常用緩沖液配置

1、實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻Ｖ怠?. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)組份濃度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配

2、制方法：2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，均勻混合。3. 將溶液定容至1 L后，高溫高壓滅菌。4. 室溫保存。3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)組份濃度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。4. 將溶液定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。4)3 M 醋酸鈉(pH5.2)組份濃度

3、：3M 醋酸鈉配制量：100ml配制方法：1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中，加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.23.加去離子水將溶液定容至100ml4高溫高壓滅菌后，室溫保存。5)PBS Buffer組份濃度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1 L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffe

4、r中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。6)10 M 醋酸銨組份濃度：10 M 醋酸銨配制量：100 ml配制方法：1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100200 ml燒杯中，加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。4. 密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7)苯酚/氯仿/異戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的

5、分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配制方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24 : 1）混合均勻后，移入棕色玻璃瓶中4保存。8）10 (W/V) SDS組份濃度：10 (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中，加入約80ml的去離子水，68加入溶解2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.23.將溶液定容至100ml后，室溫保存。9）2 N NaOH組份濃度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去離子水置于100200 ml塑料燒杯中（NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒

6、杯炸裂)。2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100 ml。4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室溫保存。10）2.5 N HCl組份濃度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法：1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸（11.6 N)，均勻混合。2. 室溫保存。11）5 M NaCl組份濃度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中，加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1 L后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅

7、菌后，4保存。11）20 (W/V) Glucose組份濃度：20 (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 稱取20 g Glucose置于100200 ml燒杯中，加入約80 ml的去離子水后，攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。12）Solution I(質(zhì)粒提取用)組份濃度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose配制量：1 L配制方法：3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。13）Solution II(質(zhì)

8、粒提取用)組份濃度：200mM NaOH，1(W/V)SDS配制量：500ml配制方法：1.量取下列溶液，置于500ml燒杯中10 SDS 50ml2N NaOH 50ml2.加滅菌水定容至500ml，充分混勻3.室溫保存，此溶液保存時(shí)間最好不要超過一個(gè)月注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要?jiǎng)×覕嚢?4）Solution III(質(zhì)粒提取用)組份濃度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH配制量：500 ml配制方法：2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。4. 高溫高壓滅菌后，4保存。15）0.5 M EDTA(pH8.0)組份濃度：0.5 M EDT

9、A配制量：1 L配制方法：稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0（約20 g NaOH)。注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1 L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。16）1 M DTT組份濃度：1 M DTT配制量：20 ml配制方法：1. 稱取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。3. 適量分成小份后，-20

10、保存。17）10 mM ATP組份濃度：10 mM ATP配制量：20 ml配制方法：1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，攪拌溶解。3. 適量分成小份后，-20保存。一.常用貯液與溶液1mol/L亞精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亞精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使終體積為10ml。分裝成小份貯存于-20。10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：將7

11、7.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔徑的濾膜過濾除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí)，無DNA酶）于9.5ml水中（為減少變性，須將蛋白加入水中，而不是將水加入蛋白），蓋好蓋后，輕輕搖動(dòng)，直至牛血清蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。1mol/L二硫蘇糖醇（DTT）：在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水，分成小份貯存于-20?；蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇至微量離心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。8mol/L乙酸鉀（potassium acet

12、ate）：溶解78.5g乙酸鉀于足量的水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化鉀（KCl）：溶解7.46g氯化鉀于足量的水中，加水定容到100ml。3mol/L乙酸鈉（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸鈉于約90ml水中，用冰乙酸調(diào)溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES：將23.8gHEPES溶于約90ml的水中，用NaOH

13、調(diào)pH（6.8-8.2），然后用水定容至100ml。1mol/L HCl：加8.6ml的濃鹽酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT：溶解250mg的IPGT（異丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份貯存于-20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF：溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的異丙醇中，定容到10ml。分成小份并用鋁箔將裝液管包裹或貯存于-20。20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）：將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，輕輕搖動(dòng)，直至蛋白酶K

