1獸用生物制品概念根據(jù)免疫學(xué)原理

1、1獸用生物制品概念 根據(jù)免疫學(xué)原理，利用病原體（微生物和寄生蟲）及其代謝產(chǎn)物或免疫應(yīng)答產(chǎn)物制備的一類生物制劑。2疫苗 由病原體(微生物和寄生蟲)及其代謝產(chǎn)物制成的用于主動(dòng)免疫的生物制品稱為疫苗。3.一般滅活苗 菌、毒種應(yīng)是標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒或免疫原性優(yōu)良的弱毒株，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法將其殺死（滅活）后制成滅活苗，需加佐劑提高其免疫力。4.自家滅活苗 是指從患病動(dòng)物自身病灶中分離出來的病原，經(jīng)培養(yǎng)、滅活后制成，再用該動(dòng)物本身。用于治療慢性、反復(fù)發(fā)作而用抗生素治療無效的細(xì)菌性或病毒性感染。如頑固性葡萄球菌感染。5.臟器滅活苗（組織滅活苗） 利用病死動(dòng)物含病原微生物臟器制成乳劑，加甲醛等滅活脫毒所制成

2、的疫苗。如兔病毒性出血癥，肝臟中含毒量較高。6.弱毒苗 微生物自然強(qiáng)毒株通過物理（溫度、射線等）、化學(xué)（醋酸鉈、吖啶黃等）或生物（非敏感動(dòng)物、細(xì)胞、雞胚等）處理，并經(jīng)連續(xù)傳代和篩選，培養(yǎng)而成的喪失或減弱對(duì)原縮主動(dòng)物致病力，但仍保存良好免疫原性和遺傳特性的毒株或從自然界篩選的具有良好免疫原性的自然弱毒株，經(jīng)培養(yǎng)增殖后制備的疫苗。7.類毒素 由有關(guān)細(xì)菌產(chǎn)生的外毒素，用適當(dāng)濃度的甲醛使之脫毒而制成的生物制品。8.抗病血清 為含高效價(jià)特異性抗體的動(dòng)物血清制劑，能用于治療或緊急預(yù)防相應(yīng)病原體所致疾病，又稱被動(dòng)免疫制品。9.免疫原性 刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的能力10. 免疫反應(yīng)原性 與相應(yīng)的應(yīng)

3、答產(chǎn)物在體內(nèi)外發(fā)生特異性結(jié)合的能力11.抗原：一類能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)使之產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)的應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。12.抗原決定族 抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)集團(tuán)，又稱為表位13.免疫球蛋白 是指具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相關(guān)的球蛋白14.抗體（antibody,Ab)是B細(xì)胞識(shí)別抗原后增殖分化為槳細(xì)胞所產(chǎn)生的一種蛋白質(zhì)，主要存在于血清等體液中，能與相應(yīng)抗原特異性地結(jié)合，具有免疫功能。15.抗原遞呈細(xì)胞 在免疫應(yīng)答過程中能夠攝取、加工、處理抗原，并將抗原信息提呈給特異性淋巴細(xì)胞的一類免疫細(xì)胞.16.滅活與滅活劑 微生物學(xué)意義上滅活有兩層面含義：、1、是指破

4、壞或殺死微生物使其成為沒有生命物質(zhì)的過程。2、生物制品上的滅活還有“滅能”的含義，是指將一些活性物質(zhì)（微生物及其代謝產(chǎn)物、激素、酶、血清因子和抗體等）喪失活力的過程。17.保護(hù)劑 生物制品上的保護(hù)劑，又稱穩(wěn)定劑或分散劑，指保護(hù)微生物、寄生蟲等活力和酶、激素、免疫反應(yīng)物等活性的一類物質(zhì)18.佐劑 凡是可以增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)19.細(xì)胞因子是機(jī)體的各種細(xì)胞在其生命周期中所釋放的具有不同生物學(xué)效應(yīng)的物質(zhì)，是免疫細(xì)胞間相互作用的調(diào)節(jié)信號(hào)。20.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是指經(jīng)人工培育，對(duì)其攜帶的微生物實(shí)行控制，遺傳背景明確或來源清楚，用于科學(xué)研究、教學(xué)、生物制品或藥品鑒定以及其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物。21.無菌(ge

