昆蟲驅(qū)避劑驅(qū)蚊膚寧的高效液相色譜分析

1、    昆蟲驅(qū)避劑驅(qū)蚊膚寧的高效液相色譜分析        摘要目的：建立紫外-高效液相色譜法，測定驅(qū)蚊膚寧中N，N-二乙基間甲苯甲酰胺（DEET）的含量。方法：以YWG C18為反相柱，甲醇-水（2-1）為流動相，紫外檢測波長為254nm。結(jié)果：驅(qū)蚊膚寧中DEET的回收率為100.10%,RSD為0.90%(n=5)。結(jié)論：該法簡便、快速、準(zhǔn)確、可靠，適合于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞高效液相色譜法N，N-二乙基間甲苯甲酰胺（DEET） UV-HPLC Determination

2、 of DEET in Insect Repellent QU WEN FU NINGWang XiaoyiYou HongtaoMa Honganet alInstitute of Microbiology and Epidemiology,Military Academy of Medical Sciences Beijing 100071AbstractObjective: UV-HPLC method was established for the determination of DEET in insect repellent QU WEN FU NING . Method: Th

3、e chromatographic system consists of YWG C18 column and mobile phase of MeOH-H2O(2-1) with a detection wavelength at 254nm. Results: The recovery rate of the method was 100.10%(RSD=0.9%,n=5). Conclusion: The method is simple, rapid and reliable and can be used to control the quality in mass producti

4、on.Key wordsHigh performance liquid chromatography(HPLC)N,N-diethyl-m-toluamide(DEET)驅(qū)蚊膚寧是我所新研制的一種驅(qū)蚊凝膠制劑，采用N，N-二乙基間甲苯甲酰胺（DEET）作驅(qū)蚊有效成分，以水溶性高分子化合物為載體，加其它試劑制成透明狀凝膠制劑。具有不易燃，攜帶、使用方便和涂后無油膩感、便于清洗等特點(diǎn)1。昆蟲驅(qū)避劑（DEET）是國內(nèi)外公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)驅(qū)避劑。DEET及其制劑的分析以氣相色譜法為主。有關(guān)驅(qū)避劑氣相色譜分析國內(nèi)已有報道2-5。高效液相色譜法分析血樣和尿樣中的DEET及其代謝產(chǎn)物，國外已有報道6-7；而其制劑的

5、高效液相色譜分析，國內(nèi)外均未見報道。本文采用高效液相色譜法，以二苯甲酮為內(nèi)標(biāo)，測定了驅(qū)蚊膚寧中DEET的含量，取得滿意結(jié)果。1材料與方法1.1儀器與試劑WATERS244高效液相色譜儀(美國)、日立557紫外分光光度計(jì)（日本）；內(nèi)標(biāo)物（二苯甲酮AR）、DEET標(biāo)準(zhǔn)對照品98%（本室提供）、DEET工業(yè)品（江蘇金壇化工廠）、甲醇（GR）、水（去離子水）。1.2高效液相色譜分析條件色譜柱(填充劑YWG C18,30×0.39cm 不銹鋼柱)、流動相（甲醇-水，2-1）、檢測波長（254nm)、靈敏度（0.05 AUFS)、流速（1.0mlmin-1)、紙速（0.5cmmin-1)、進(jìn)樣量

6、（10l)、記錄儀量程（10mv）。1.3分析方法 1.3.1內(nèi)標(biāo)溶液配制準(zhǔn)確稱取二苯甲酮75mg,置于250ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻備用。1.3.2空白基質(zhì)溶液配制按驅(qū)蚊膚寧處方組成配制不含DEET的空白基質(zhì), 取150mg空白基質(zhì), 置50ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度;取2ml溶液,置25ml容量瓶中,加甲醇定容,搖勻備用。1.3.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制取DEET儲備液10ml,置于100ml容量瓶中,加內(nèi)標(biāo)溶液5ml, 加甲醇定容,搖勻備用。1.3.4樣品溶液配制取空白基質(zhì)溶液10ml,置于100ml容量瓶中,加內(nèi)標(biāo)溶液5ml,加DEET原油9ml,加水50ml,加甲醇

