炒麥芽含藥血清中α蹭逡停移行成分高效液相色譜法定性定量分析

1、炒麥芽含藥血清中?蹭逡?停移行成分高效液相色譜法定性定量分析    【摘要】  目的對炒麥芽含藥血清中?蹭逡?停進行定性定量分析。方法以炒麥芽中已知含有的成分?蹭逡?停作為對照品，通過對實驗動物家兔灌胃飼服炒麥芽，應用高效液相色譜法分別比較了實驗動物家兔炒麥芽含藥血清、陽性對照藥物溴隱停含藥血清及空白不含藥血清的高效液相色譜圖，建立?蹭逡?停定量檢測的方法學。結果?蹭逡?停和炒麥芽含藥血清及含溴隱停血清成分一部分峰相同，而空白血清在相同保留時間并沒有該峰形，HPLC法最終測得炒麥含藥血清中?蹭逡?停含量為(0.070 2±0.01)

2、g/g。結論 家兔經(jīng)炒麥芽灌胃后，血中有炒麥芽源性的?蹭逡?停移行成分，性質(zhì)并未發(fā)生改變，建立了該成分定量分析的方法學操作規(guī)范。 【關鍵詞】  炒麥芽 高效液相色譜 溴隱停Abstract：ObjectiveTo do quantitative and qualitative analysis for the -Ergolactin in the stir-baked malt contained rabbit blood serum.MethodsTaking ?Ergolactin as reference, HPLC was used to compare rabbit sti

3、r-baked malt contained blood serum,Bromocriptine contained blood serum and blank blood serum.ResultsBoth the stir-baked malt contained blood serum and Bromocriptine contained blood serum had a part of the same peak in the HPLC chromatogram as ?Ergolactin reconstituent, obviously different with the b

4、lank blood serum. ConclusionAfter intragastric administration of rabbit by stir-baked malt,it's reconstituents can be aborted into blood, it has the same ?Ergolactin reconstitute as the positive control medicine Bromocriptine.Key words:Stir-baked malt;  HPLC;   ?Ergolactine;?蹭逡?停是

5、炒麥芽的成分之一，也是臨床用于治療垂體泌乳素腺瘤的甲磺酸溴隱停成分，因此可能是炒麥芽中對垂體泌乳素腺瘤具有治療作用的活性成分之一。本實驗擬應用高效液相色譜法，對炒麥芽含藥血清可能存在的?蹭逡?停成分進行定性定量分析。1  器材1.1  儀器GilsonGAD?E型高效液相色譜儀；712數(shù)據(jù)分析系統(tǒng) UV/VS118c；紫外檢測器Sinochrom ODS?BP(5 m,4.6 mm×250 mm大連伊利特)；80?2型高速離心機；H66MC型超聲震儀。1.2  試劑乙腈，HPLC級，美國迪馬（DIKMA）試劑公司；甲醇，HPLC級，美國天地（TEDIA）

6、試劑公司；水，娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）；其余試劑為分析純。1.3  對照品及樣品炒麥芽購于湖北省十堰市人民醫(yī)院藥劑科；?蹭逡?停,購于中國生物制品藥品檢定所,批號10753。事先制取家兔SCXK（鄂）2005?2008空白血清炒麥芽含藥血清及溴隱停含藥血清,經(jīng)劑量換算后，按臨床常用量給予灌胃，3次/d給予灌胃，連續(xù)7 d，在第7日灌胃后1.5 h，從心臟無菌取血5 ml，1 500 r/min，離心15 min，制取含藥血清。2  方法與結果2.1  上樣樣品的制備?蹭逡?停對照品制備及樣品含藥血清、溴隱停含藥血清和空白血清血樣處理：取?蹭逡?停2.

7、5 mg到25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度即得。20 l進樣。取血清300 l置1 ml離心管中10管，加甲醇700 l，振搖5 min,超聲5 min，10 000 r/min離心，取上清液N2揮干，濃縮10倍,100 l流動相溶解， 20 l進樣。2.2  流動相流動相為乙腈：30 mmol/L醋酸銨溶液5545；柱溫40; 流速1.0 ml/min；檢測波長300 nm；AUFS0.05。在此條件下，炒麥芽含藥血清樣品的HPLC色譜圖中溴隱停吸收峰與其他成分的吸收峰達到基線分離，可以進行溴隱停移行成分的定性定量分析測定。2.3  炒麥芽含藥血清中?蹭逡?停移行成分的定

8、性分析見圖1。    ?蹭逡?停和炒麥芽含藥血清在90 min附近出峰時間相同，空白血清此時無特征峰，家兔經(jīng)炒麥芽灌胃后血中有炒麥芽源性?蹭逡?停成分。百事通2.4  方法學考察及含量測定2.4.1  標準曲線繪制?蹭逡?停對照品溶液分別手動進樣2.5，5，10，15，20 l，測得?蹭逡?停的峰面積，以質(zhì)量Y與色譜峰面積X做標準曲線，得回歸方程為：lgY=1.346+2.72lgX (r=0. 971 3)，表明?蹭逡?停在1.0 3.00 g范圍內(nèi)線性關系良好,結果見表1。表1  標準曲線繪制結果（略）2.4.2  精密