5、rm-free，GF)動(dòng)物指動(dòng)物身上不可檢出一切生命體的動(dòng)物。進(jìn)一步說，是指用現(xiàn)有的檢測技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)外的任何部位均檢不出任何微生物和寄生蟲的動(dòng)物22.重組活載體疫苗 用基因工程技術(shù)將保護(hù)性抗原基因（目的基因）轉(zhuǎn)移到載體中使之表達(dá)的活疫苗23.重組亞單位疫苗 將編碼病原微生物保護(hù)性抗原的基因?qū)朐嘶蛘婧思?xì)胞，使其在受體細(xì)胞中高效表達(dá)，分泌保護(hù)性抗原肽鏈，提取保護(hù)性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程重組亞單位疫苗24.基因缺失疫苗 是用基因工程技術(shù)將強(qiáng)毒株毒力數(shù)額基因切除構(gòu)建的活疫苗25.轉(zhuǎn)基因植物疫苗 植物基因工程技術(shù)是把植物基因工程技術(shù)與機(jī)體免疫機(jī)理相結(jié)合，生產(chǎn)出能使機(jī)體獲得特異抗病能力的疫

6、苗。26改型抗體.用鼠源單抗的CDR序列替換人Ig分子中CDR序列，則可使人的Ig分子具有鼠源單抗的抗原結(jié)合特異性?？贵w中鼠源部分比例小，可消除免疫源性。又稱CDR移植抗體27. 單域抗體 抗原與抗體的大部分結(jié)合殘基在VH區(qū)域，少數(shù)在VL區(qū)域，結(jié)合能量主要來自VH鏈。VH是具有結(jié)合抗原特異性的小抗體片段，約為完整分子的1/12，28.悉生動(dòng)物(gnotobiotic animals，GN)也稱已知菌動(dòng)物或已知菌叢動(dòng)物)，是指在無菌動(dòng)物體內(nèi)植入已知微生物的動(dòng)物。必須飼養(yǎng)于隔離系統(tǒng)。根據(jù)植入無菌動(dòng)物體內(nèi)菌落數(shù)目的不同，悉生動(dòng)物可分為單菌、雙菌、三菌和多菌動(dòng)物。29.無特殊病原體動(dòng)物除清潔級(jí)動(dòng)物應(yīng)排

7、除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原.30.IVC 是獨(dú)立通風(fēng)籠盒的簡稱.它的特點(diǎn)是具有一定的密閉性,同時(shí)讓經(jīng)HEPA過濾器的潔凈空氣流入盒內(nèi),使盒內(nèi)保持正壓,減少了可能的感染來源,適合于飼養(yǎng)SPF級(jí)動(dòng)物,以及一些免疫缺陷動(dòng)物31.毒素：有些病原微生物能產(chǎn)生強(qiáng)有力的特殊毒性物質(zhì)，可大大增強(qiáng)微生物的毒害作用，這種毒性物質(zhì)就叫做毒素。毒素分為：32.外毒素：是微生物在生命活動(dòng)過程中產(chǎn)生并釋放或分泌到周圍環(huán)境中的毒素。33.內(nèi)毒素：是指微生物只有在死亡后細(xì)胞破裂時(shí)，才釋放出來的毒性物質(zhì)，稱為內(nèi)毒素。34.抗毒素 類素素免疫動(dòng)物機(jī)體后，由漿細(xì)胞分泌生產(chǎn)的抗體稱為抗毒素35.