7、定容,搖勻備用。1.3.5樣品測定在上述色譜條件下,待儀器穩(wěn)定后,注入數(shù)針標(biāo)準(zhǔn)溶液,當(dāng)相鄰兩次進(jìn)樣其有效成分與內(nèi)標(biāo)峰高之比小于1%時,進(jìn)樣測定樣品含量。用3次重復(fù)所得數(shù)據(jù)計(jì)算結(jié)果。1.3.6分析結(jié)果計(jì)算DEET的百分含量X(%)按下式計(jì)算:式中F為標(biāo)準(zhǔn)溶液中DEET峰高與內(nèi)標(biāo)物峰高之比的倒數(shù);HDEET為樣品中DEET的峰高; H內(nèi)為樣品中內(nèi)標(biāo)峰高;W樣為樣品的質(zhì)量;0.96為標(biāo)準(zhǔn)DEET的進(jìn)樣量(g)。2結(jié)果與討論2.1色譜條件優(yōu)化由于DEET在甲醇中有較好的溶解度,擬采用反相色譜法進(jìn)行分離。當(dāng)以甲醇為流動相、YWG-C18（30×0.39cm)不銹鋼柱為色譜柱時, 色譜呈現(xiàn)分離不

8、完全的雙峰。流動相為甲醇-冰醋酸（100-1）時，分離情況與單用甲醇無明顯變化。以甲醇-水-冰醋酸（100-10-1）為流動相時，形有所改善，但分離仍不徹底，樣品中加入DEET后峰明顯增高，且未出現(xiàn)重疊峰，說明樣品中的最大峰為DEET，溶劑峰能較好的分離，但未達(dá)到基線分離，提示在YWG C18柱上，DEET與添加劑及溶劑的分離與水的濃度有關(guān)，即流動相中水的量加大可以改善分離效果。流動相為甲醇-水（100-20）時，分離情況較好，基本達(dá)到基線分離。流動相為甲醇-水(100-50)時，溶劑、添加劑和DEET能夠達(dá)到完全分離。2.2內(nèi)標(biāo)物選擇氣相色譜分析DEET及其制劑時,常選用鄰苯二甲酸二乙酯、丙

9、體六六六2等作內(nèi)標(biāo)。當(dāng)選用與DEET結(jié)構(gòu)相似的化合物鄰苯二甲酸二乙酯作為高效液相色譜法分析DEET的內(nèi)標(biāo)物時，在選定的色譜條件下，保留時間太短且受到溶劑峰的干擾，不能作為內(nèi)標(biāo)物。選用二苯甲酮作為內(nèi)標(biāo)時，保留時間適當(dāng)且與DEET相近，內(nèi)標(biāo)物與目標(biāo)化合物能夠達(dá)到基線分離。因此，選用二苯甲酮作為內(nèi)標(biāo)。2.3驅(qū)蚊膚寧基質(zhì)對DEET測定的影響按處方組成配制不含DEET的空白基質(zhì),取一定量用甲醇溶解,在選定的色譜條件下進(jìn)樣測定,記錄色譜。從譜上可以觀察到除溶劑峰外，在保留時間3.4min處還有一個吸收峰,此峰不僅弱小,而且能跟DEET和內(nèi)標(biāo)物完全分離。因此，可以證明在選定的條件下，基質(zhì)不影響DEET的測定

10、。2.4檢測波長的選定準(zhǔn)確稱取DEET標(biāo)準(zhǔn)品適量，溶于無水乙醇中,配成0.059mg/ml樣品溶液,用無水乙醇作空白對照,在340190nm范圍內(nèi)掃描,測定幾個點(diǎn)的吸收度。吸收度與吸收波長的關(guān)系見表1。表1DEET紫外吸收波長與吸收度的關(guān)系吸收波長（nm）吸收度吸收波長（nm）吸收度2152.4772700.2022540.3982800.0772600.285從表中可以看出,215nm為最大吸收波長,按常規(guī)應(yīng)選擇215nm作為檢測波長。為提高結(jié)果的準(zhǔn)確性與重現(xiàn)性，根據(jù)含量測定所用溶劑在檢測波長處吸收越小越好的原則，避開甲醇、乙醇等常用溶劑在215nm處的吸收，兼顧吸收波長和吸收度兩個因素，選

