丹參酮IIA對(duì)大鼠肺缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

1、丹參酮IIA對(duì)大鼠肺缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響         10-02-04 11:06:00     作者：朱春霞，白育庭    編輯：studa20【摘要】  目的 研究丹參酮IIA對(duì)大鼠肺缺血再灌注損傷過程中細(xì)胞凋亡以及相關(guān)蛋白表達(dá)的干預(yù)作用。方法 健康SD大鼠60只隨機(jī)分成四組，除對(duì)照組外，均建立肺缺血再灌注模型，其中兩組分別加丹參酮IIA和生理鹽水干預(yù)，檢測(cè)肺組織濕/干重比、細(xì)胞凋亡率、Bcl2及

2、Caspase3的表達(dá)等指標(biāo)。結(jié)果 肺缺血再灌注組與對(duì)照組相比，肺組織濕/干重比明顯增高，流式細(xì)胞儀檢測(cè)出現(xiàn)大量的凋亡細(xì)胞，證明該模型制備是成功的;肺缺血再灌注組顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的凋亡，Bcl2降低和Caspase3增高與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;丹參酮組與未干預(yù)組和生理鹽水組比較，Bcl2增高和Caspase3降低均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 丹參酮能夠改善由肺缺血再灌注引起的細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與丹參酮能干預(yù)肺組織Bcl2和Caspase3蛋白的表達(dá)有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  肺;缺血再灌注;凋亡;Bcl2;Caspase3;丹參酮ABSTRACT：Objective To investigat

3、e the effects of Tanshinone on apoptosis and the related proteins during lung ischemia reperfusion injury(LIRI) of rats.Methods Sixty rats were randomly divided into four groups.Apoptotic cells in lung tissue was inspected by flow cytometry and Hematoxylin and Eosin staining,and the expression of Bc

4、l2 and caspase3 was detected by RTPCR and western blot.Results Compared with normal control group,apoptotic cells and the expression of Bcl2 and Caspase3 in LIRI model group were markedly increased(P<0.01).Compared with model group,tanshinone could significantly inhibite cell apoptosis and the ex

5、pression of apoptosisrelated proteins in lung tissues(P<0.05).Conclusion Tanshinone can protect lung from ischemia reperfusion injury by modulating the expression of apoptosisrelated proteins Bcl2 and Caspase3.KEY WORDS:Lung;Ischemia referfysion injury;Apoptosis;Bcl2;Caspase3;Tanshinone肺缺血再灌注損傷(l

6、ung ischemia reperfusion injury，LIRI)過程中細(xì)胞凋亡過度是導(dǎo)致肺損傷的重要原因之一，凋亡作為L(zhǎng)IRI的早期事件，參與了LIRI的病理生理過程1,2。丹參酮IIA因其具有毒副作用小、“多靶效應(yīng)”等特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于臨床，尤其在防治缺血再灌注(ischemia reperfusion，IR)損傷方面，具有明顯的保護(hù)作用3。本實(shí)驗(yàn)首先建立大鼠肺IR模型，然后觀察丹參酮IIA對(duì)LIRI后肺組織Bcl2、Caspase3表達(dá)和細(xì)胞凋亡的影響，探討丹參酮IIA對(duì)LIRI中細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組成年雄性健康SD大鼠(湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

7、中心提供)60只，體質(zhì)量300±25g。隨機(jī)分為正常對(duì)照組(A組，n=6)，除不作缺血處理外，余同其它組;肺缺血再灌注組(B組，n=18);缺血再灌注加生理鹽水組(C組，n=18)，腹腔注射生理鹽水，缺血1h，再灌3h;肺缺血再灌注加丹參酮組(D組，n=18)，腹腔注射丹參酮，劑量為15mg/kg,缺血1h，再灌3h。B、C、D每組又分為三個(gè)亞組，再灌時(shí)間分別為1h、2h、3h，每個(gè)亞組6只大鼠。1.2 大鼠肺缺血再灌注模型的建立實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷闹苽洳捎肊ppinger方法，參考Sekido等模型4。取健康SD大鼠，20%水合氯醛(300350)mg/kg腹腔注射麻醉后，仰臥位固定。行頸部

8、正中切口，分離出氣管、右側(cè)頸靜脈和頸動(dòng)脈，氣管切開、插管，接動(dòng)物呼吸機(jī)行機(jī)械通氣(吸入室內(nèi)空氣，呼吸頻率40次，潮氣量10ml/kg，吸呼比為12)，右側(cè)頸靜脈插管、固定，接微量注射泵;然后經(jīng)左側(cè)第5肋間開胸，游離左肺門，靜脈注射肝素100U。靜息5min后，于呼氣末用無創(chuàng)血管夾阻斷左主支氣管、左肺動(dòng)脈和左肺靜脈。1h后開放，進(jìn)行再灌注1h、2h、3h。1.3 標(biāo)本制備及檢測(cè)指標(biāo)在缺血和再灌注的不同時(shí)間點(diǎn)取左肺組織，立即凍存于液氮中備用。自液氮中取出組織樣品，檢測(cè)肺組織濕/干重比、細(xì)胞凋亡率、Bcl2及Caspase3的表達(dá)等指標(biāo)。肺組織細(xì)胞凋亡率用流式細(xì)胞儀檢測(cè);Bcl2的表達(dá)采用Weste

9、rn Blot方法檢測(cè)(武漢晶美Western Blot試劑盒);Caspase3的表達(dá)采用PCR方法檢測(cè)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差記錄，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包行單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié) 果2.1 各組肺組織W/D與A組比較，B組W/D在1h亞組即有升高，2h達(dá)到高峰，第3h組下降;與B組比較，C組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異;與B、C組比較，D組W/D的表達(dá)下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與A組比較，D組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。(表1)表1 各組大鼠肺組織W/D比較與A組比較,*P<0.01;與D組比較,P<0.012.2 肺組織細(xì)胞凋亡率流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果B、C組2h肺組織細(xì)胞凋亡率分別為30.5%±2.3%、35.0%±7.7%，3h肺組織細(xì)胞凋亡率分別為22.1%±1.2%、20.3%±1.3%，其余