細(xì)菌常見的生化反應(yīng)試驗(yàn)

1、細(xì)菌常見的生化反應(yīng)試驗(yàn)()什么是生化試驗(yàn) ？指通過利用生物化學(xué)的方法來測(cè)定微生物的代謝產(chǎn)物、代謝方式和條件等來鑒別細(xì)菌的類別、屬種的試驗(yàn)。生化試驗(yàn)或稱生化反應(yīng)：細(xì)菌的酶不完全相同， 對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力不一致， 因此其代謝產(chǎn)物各異。 在培養(yǎng) 基中加入可與被測(cè)終產(chǎn)物反應(yīng)的指示劑，產(chǎn)生肉眼可見的變化，如顏色的改變等，利用生化方法來鑒定細(xì)菌的 試驗(yàn)，統(tǒng)稱為細(xì)菌的生化試驗(yàn)或稱生化反應(yīng)(二) 生化試驗(yàn)的方法：1在培養(yǎng)物中加入某種底物與指示劑 ，經(jīng)接種、培養(yǎng)后，觀察培 養(yǎng)基的pH值變化。2在培養(yǎng)物中加入試劑，觀察它們同細(xì)菌代謝產(chǎn)物所生成的顏色反應(yīng)。3根據(jù)酶作用的反應(yīng)特性，測(cè)定酶的存在。4根據(jù)細(xì)菌對(duì)理化條件

2、和藥品的敏感性，觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。（三）生化試驗(yàn)的注意事項(xiàng)1. 待檢菌應(yīng)是新鮮培養(yǎng)物，培養(yǎng)1824h。2. 待檢菌應(yīng)是純種培養(yǎng)物。3. 遵守觀察反應(yīng)的時(shí)間。觀察結(jié)果的時(shí)間，多為24或48小時(shí)。4. 應(yīng)做必要的對(duì)照試驗(yàn)。5. 提高陽(yáng)性檢出率，至少挑取23待檢的疑似菌落分別進(jìn)行試驗(yàn)。（四）檢驗(yàn)細(xì)菌的生化試驗(yàn)范圍:1、糖（醇）類代謝試驗(yàn)2 、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)3、有機(jī)酸鹽和銨鹽的利用試驗(yàn)4、呼吸酶類試驗(yàn)5、毒性酶類試驗(yàn)二、糖醇類代謝試驗(yàn)（一）糖醇類發(fā)酵試驗(yàn)（二）葡萄糖氧化發(fā)酵（0/F）試驗(yàn)（三）V-P試驗(yàn)（四）甲基紅（Methyl Red ）試驗(yàn) MR（五）七葉苷水解試驗(yàn)（六）甘油品紅試驗(yàn)（一

3、） 糖醇類發(fā)酵試驗(yàn)1、原理：不同的細(xì)菌對(duì)各種糖醇的分解能力及所產(chǎn)生的代 謝產(chǎn)物各不同，有的能分解多種糖 （醇），有的只能分解 12 種糖（醇），有的分解糖（醇）能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的分解糖 （醇）只 產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，根據(jù)這些特點(diǎn)，可鑒別細(xì)菌。常用的糖醇單糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖雙糖：乳糖、蔗糖、麥芽糖、蕈糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇類：甘露醇、山梨醇、肌醇、衛(wèi)茅醇2試驗(yàn)方法：用接種針或環(huán)移取純培養(yǎng)物少許，接種于糖發(fā)酵管中，若為半固體培養(yǎng)基，則用接種針作穿刺接種。置36± 1.0 C培養(yǎng)13天，每天觀察結(jié)果。3、結(jié)果觀察和記錄：?產(chǎn)酸產(chǎn)氣，陽(yáng)性，以“”表示?不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，

