激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)講座

1、編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯pptHippocampus neurons expressing GFP編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt熒光顯微鏡LSCM編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯pptNoImage激光掃描共聚焦顯微鏡熒光顯微鏡編輯ppt激光掃描共聚焦顯微鏡中常見(jiàn)的激光器激光掃描共聚焦顯微鏡中常見(jiàn)的激光器 Ar激光器激光器: 458nm, 476nm, 488nm, 514nm HeNe : 543nm,633nm 固體固體激光器激光器(UV): 405nm激光器的特點(diǎn)激光器的特點(diǎn): 1) 方

2、向性好方向性好: 激光基本延直線傳播激光基本延直線傳播 2) 單色性好單色性好 :=10-8nm 3) 高亮度高亮度: 激光方向性好激光方向性好, 其在空間上的能量分布是高其在空間上的能量分布是高 度集中的。度集中的。 4) 偏振性偏振性: 激光為平面偏振光激光為平面偏振光, 光纖耦合光纖耦合編輯pptLeica DM IRBE 倒置熒光顯微鏡編輯ppt編輯pptLSCM物鏡的重要參數(shù) NA編輯ppt編輯ppt編輯ppt 4x 20 x 10 x 40 x 60 x 100 x 編輯ppt編輯ppt編輯ppt分析軟件控制軟件+編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt圖1. 共聚焦顯微鏡簡(jiǎn)化原理

3、圖 用于激發(fā)熒光的激光束用于激發(fā)熒光的激光束(Laser)透過(guò)入射小孔透過(guò)入射小孔(light source pinhole)被二向色鏡被二向色鏡(Dichroic mirror)反射，通過(guò)顯微物鏡反射，通過(guò)顯微物鏡(Objective lens)匯聚后入射于待觀察的標(biāo)本匯聚后入射于待觀察的標(biāo)本(specimen)內(nèi)部焦點(diǎn)內(nèi)部焦點(diǎn)(focal point)處。激光照射所產(chǎn)生的熒光處。激光照射所產(chǎn)生的熒光(fluorescence light)和少和少量反射激光一起，被物鏡重新收集后送往二向色鏡。其中攜帶圖像信息的熒光由于量反射激光一起，被物鏡重新收集后送往二向色鏡。其中攜帶圖像信息的熒光由于波

4、長(zhǎng)比較長(zhǎng)，直接通過(guò)二向色鏡并透過(guò)出射小孔波長(zhǎng)比較長(zhǎng)，直接通過(guò)二向色鏡并透過(guò)出射小孔(Detection pinhole)到達(dá)光電探測(cè)器到達(dá)光電探測(cè)器(Detector)（通常是光電倍增管（通常是光電倍增管（PMT）或是雪崩光電二極管（）或是雪崩光電二極管（APD），變成電），變成電信號(hào)后送入計(jì)算機(jī)。而由于二向色鏡的分光作用，殘余的激光則被二向色鏡反射，信號(hào)后送入計(jì)算機(jī)。而由于二向色鏡的分光作用，殘余的激光則被二向色鏡反射，不會(huì)被探測(cè)到。不會(huì)被探測(cè)到。編輯ppt共軛編輯ppt普通光學(xué)顯微鏡與激光共聚焦顯微鏡的區(qū)別普通光學(xué)顯微鏡與激光共聚焦顯微鏡的區(qū)別編輯pptZXYXY平面編輯pptOptica

5、l sections collected simultaneously at three different excitation wavelengths (488, 568, and 647 nanometers). The specimen is the fruit fly third instar wing imaginal disk. XYXY平面編輯pptXYXY平面timeTime-lapse imaging of a living fruit fly embryo injected with calcium green is presented in Figure 2. The

6、series of images shows the change in distribution of the fluorescent probe over time. 0 s10 s20 s30 s編輯pptPeripheral nervous system of a fruit fly embryo ZXYXY平面編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯ppt編輯pptXenopus oocytes編輯pptCalcium green用細(xì)胞內(nèi)液稀釋Calcium green導(dǎo)入微注射器以20nL/oocyte注射卵母細(xì)胞18C避光放置40分鐘共聚焦顯微鏡觀察編輯ppt編輯ppt編輯pptHEK293 cells expressing PLC-PH-GFPPLC-PH-GFP + H1 receptor LipofactAMINE2000 混合20分鐘混合物孵育細(xì)胞 4-6小時(shí)