平陽(yáng)霉素對(duì)大腸癌的抗腫瘤活性

1、    平陽(yáng)霉素對(duì)大腸癌的抗腫瘤活性        摘要目的：觀察平陽(yáng)霉素(PYM)對(duì)大腸癌的活性。方法：應(yīng)用小鼠結(jié)腸癌26瘤株皮下移植和盲腸原位移植模型及裸鼠移植瘤模型，以1/9半數(shù)致死量(LD50)等毒性劑量觀察PYM的抗瘤活性，并與絲裂霉素C(MMC)和5氟脲嘧啶(5FU)進(jìn)行比較。結(jié)果：PYM對(duì)小鼠移植性結(jié)腸癌的作用明顯較MMC和5FU為強(qiáng)(P<0.01)。兩次實(shí)驗(yàn)結(jié)果：對(duì)盲腸移植瘤，PYM的抑瘤率為97和100，MMC為77和25，5FU均為44；對(duì)皮下移植瘤

2、，PYM的抑瘤率為97和91，MMC為64和25，5FU為46和27。同樣PYM對(duì)裸鼠移植的人結(jié)腸癌HT29的生長(zhǎng)抑制作用也明顯較MMC(P<0.05)和5FU(P<0.01)為強(qiáng)，PYM的抑瘤率為79，MMC為53，5FU僅12。PYM治療組動(dòng)物的骨髓造血細(xì)胞未見(jiàn)減少。結(jié)論：PYM對(duì)小鼠移植性結(jié)腸癌(皮下和盲腸)和裸鼠移植的人結(jié)腸癌的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，在1/9LD50等毒性劑量下，其作用比MMC和5FU強(qiáng)。關(guān)鍵詞平陽(yáng)霉素盲腸腫瘤結(jié)腸腫瘤藥物治療 Antitumor Activity of Pingyangmycin against Colorectal Cancer Den

3、g Yongchuan Zhen Yongsu Zheng Shu et al Cancer Institute of Zhejiang Medical University, Hangzhou Abstract Aim: To evaluate the inhibitory effect of pingyangmycin (PYM )against colorectal cancer. Methods: On the basis of equitoxic dose (1/9 LD50), 26 mice with subcutaneous and cecal implanted tumors

4、 were treated with pingyangmycin mitomycin C (MMC), 5 FU, and the curative effects were compared. Results: On subcutaneous tumor in duplicate experiments, the inhibition rates were 97 and 91 by PYM; 64 and 25 by MMC; 46 and 27 by 5 FU. On cecal tumor, the inhibition rates were 97 and 100 by PYM; 77

5、and 25 by MMC; 44 by 5 FU. Conclusion: At a 1/9 LD50 equitoxic dose, PYM exterts much stronger growth inhibition against colorectal cancer than those of MMC and 5 FU in terms of more extensive necrosis to be found in tumors treated with PYM than those of MMC and 5 FU. These observation indicates tha

6、t PYM is a potent antitumor agent against colorectal cancer. Key Words Pingyangmycin Colorectal neoplasm Chemotherapy 平陽(yáng)霉素(PYM)為臨床常用的抗腫瘤藥物，對(duì)動(dòng)物移植性腫瘤、裸鼠移植的人腫瘤均有明顯的抑制作用，且PYM對(duì)骨髓很少損害，一般不引起白細(xì)胞減少，而且不抑制機(jī)體的免疫功能1。本研究用小鼠移植性結(jié)腸癌(皮下和盲腸移植)、裸鼠移植的人結(jié)腸癌模型觀察平陽(yáng)霉素的療效。1材料與方法1.1癌細(xì)胞系人結(jié)腸癌HT29來(lái)源于腺癌。小鼠結(jié)腸癌26瘤株2,3由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所韓銳

7、教授惠贈(zèng)。1.2藥物平陽(yáng)霉素(PYM)由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所許鴻章教授提供，絲裂霉素C(MMC)為日本協(xié)和發(fā)酵公司產(chǎn)品，5氟脲嘧啶(5FU)為天津人民制藥廠產(chǎn)品。小鼠LD50：PYM為180mg/kg，MMC為9mg/kg，5FU為242mg4。1.3小鼠移植性結(jié)腸癌26盲腸腫瘤實(shí)驗(yàn)治療取68周齡BALB/c小鼠，用乙醚麻醉后，切開(kāi)腹壁和腹膜，在盲腸壁漿膜下注射接種結(jié)腸癌26細(xì)胞100萬(wàn)(0.02ml)，縫合腹膜和腹壁。接種后24小時(shí)隨機(jī)分組并開(kāi)始治療，隔天一次肌肉注射給藥，共10次。末次給藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，剝出腫瘤稱重，計(jì)算抑瘤率。1.4小鼠移植性結(jié)腸癌26皮下腫瘤實(shí)驗(yàn)治療取