9、度實驗取同一濃度的?蹭逡?停標準品溶液,重復進樣5次，5 l/次，測得?蹭逡?停峰面積,峰面積平均對數(shù)值為3.734, RSD=0.321% (n=5) 表明儀器精密度良好。結果見表2。表2  精密度實驗結果（略）2.4.3  穩(wěn)定性實驗取同一炒麥芽含藥血清樣品供試液,分別于0，2，4，6，8 h進樣測定。結果表明?蹭逡?停色譜峰面積對數(shù)的平均值為3.732,RSD=0.331%(n=5)。表明供試炒麥芽含藥血清在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。見表3。表3  穩(wěn)定性實驗結果（略）2.4.4  重復性實驗取同一批供試用家兔炒麥芽含藥血清5份，照樣品測定方法處理并測定。

10、結果表明，溴隱停平均含量為0.04 g/g，RSD=0.364%(n=5)。表明該方法重復性良好。結果見表4。表4  重復性實驗結果（略）2.4.5  加樣回收率實驗取已知含量供試用炒麥芽含藥血清(?蹭逡?停含量為0.06 ug/g)5份,每份約5 g,精密稱定,加入一定量的?蹭逡?停對照品,按2.1項加以操作,在上述色譜條件下進行分析.結果表明, ?蹭逡?停平均加樣回收率為95.67%,RSD=1.05(n=5)。表明該方法可靠。結果見表5。表5  加樣回收率實驗結果（略）2.4.6  炒麥芽含藥血清中?蹭逡?停含量的測定按炒麥芽含藥血清供試樣品制備方

11、法制取5批含藥血清,每批樣進樣20 l,用標準曲線法測定其中的?蹭逡?停。結果見表6。表6  炒麥芽含藥血清中-溴隱停的含量測定（略）3  討論中國傳統(tǒng)醫(yī)學中，炒麥芽對乳汁分泌具有調(diào)控作用4，可用于高泌乳素血癥的治療1，3，5。藥理學研究發(fā)現(xiàn)其中含有?蹭逡?停成分6，由于和臨床治療垂體泌乳素腺瘤藥物甲磺酸溴隱?；瘜W結構類似2，可能是炒麥芽治療垂體泌乳素腺瘤的活性成分3。為探討炒麥芽口服后血清中是否有?蹭逡?停成分存在以及有無變化,給予大耳白兔炒麥芽浸汁灌胃,采血分離含藥血清,采用高效液相色譜法，對其進行了定性定量檢測，并以臨床常用藥溴隱停含藥血清為對照，為課題后續(xù)開展奠定基

12、礎。本實驗建立了HPLC檢測?蹭逡?停含量測定方法，炒麥芽中?蹭逡?停成分可被吸收入血且性質(zhì)未發(fā)生變化。測定結果表明炒麥芽含藥血清中?蹭逡?停含量是（0.070 2±0.01）g/ml，陽性對照藥物溴隱停含藥血清中的含量是（0.081 3±0.02）g/ml左右，二者含量相近。以?蹭逡?停含量而言臨床大劑量炒麥芽可能具有類似溴隱停治療結果。本實驗中，炒麥芽含藥血清HPLC圖譜，?蹭逡?停特征峰外仍有許多波峰出現(xiàn)，表明炒麥芽含藥血清成分多樣。炒麥芽入血成分中，不僅?蹭逡?停成分，其它成分也可能是起作用。由于不同的色譜柱對實驗結果具有一定的影響，課題組參考相關文獻7采用Sino

13、chrom ODS-BP(5m，4.6 mm×250 mm大連伊利特)色譜柱，出峰較多，峰形較好，故加以選用；在洗脫系統(tǒng)中，分別參考了甲醇-水、乙腈-水及乙腈：30 mmol/L醋酸銨溶液5545系統(tǒng)，鑒于前兩者基線漂移嚴重，出峰較少，且峰形不好，而乙腈：30 mmol/L醋酸銨溶液5545系統(tǒng)出峰較多，峰形較佳，且色譜峰分離度好，保留時間適中，分離明顯優(yōu)于甲醇：水、乙腈：水,反復摸索兩者比例最終選用；檢測波長，選用300 nm，出峰較多，分離度較好；在提取溶劑選擇上，分別比較了水、乙醇及甲醇，發(fā)現(xiàn)水提物出峰較少，而乙醇提取物基線有漂移現(xiàn)象，最終選用甲醇作為提取溶劑。參照物選擇上，由

14、于檢測目標是溴隱停成分，而在HPLC分析過程中，該成分出峰面積較明顯，且保留時間適中而穩(wěn)定，可以獲得標準品，所以仍加以選用。在本次實驗過程中，炒麥芽含藥血清HPLC色譜圖有許多特征峰，說明該法有效，可用于炒麥芽含藥血清藥物的化學定性定量分析?！緟⒖嘉墨I】  1Peter J. Yeh and Jefferson W. Chen. Pituitary tumors: surgical and medicalmanagementJ. J. Surgical Oncology.2004,6(2)：67.2Watanabe M Ant/oxidative phenolic compounds from Japanese barnyard millet Echinochloa utilis)grainsJ.Agric Food Chem ，1999，47：4500.3楊海燕.中醫(yī)藥治療高泌乳素血癥的研究進展J.遼寧中醫(yī)雜志，2003,30(2):34.