4、陰性，以“”表示sf*、氣rr-陽(yáng)性性陽(yáng)性+I'冶1車羽宓為董俠 - 陰哇-陰葉應(yīng)用：沙門氏菌可發(fā)酵葡萄糖但不發(fā)酵乳糖。大腸埃希菌可 發(fā)酵葡萄糖及乳糖。有些菌可發(fā)酵同一種糖類，其發(fā)酵產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也不盡相 同。如大腸埃希菌和志賀菌均可發(fā)酵葡萄糖，但前者產(chǎn)酸產(chǎn) 氣，而后者僅產(chǎn)酸，故可利用此試驗(yàn)來鑒定細(xì)菌。（二）葡萄糖氧化發(fā)酵 OF試驗(yàn) 1、原理：細(xì)菌對(duì)葡萄糖的分解，分為氧化型和發(fā)酵型。氧化型細(xì)菌在有氧的條件下才能分解葡萄糖，無氧的條件下 不能分解葡萄糖;發(fā)酵型細(xì)菌在有氧無氧條件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。根據(jù)糖管的色澤變化可鑒別細(xì)菌。2、方法:取待檢菌，以穿刺法接種于

5、兩管葡萄糖半固體培養(yǎng)基上，在其中一管加入一層（約 1cm ）滅菌的液體石蠟以隔絕空氣， 在37 C培養(yǎng)24h天，每天觀察結(jié)果。應(yīng)用：可用于鑒別腸桿菌科細(xì)菌（發(fā)酵型）與非發(fā)酵菌（氧 化型或產(chǎn)堿型）。也可用于鑒定葡萄球菌（發(fā)酵型）和微球 菌（氧化型）。3、結(jié)果觀察與記錄產(chǎn)酸 典代產(chǎn)酸C黃色、不產(chǎn)酸C專苗）產(chǎn)橄型不產(chǎn)酸C綠色不產(chǎn)酸t(yī)綠電（三）V-P試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧生成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中的02氧化為二乙酰，在a -萘酚和肌酸的催化作用下，二乙酰與培養(yǎng)基中的蛋白胨中精氨酸等所含的胍基生成紅色化合物，即V-P試驗(yàn)陽(yáng)性，稱V P（ +）反

6、應(yīng)。應(yīng)用：本試驗(yàn)常與甲基紅試驗(yàn)一起使用。二者結(jié)果通常相反。即如大腸埃氏菌、沙門菌、志賀菌等甲基紅呈陽(yáng)性反應(yīng)，而VP反應(yīng)則為陰性。沙雷菌、陰溝腸桿菌等，VP反應(yīng)為陽(yáng)性， 而甲基紅反應(yīng)為陰性。2、試驗(yàn)方法（1）奧梅拉（0 Meara）法 （2）貝立脫（Barritt ）氏法（3）快速法（1）奧梅拉法將試驗(yàn)菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于36± 1 C培養(yǎng)48h , 每1mL培養(yǎng)液加奧梅拉 0 Meara試 劑0.1ml，搖動(dòng)試管12min，靜置于37C恒溫箱4h , 或在4850 C水浴放置2h后判定結(jié)果。(2) 貝立脫法將試驗(yàn)菌接種于磷酸鹽葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，于36± 1C培養(yǎng)2天，每2mL培養(yǎng)液先加入6%a-萘酚純酒 精溶液1mL，再加40%氫氧化鉀水溶液 0.4ml，搖動(dòng) 25min ,陽(yáng)性菌常立即呈現(xiàn)紅色， 若無紅色出現(xiàn)，靜置 于室溫或36 ± 1 C培養(yǎng)4h，如顯現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，呈 黃色或有類似銅色者，可判定為陰性。(3) 快速法將0.5%肌酸溶液2滴放于小試管中，挑取產(chǎn)酸反應(yīng)的 三糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)物一接種環(huán)，乳化接種于其中，加入5% a -萘酚3滴，40%氫氧化鈉水溶液2滴，振動(dòng)后 放置5min，判定結(jié)果。不產(chǎn)