8、雌性68周齡BALB/c小鼠，將小鼠結(jié)腸癌26細(xì)胞按每鼠100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞接種于小鼠右腋窩皮下，接種后24小時(shí)隨機(jī)分組并開(kāi)始治療，以后處理同(1.3)。1.5裸鼠移植的人結(jié)腸癌治療實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法參見(jiàn)文獻(xiàn)4。1.6腫瘤組織病理學(xué)觀察檢查各組腫瘤組織切片中未壞死部分腫瘤組織所占的比例和腫瘤細(xì)胞核分裂數(shù)，方法參見(jiàn)文獻(xiàn)4。1.7骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)末次給藥后24小時(shí)，處死動(dòng)物時(shí)取右股骨，計(jì)算每根股骨骨髓的有核細(xì)胞總數(shù)。1.8統(tǒng)計(jì)方法采用F檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。2結(jié)果2.1PYM、MMC和5FU對(duì)盲腸移植的小鼠結(jié)腸癌26的生長(zhǎng)抑制作用比較采用等毒性劑量進(jìn)行比較，在

9、分別相當(dāng)于1/9LD50的劑量下，以實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的盲腸腫瘤重量進(jìn)行比較。兩次實(shí)驗(yàn)結(jié)果：PYM的抑瘤率為97和100，MMC為77和25，5FU均為44。表明PYM對(duì)小鼠結(jié)腸癌盲腸移植瘤的生長(zhǎng)抑制作用明顯較MMC和5FU為強(qiáng)(P<0.01，表1)。表1平陽(yáng)霉素、絲裂霉素C和5氟脲嘧啶對(duì)小鼠結(jié)腸癌生長(zhǎng)的抑制作用實(shí)驗(yàn)組別藥物動(dòng)物數(shù)皮下移植瘤盲腸移植瘤重量(mg)±s抑制率()重量(mg)±s抑制率()對(duì)照9854±151557±112PYM823±1897*14±3097*MMC8311±10564159±43775

10、FU8459±11846310±14844對(duì)照6900±386517±221PYM682±5691*0100*MMC5674±27025388±258255FU6657±32227289±13644各治療組藥物劑量為1/9LD50等毒性劑量*P<0.01，PYM與對(duì)照、MMC和5FU比較2.2PYM、MMC和5FU對(duì)移植皮下的小鼠結(jié)腸癌26生長(zhǎng)抑制作用的比較采用1/9LD50等毒性劑量，兩次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，PYM的抑瘤率為97和91，MMC為64和25，5FU為46和27。表明PYM對(duì)小鼠結(jié)腸癌26的生長(zhǎng)

11、抑制作用也明顯較MMC和5FU為強(qiáng)(P<0.01，表1)。2.3PYM、MMC和5FU對(duì)裸鼠移植的人結(jié)腸癌HT29的抑制作用比較在分別相當(dāng)于1/9LD50劑量下，PYM的抑瘤率為79，MMC為53，5FU僅12。表明PYM對(duì)裸鼠移植的人結(jié)腸癌的生長(zhǎng)抑制作用明顯較MMC(P<0.05)和5FU(P<0.01)為強(qiáng)(表2)。表2平陽(yáng)霉素、絲裂霉素C和5氟脲嘧啶對(duì)裸鼠移植的人結(jié)腸癌HT29生長(zhǎng)的抑制作用藥物動(dòng)物數(shù)腫瘤未壞死腫瘤組織重量(mg)±s抑制率()比例重量(mg)±s抑制率()對(duì)照5804±1730.65*523±116PYM5172

12、±78790.3357±2689MMC5376±17453*0.57*221±10158*5FU5707±16812*0.65*466±9912*各治療組藥物劑量為1/9LD50等毒性劑量與PYM比較，*P<0.05，*P<0.01 2.4病理組織學(xué)檢查2.4.1小鼠結(jié)腸癌26病理組織學(xué)檢查對(duì)照、MMC和5FU組腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，可見(jiàn)腫瘤細(xì)胞從漿膜層穿破肌層，浸潤(rùn)粘膜下層。而PYM組腫瘤細(xì)胞密度較低，未見(jiàn)腫瘤組織浸潤(rùn)到粘膜下層，也未在腸系膜淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)有腫瘤轉(zhuǎn)移。2.4.2PYM、MMC和5FU對(duì)裸鼠移植的人結(jié)腸癌