8、分子識(shí)別單位 抗體的CDR區(qū)基因編碼蛋白能模擬抗體結(jié)合活性，因此又稱其為分子識(shí)別單位1.抗原的兩種特性: 免疫原性 免疫反應(yīng)原性 2.中樞免疫器官 骨髓 胸腺 法氏囊3.外周免疫器官脾臟 淋巴結(jié) 哈德氏腺 消化道、呼吸道與泌尿生殖道的淋巴小結(jié)4.T細(xì)胞亞群及功能CD4+細(xì)胞：輔助性T細(xì)胞（TH）；誘導(dǎo)性T細(xì)胞（TI）；遲發(fā)性超敏反應(yīng)T細(xì)胞（TD）CD8+細(xì)胞：抑制性T細(xì)胞；細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）5.B細(xì)胞亞群及功能B1：T細(xì)胞非依賴性細(xì)胞B2： T細(xì)胞依賴性細(xì)胞6.免疫應(yīng)答的基本過程致敏階段（抗原識(shí)別階段）：指APC對(duì)抗原性異物的捕獲、加工處理和遞呈以及特異性淋巴細(xì)胞對(duì)遞呈抗原的識(shí)別。反應(yīng)階

9、段（活化、增殖和分化階段）：識(shí)別抗原后的淋巴細(xì)胞在雙信號(hào)刺激及細(xì)胞因子的作用下發(fā)生活化、增值、分化為致敏淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞的階段。效應(yīng)階段：指漿細(xì)胞分泌的抗體和致敏淋巴細(xì)胞釋放效應(yīng)性淋巴因子或直接發(fā)揮特異性細(xì)胞殺傷作用的過程。7.物理學(xué)滅活包括加熱滅活、紫外線滅活和射線滅活等方法。加熱滅活 -最早由Smith等研制豬霍亂滅活菌苗時(shí)提出 -后在研制淋球菌時(shí)（56滅活1小時(shí)）發(fā)現(xiàn)熱滅活容易使菌體蛋白發(fā)生變性，影響免疫原性 -目前，除診斷抗原尚采用外，已經(jīng)基本淘汰紫外線滅活 -效果不夠確實(shí) -曾發(fā)生過經(jīng)紫外線滅活的強(qiáng)毒重新活化的例子 射線滅活 -效果尚不十分清楚8.影響滅活作用的因素1、滅活劑種類2、

10、溫度3、滅活物濃度4、微生物種類與特性5、滅活劑濃度6、pH值7、滅活特內(nèi)的殘物9.凍干原理：1.將含有大量水分的生物活性物質(zhì)先進(jìn)行降溫凍結(jié)成固體2.再在真空和適當(dāng)加溫條件下使固體水直接升華成水汽抽出3.最后使生物活性物持形成疏松、多孔樣固狀物10.凍干技術(shù)特點(diǎn)：（1）.能有效地保護(hù)生物活性 因?yàn)閮龈扇^程都在低溫真空條件下進(jìn)行的，有效地降低了氧分子對(duì)微生物、酶等活性物質(zhì)的作用（2）有利于凍干物質(zhì)的長期保藏而不致變質(zhì) 由于物質(zhì)是在凍結(jié)狀態(tài)下升華干燥的，可將物質(zhì)中95%以上的水分除去 凍干物呈海綿狀結(jié)構(gòu)，體積幾乎不變，加水后能迅速溶解并恢復(fù)原來狀態(tài)11.保護(hù)劑作用機(jī)理：（1）防止活性物質(zhì)失去結(jié)構(gòu)

11、水及阻止結(jié)構(gòu)水形成結(jié)晶而導(dǎo)致生物活性物質(zhì)的損傷；(2)降低細(xì)胞內(nèi)外滲透壓差、防止細(xì)胞結(jié)構(gòu)水結(jié)晶，以保持細(xì)胞的活力；(3)保護(hù)或提供細(xì)胞復(fù)蘇所需的營養(yǎng)物質(zhì)，有利于生活力的復(fù)蘇和迅速修復(fù)自身。12.免疫佐劑的生物作用包括：（1）抗原物質(zhì)混合佐劑注入機(jī)體后，改變了抗原的物理性狀，可使抗原物質(zhì)緩慢地釋放，延長了抗原的作用時(shí)間；（2）佐劑吸附了抗原后，增加了抗原的表面積，使抗原易于被巨噬細(xì)胞吞噬；（3）佐劑能刺激吞噬細(xì)胞對(duì)抗原的處理；（4）佐劑可促進(jìn)淋巴細(xì)胞之間的接觸，增強(qiáng)輔助T細(xì)胞的作用（5）可刺激致敏淋巴細(xì)胞的分裂和漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。故免疫佐劑的作用可使無免疫原性物質(zhì)變成有效的免疫原（6）可提高機(jī)體初