14、完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml，然后分裝成小份貯存于-20。 10mg/mlRnase（無DNase）（DNasefree RNase）：溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl調(diào)pH至7.5，于-20貯存。（配制過程中要戴手套）5mol/L氯化鈉（NaCl）：溶解29.2g氯化鈉于足量的水中，定容至100ml。10N氫氧化鈉（NaOH）：溶解400g氫氧化鈉顆粒于約0.9L水的燒杯中（磁力攪拌器攪拌），氫氧化鈉完全溶解后用水定容至1L。10SDS（十二烷基硫

15、酸鈉）：稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）：溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使終體積為100ml。 100三氯乙酸（TCA）:在裝有500gTCA的試劑瓶中加入100ml水，用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。（稀釋液應(yīng)在臨用前配制）2.5 Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用鋁箔包裹裝液管，貯存于-20。-20貯存。將配制好的緩沖液分裝成小份，貯存于-20 。100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solut

16、ions）可以購買到100mmol/L純dNTPs貯液，-80可貯存至少6個(gè)月。10mmol/L dNTP混合液加聚乙二醇于含有氯化鈉的燒杯中，加水至終體積100ml，用磁力攪拌器攪拌溶解。 溶解檸檬酸三鈉（二水）和氯化鈉于約0.9L水中，加幾滴10N NaOH溶液調(diào)pH為7.0，用水補(bǔ)足體積至1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）處理水加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的體積分?jǐn)?shù)為0.1。在37溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。DEPC會(huì)與胺起反應(yīng)，不可用DEPC處理Tris緩沖液。甲酰胺（deionized formamid

17、e）直接購買或加Dowex XG8 混合樹脂于裝有甲酰胺的玻璃燒杯中，用磁力攪拌器輕輕攪拌1h，可去除甲酰胺中的離子。經(jīng)Whatman 1號(hào)濾紙過濾除去樹脂后分成小份，充氮?dú)庥?80貯存（防止氧化）。磷酸緩沖液（phosphate buffer）按照下表所給定的體積，混合1 mol/L 的磷酸二氫鈉（單堿）和1mol/L 磷酸氫二鈉（雙堿）貯液，獲得所需pH的磷酸緩沖液。配制1 mol/L 的磷酸二氫鈉（NaH2PO4·H2O）貯液：溶解138g于足量水中，使終體積為1L;1mol/L 磷酸氫二鈉（Na2HPO4）貯液:溶解142g于Tris緩沖液（Tris-HCl buffer）將

18、121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸（11.6N），用水調(diào)整終體積至1L。二.電泳緩沖液、染料和凝膠加樣液電泳緩沖液染料1溴酚藍(lán)（bromophenol blue）加1g水溶性鈉型溴酚藍(lán)于100ml水中，攪拌或渦旋混合直到完全溶解。1二甲苯青FF（xylene cyanole FF）溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。10mg/ml的溴化乙錠（ethidium bromide）小心稱取1g溴化乙錠，轉(zhuǎn)移到廣口瓶中，加100ml水，用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管，于4貯存。凝膠上樣液（gel loading solu

19、tions）三.常用培養(yǎng)基1） LB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。SOB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：用水補(bǔ)足體積到1L。分成100ml的小份，高壓滅菌。培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂。2）SOC培養(yǎng)基成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足夠水中，再用水補(bǔ)足到100

20、ml，用0.22um的濾膜過濾除菌）。3）TB培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：各組分溶解后高壓滅菌。冷卻到60，再加100ml滅菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使終體積為100ml。高壓滅菌或用0.22um的濾膜過濾除菌）。4）2×YT培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：如果需要用1N NaOH（1ml）調(diào)整pH至7.0，再補(bǔ)足水至1L。注：瓊脂平板需添加瓊脂粉12g/L,上層瓊脂平板添加瓊脂粉7g/L。5）YPD培養(yǎng)基將下列組分溶解在0.9L水中：用水補(bǔ)足體積為1L后，高壓滅菌。建議在高壓滅菌之前，對(duì)色氨酸營養(yǎng)缺陷型每升培養(yǎng)基添加1.6g色氨酸，因?yàn)閅PD培養(yǎng)基是色氨酸限制型培養(yǎng)基。為了配制平板，需要在高壓滅菌前加入20g瓊脂粉。四.常用抗生素1）氨芐青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨芐青霉素鈉鹽于足量的水中，最后定容至10ml。分裝成小份于-20貯存。常以25ug/ml50ug/ml的終濃度添加于生長培養(yǎng)基。2）羧芐青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