11、擇254nm作為檢測波長。25分析方法的線性相關(guān)性測定配置5個內(nèi)標(biāo)物與DEET標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量比不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按內(nèi)標(biāo)物與DEET有效成分質(zhì)量比為2-1、2-2、2-3、2-4、2-5配制，在上述液相色譜條件下進(jìn)行分析，記錄色譜，測量內(nèi)標(biāo)物與DEET的色譜峰高，求出峰高比。以內(nèi)標(biāo)物與DEET峰高比為縱坐標(biāo)，其質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得一條直線?；貧w方程為Y=7.7524x+0.0018,相關(guān)系數(shù)為r=0.9999。2.6分析方法的精密度測定準(zhǔn)確稱取一定量驅(qū)蚊膚寧，置于100ml容量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液5ml，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，在同一條件下連續(xù)測定6次得日內(nèi)精密度，結(jié)果見表2。取上述配制的

12、樣品溶液，連續(xù)5d重復(fù)測定，每d測定3次，每次進(jìn)樣10l，得日間精密度，結(jié)果見表2。表2日內(nèi)及日間精密度測定結(jié)果編號DEET含量（%）平均值（%）±SRDS(%)日內(nèi)精密度120.7420.560.200.97220.69320.71420.43520.24620.52日*間精密度120.5120.460.090.44220.56320.34420.49520.38*n=3 2.7回收率測定取一定量驅(qū)蚊膚寧樣品，分別在其中加入一定已知量標(biāo)準(zhǔn)品(DEET)和內(nèi)標(biāo)物(二苯甲酮)，按上述高效液相色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見表3。表3回收率測定結(jié)果加入量（mg/ml）測得量(mg/ml)回收率（

13、%）平均回收率（%）RSD(%)0.029250.02968101.60100.10.900.058500.0580399.200.087740.0875399.810.11700.1171100.100.14620.145999.792.8驅(qū)蚊膚寧含量測定準(zhǔn)確稱取一定量驅(qū)蚊膚寧,置于100ml容量瓶中,加內(nèi)標(biāo)溶液5ml,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,每個樣品進(jìn)樣3次,每次10l,按公式計(jì)算DEET的含量,結(jié)果見表4。 表4驅(qū)蚊膚寧含量測定結(jié)果（n=3）樣品加入量（mg）DEET含量（%）平均值（%）RSD（%）48.1622.5022.630.9242.2822.5251.0222.87 3

14、結(jié)論 用本文采用的高效液相色譜法測定驅(qū)蚊膚寧中DEET的含量,線性關(guān)系好,方法的準(zhǔn)確度和精密度均能滿足實(shí)際工作的需要。作者單位：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所(北京 100071) 參考文獻(xiàn)1董桂蕃，董言德，董瑞武，等.驅(qū)避劑新劑型的研究.中國媒介生物學(xué)及控制雜志,1998,9(3)198-201.2畢富春,王文麗.驅(qū)蚊胺氣相色譜分析.農(nóng)藥,1988,27(6)25-29.3李潔,姜志寬.氣相色譜法分析避蚊胺(deet)原油含量.衛(wèi)生殺蟲藥械,1996,2(4)33-35.4李潔,張應(yīng)闊,姜志寬,等.昆蟲驅(qū)避劑Deet乳劑的氣相色譜分析.衛(wèi)生殺蟲藥械,1996,2(2)24-26.5馬宏安,王效義,尤洪濤.昆蟲驅(qū)避劑驅(qū)蚊膚寧的氣相色譜分析.衛(wèi)生殺蟲藥械,1999,5(1)14-16.6Smallwood AW,Debord KE,Lowry LK, et al .Analysis of an insect repellent in human urine and serum by high -performance liquid chroma