12、次和再次免疫應(yīng)答的抗體滴變；（7）改變抗體的產(chǎn)生類型以及產(chǎn)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，并使其增強(qiáng) 13.佐劑的條件作為一種良好的佐劑，必須具備下列條件：（1） 增加抗原的表面積，并改變抗原的活性基團(tuán)構(gòu)型，從而增強(qiáng)抗原的免疫原性；（2） 佐劑與抗原混合能延長抗原在局部組織的存留時(shí)間，減低抗原的分解速度，使抗原緩慢釋放至淋巴系統(tǒng)中，持續(xù)刺激機(jī)體產(chǎn)生高滴度的抗體；（3） 佐劑可以直接或間接激活免疫活性細(xì)胞并使之增生，從而增強(qiáng)了體液免疫、細(xì)胞免疫和非特異性免疫功能；（4） 良好的佐劑應(yīng)具有無毒性或副作用低的特點(diǎn)。 14.佐劑的免疫作用機(jī)理1、抗原遞呈：抗原分子遞呈給T細(xì)胞的方法2、抗原尋的：抗原傳遞給免疫系統(tǒng)中

13、適當(dāng)效應(yīng)細(xì)胞的效率3、免疫調(diào)節(jié)：任可要以修飾的免疫效應(yīng)細(xì)胞對(duì)抗或表位進(jìn)行加工的機(jī)制。15.獸醫(yī)生物制品菌（毒）種標(biāo)準(zhǔn)（一）來源（歷史）清楚： 菌毒種管理有三種情況：中監(jiān)所的統(tǒng)一保管；各地菌種，由中監(jiān)察院所統(tǒng)一鑒定；委托各單位代管。（二）生物學(xué)特性比較典型：包括菌、毒的形態(tài)特性、培養(yǎng)特征、對(duì)動(dòng)物的病原性特點(diǎn)及引起細(xì)胞病變的特征、生物化學(xué)及免疫學(xué)和血清學(xué)特征等，均應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。（三）血清型相符：注意和地區(qū)流行的病原相符。（四）遺傳性狀穩(wěn)定：注意定期傳代、篩選、純化。（五）反應(yīng)原性與免疫原性優(yōu)良（六）毒力應(yīng)在規(guī)定范圍以內(nèi)16.細(xì)菌的規(guī)?；囵B(yǎng)種子接種 是指菌體增殖培養(yǎng)物。收獲時(shí)間 最佳培養(yǎng)時(shí)間依據(jù)細(xì)菌

14、的生長曲線而定。培養(yǎng)方法1固體培養(yǎng)基表面培養(yǎng)法 用于制備抗原、滅活苗、凍干苗。2液體靜置培養(yǎng)法 需氧菌（深度1/2）和兼性厭氧均可用，厭氧菌（深度3/4），還需加肝塊。3深層通氣培養(yǎng)法 是目前菌苗生產(chǎn)的主要培養(yǎng)法。安裝有自動(dòng)控溫、消泡、調(diào)pH、自動(dòng)控制通氣量、自動(dòng)磁力攪拌等裝置。細(xì)菌接種12h，再通入濾過除菌空氣，并適當(dāng)攪拌分散通入的氣體，以增加培養(yǎng)液中的溶氧量。及時(shí)補(bǔ)充營養(yǎng) 。 4透析培養(yǎng)法 在細(xì)菌培養(yǎng)液與培養(yǎng)基之間隔有一層透析膜，使培養(yǎng)基中高濃度小分子量的營養(yǎng)成分通過透析膜（不能透過大分子的細(xì)菌或毒素）不斷擴(kuò)散到細(xì)菌培養(yǎng)液中，供細(xì)菌生長繁殖，獲得高濃度的細(xì)菌或毒素。17.細(xì)菌的計(jì)數(shù)技術(shù)細(xì)菌