13、HT29腫瘤細(xì)胞有絲分裂的影響對(duì)照、MMC和5FU組檢查10個(gè)高倍視野中的腫瘤細(xì)胞核分裂數(shù)分別為104±12、130±17和107±12，而PYM組的核分裂數(shù)為53±15，相當(dāng)于對(duì)照組的51，與對(duì)照、MMC和5FU組相比均有明顯差別(P<0.01)。2.4.3PYM、MMC和5FU對(duì)裸鼠移植的人結(jié)腸癌HT29腫瘤組織中未壞死腫瘤組織比例的影響對(duì)照、MMC和5FU組腫瘤細(xì)胞密集，殘存未壞死腫瘤組織所占比例較大，PYM治療組腫瘤出現(xiàn)大片壞死，殘存未壞死部分腫瘤比例明顯減少(P<0.01，表2)。2.5PYM、MMC和5FU對(duì)帶瘤小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)

14、影響的比較在1/9LD50等毒性劑量下，PYM對(duì)結(jié)腸癌26帶瘤小鼠的骨髓造血細(xì)胞無(wú)影響，骨髓有核細(xì)胞數(shù)相當(dāng)于對(duì)照組的93，與對(duì)照組相比無(wú)明顯差別(P>0.05)，而MMC和5FU組骨髓有核細(xì)胞數(shù)均明顯減少，分別相當(dāng)于對(duì)照組的40和43(P<0.01，表3)。表3平陽(yáng)霉素、絲裂霉素C和5氟脲嘧啶對(duì)帶瘤小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)組別藥物劑量（mg/kg）動(dòng)物數(shù)骨髓有核細(xì)胞數(shù)(106/股骨)±s()對(duì)照613±3100PYM20611±285MMC157±254*5FU2767±254*對(duì)照912±3100PYM20812&#

15、177;2100MMC183±125*5FU2784±133*各治療組藥物劑量為1/9LD50等毒性劑量*P<0.013討論大腸癌是目前對(duì)化療藥物較不敏感的腫瘤之一，5FU和MMC被認(rèn)為是治療大腸癌較有效的藥物5。本研究將小鼠結(jié)腸癌26細(xì)胞種植到小鼠盲腸壁漿膜下，使其在盲腸形成實(shí)體瘤，實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組小鼠盲腸均見(jiàn)腫瘤生成，且形成的腫瘤能從漿膜層向粘膜下層浸潤(rùn)，并轉(zhuǎn)移到腸系膜淋巴結(jié)。盲腸移植瘤比皮下移植瘤更接近人大腸癌在體內(nèi)生長(zhǎng)和病變發(fā)展情況及病理改變，該模型更能反映藥物對(duì)大腸癌的治療效果，并兼顧了藥物分布和代謝等因素，是較適用于評(píng)價(jià)藥物療效的大腸癌原位移植模型。本研究證實(shí)

16、PYM不僅對(duì)小鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤而且對(duì)盲腸移植瘤均有非常明顯的生長(zhǎng)抑制作用，在等毒性劑量下，PYM的作用均明顯強(qiáng)于MMC和5FU。在治療組，PYM對(duì)骨髓造血細(xì)胞無(wú)影響，而MMC和5FU出現(xiàn)較明顯的骨髓毒性。本研究用裸鼠腫瘤移植模型將PYM與臨床常用治療大腸癌的藥物進(jìn)行比較，同樣在等毒性劑量下，PYM對(duì)裸鼠移植的人結(jié)腸癌HT29生長(zhǎng)的抑制作用也明顯較MMC和5FU強(qiáng)，并使腫瘤組織出現(xiàn)廣泛壞死。本研究結(jié)果表明PYM對(duì)小鼠移植性結(jié)腸癌以及在裸鼠移植的人大腸癌的生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，同時(shí)對(duì)造血無(wú)明顯影響，提示用PYM治療大腸癌的可能性，尤其適用于機(jī)體免疫和骨髓造血系統(tǒng)受到損害的大腸癌患者的治療。本文

17、課題受國(guó)家自然科學(xué)基金資助(9309001203)作者單位：鄧甬川甄永蘇鄭樹(shù)浙江醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所(杭州市310009)薛玉川中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所參考文獻(xiàn)1 Zhang H,Zhen YS. Pingyangmycin shows no inhibition on the restoration of depressed hemopoiesis and immune function in mice treated with cyclophosphamide. Proc CAMS PUMC,1987;2(4):202 6 2 Van der Wilt CL,Pinedo HM,Sm

18、id K,et al. Elevation of thymidylate synthase following 5 fluorouracil treatment is prevented by the addition of leucovorin in murine colon tumors.Cancer Res,1992;52(18):4922 8 3 Peters GJ,Lankelma J,Kok RM,et al. Prolonged retention of high concentrations of 5 fluorouracil in human and murine tumors as compared with plasma.Cancer Chemother Pharmac