適宜的防 腐劑之磷酸鹽緩沖生理鹽水。菌苗濃度菌苗每ml含傷寒菌1.5億，副傷

8、寒甲菌1.5億。2.7菌苗分批同組配合的原液用同批稀釋液在同一日稀釋的各瓶菌苗為1批。大罐稀釋時(shí)應(yīng)按大罐分批，并按分裝機(jī)分為亞批。2.8檢定稀釋后每批應(yīng)逐瓶抽樣進(jìn)行無菌試驗(yàn)及測定防腐劑含量(大罐稀釋時(shí)除外)。2.9分裝分裝后應(yīng)每亞批抽樣送質(zhì)量檢定部門進(jìn)行成品檢定。3成品檢定3.1物理化學(xué)檢查菌苗應(yīng)為乳白色懸液，pH值為6.87.4。不應(yīng)有搖不散的 菌塊或異物。苯酚含量應(yīng)為 0.25%0.5% (g /ml )。3.2菌形及純度染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陰性桿菌。至少觀察10個(gè)視野，平均每個(gè)視野內(nèi)不得有10個(gè)以上非典型菌(線狀、粗大或染色可 疑桿菌)，并不應(yīng)有雜菌。3.3無菌試驗(yàn)按生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程進(jìn)行。3.4安全試驗(yàn)毒性試驗(yàn)用體重1820g之健康小白鼠5只，每只腹腔注射菌苗0.5ml，或用體重350450g之健康豚鼠2只，腹腔注射菌苗 1.5ml，觀察7日，應(yīng)無死亡。防腐劑試驗(yàn)用體重1820g之健康小白鼠2只，每只皮