15、性疫苗在制造中，往往需要計(jì)算每毫升所含細(xì)菌的總數(shù)。 1 .活菌計(jì)數(shù)法傾注平板培養(yǎng)法 將被測樣品根據(jù)菌數(shù)含量多少，用普通肉湯或生理鹽水作10倍遞進(jìn)稀釋。分別取其1ml加在滅菌的平皿中，然后取預(yù)先加熱融化且冷至4550，立即搖勻放平，凝固后培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)平皿上長出的菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即為每毫升樣品中含有的活菌數(shù)。平板表面散布法 接種量為0.1ml 瓊脂板的制備 稀釋菌液 接種 培養(yǎng) 計(jì)數(shù) 選擇菌落數(shù)在30300之間的平皿用以計(jì)數(shù)，每個(gè)稀釋度應(yīng)取其菌落平均數(shù)。 活菌數(shù)ml=2個(gè)平板平均菌落數(shù)×10×稀釋倍數(shù)。舉例：在10 稀釋的平板中所得平均菌落數(shù)為78個(gè)。計(jì)算結(jié)果：78

16、5;10×10 =7.8×10 個(gè)活菌ml微量點(diǎn)板計(jì)數(shù)法 接種量為0.02ml2 比濁計(jì)數(shù)法 是對(duì)比細(xì)菌懸液與標(biāo)準(zhǔn)管的濁度，求出大致的菌數(shù)。原理：菌液中含數(shù)多少與其渾濁度成正比。方法：標(biāo)準(zhǔn)比濁法和麥?zhǔn)媳葷峁芊?。?yōu)點(diǎn)：快速簡便應(yīng)用：常用于菌苗及其他生物制劑的生產(chǎn)、細(xì)菌毒力的測定和攻毒量的確定等。標(biāo)準(zhǔn)比濁法比濁管 由國家生物制品檢定部門提供，每套包括一支細(xì)菌比濁標(biāo)準(zhǔn)管、數(shù)支對(duì)照空管和一張比濁用的圖片。比濁方法 將空管拭刷干凈，加入待測菌液1ml。將標(biāo)準(zhǔn)管與待測管并列緊貼在圖片前，使兩管受光均勻，然后透過兩管管壁對(duì)比觀察，目測圖片的清晰度，并將兩管左右換位，反復(fù)對(duì)比。 例如：測定

17、大腸桿菌的菌數(shù)，若1ml菌液加入4ml的生理鹽水后，與標(biāo)準(zhǔn)管的濁度相同，即表示該菌液經(jīng)5倍稀釋后相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)管。大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)管的菌數(shù)相當(dāng)于8億個(gè)ml，故被測菌數(shù)為8×5=40億個(gè)ml。麥?zhǔn)媳葷峁芊ū葷峁艿闹苽?選取口徑和管壁厚薄一致的潔凈試管10支，分別加入1氯化鋇溶液0.5ml，然后加入l濃硫酸溶液99.5ml，使各管總液量為10ml，加塞并用石蠟封固(也可將管口熔封)，保存?zhèn)溆?相當(dāng)于1.5×108細(xì)菌數(shù)/ml) 。比濁方法 比濁方法和計(jì)算方法同標(biāo)準(zhǔn)比濁法。18.病毒的禽胚培養(yǎng)技術(shù)各工序操作要點(diǎn)工序1 禽胚的選擇理想的禽胚是SPF雞胚，常以非免疫雞胚補(bǔ)充。工序2 禽胚的接

18、種前孵育孵化前消毒，溫度37.538.5，相對(duì)濕度50%60%，定時(shí)翻蛋，保證通風(fēng)。孵化45d照蛋檢查，淘汰無精蛋和死胚，孵化至所培養(yǎng)病毒需要的日齡即可接種。工序3 禽胚的接種途徑工序4 禽胚的接種后孵育 接種后，蠟淚封孔，置37下孵化 ，每天照蛋2次以上，通過禽胚的病變初步確定病毒的存在及增殖情況，淘汰24h內(nèi)死胚。 工序5 病毒的收獲 19.影響禽胚培養(yǎng)病毒的因素· 種蛋質(zhì)量· 1.病原微生物；2.母源抗體；3.抗生素· 孵化技術(shù)· 1.溫度 控制在3739.5。有些病毒對(duì)溫度比較敏感，如雞胚接種傳染性支氣管炎病毒后，不應(yīng)超過37；· 2.

19、濕度 雞胚孵化濕度標(biāo)準(zhǔn)為53%57%，水禽胚孵化濕度比雞胚高5%10%；· 3.通風(fēng) 禽胚發(fā)育是需氧量較大，加強(qiáng)通風(fēng)換氣；· 4.翻蛋 及時(shí)翻動(dòng)促進(jìn)發(fā)育等，但因地制宜。· 接種技術(shù) · 通常雞胚發(fā)育到1314日齡，鴨胚發(fā)育至1516日齡，尿囊液含量最高，平均68 ml，羊水12ml。20.培養(yǎng)常用的細(xì)胞上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的染色體和繁殖特性，可分為： 原代細(xì)胞 直接利用新鮮動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶消化、分散，獲得單個(gè)細(xì)胞，如雞胚成纖維細(xì)胞，此細(xì)胞對(duì)病毒的檢測最為敏感，但制備和應(yīng)用不方便。二倍體細(xì)胞（細(xì)胞株） 由原代細(xì)胞或次代細(xì)胞選育出具有特殊生物學(xué)

20、性質(zhì)和標(biāo)記的細(xì)胞，如豬腎細(xì)胞株（PK-15）和乳倉鼠腎細(xì)胞株（BHK-21）等。適用于病毒性生物制品的制備，常用于疫苗生產(chǎn)，安全可靠。 傳代細(xì)胞（非二倍體細(xì)胞系、異倍體細(xì)胞） 指不再保持原來細(xì)胞的二倍體細(xì)胞數(shù)，在體外可以無限傳代的細(xì)胞，如人子宮癌細(xì)胞（HeLa細(xì)胞）和鼠腎腺癌細(xì)胞（RAG細(xì)胞）等。有致癌性，不能用于疫苗生產(chǎn)，多用于病毒的分離鑒定。 21.病毒的動(dòng)物培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物的選擇應(yīng)當(dāng)選擇SPF動(dòng)物。選擇動(dòng)物的條件下：· 選用對(duì)病毒易感性高。· 動(dòng)物健康、體重、年齡盡可能一致，符合培養(yǎng)病毒要求。· 遺傳特性相似，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一致性、準(zhǔn)確性和可比性。· 外

21、購動(dòng)物要了解當(dāng)?shù)貏?dòng)物群健康，飼養(yǎng)及免疫接種情況，接前要經(jīng)過健康觀察，以免誤用帶有病原體動(dòng)物。 22.病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造工序一、雞胚選擇 受精卵必須來自SPF雞群，最低也應(yīng)來源于未用抗生素藥物的非免疫雞。受精卵從孵育至培養(yǎng)全過程應(yīng)保持無菌，接種日齡視病毒而定。工序二、種毒與毒種繼代工序三、接毒與收獲1接毒：接毒途徑和接毒量，視不同病毒不同。2培養(yǎng)3、收獲病毒工序四、配苗 收獲的胚液、胎兒和絨毛尿囊膜乳劑經(jīng)無菌檢驗(yàn)合格后配苗。濕苗：于雞胚液中加青、鏈霉素（每ml5001000u）放置010，冷處理后分裝。凍干苗：按比例加入保護(hù)劑（5%蔗糖脫脂乳）、濾過、加青鏈霉素、分裝、凍干。23.抗血清的作用· 特異性抗血清可提供短期被動(dòng)