離子色譜法電導(dǎo)檢測(cè)多肽藥物中的三氟乙酸

1、離子色譜法電導(dǎo)檢測(cè)多肽藥物中的三氟乙酸張晨光a，吳方睿b，趙春華ca中國(guó)疾病預(yù)防控制中心營(yíng)養(yǎng)與食品安全所，北京，100021b浙江大學(xué)藥學(xué)院，杭州，310058cCTI華測(cè)檢測(cè)(青島)技術(shù)有限公司，青島，266100摘 要：本文建立了測(cè)定多肽藥物中三氟乙酸的離子色譜分析方法。運(yùn)用該方法，待測(cè)離子在較寬的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.9993)，檢測(cè)限為30 g/L，加標(biāo)回收率在95.7%98.3%之間。方法簡(jiǎn)便易行，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。 關(guān)鍵詞：離子色譜，電導(dǎo)檢測(cè)，多肽藥物，三氟乙酸 三氟乙酸主要用于新型農(nóng)藥、醫(yī)藥和染料等的生產(chǎn)，在材料、溶劑等領(lǐng)域也有較大的應(yīng)用開發(fā)潛力。三氟乙酸主要用于合

2、成多種含三氟甲基和雜環(huán)的除草劑，目前可以合成多種帶有吡啶基、喹啉基的新型除草劑；作為極強(qiáng)的質(zhì)子酸，它廣泛用于芳香族化合物烷基化、?；⑾N聚合等反應(yīng)的催化劑；作為溶劑，三氟乙酸是氟化、硝化及鹵代反應(yīng)的優(yōu)良溶劑，特別是其衍生物三氟乙?；鶎?duì)羥基和氨基的優(yōu)良保護(hù)作用，在氨基酸和多肽化合物合成方面有著非常重要的應(yīng)用,用于多肽合成中除去氨基酸的叔丁氧羰基（t-boc）保護(hù)基【1】。 1 材料與方法 1.1 儀器與試劑 IC6000 離子色譜儀（合肥皖儀科技有限公司）HW2000色譜工作站（上海千譜軟件有限公司）；WY-1自再生抑制器（合肥皖儀科技有限公司）；超純水機(jī)（合肥皖儀科技有限公司）。電導(dǎo)檢測(cè)器

3、（合肥皖儀科技有限公司）；WY-Anion 2型陰離子色譜柱（250 mm× 4.6 mm i.d.，合肥皖儀科技有限公司）；RP 柱（Agela Technologies；）0.22 m有機(jī)濾膜（Agela Technologies）。碳酸鈉（基準(zhǔn)試劑，國(guó)藥集團(tuán)）；乙腈（色譜級(jí)，美國(guó)天地）；試驗(yàn)用二次去離子水（18.2 M）為超純水機(jī)制備。 樣品和為客戶提供。 1.2 色譜條件 WY-Anion 2陰離子分析柱（150 mm × 4.6 mm i.d.），柱溫25；以 2.0 mmol/L Na2CO3為淋洗液進(jìn)行淋洗，流速為1.0 ml/min；WY-1自再生抑制器；電

4、導(dǎo)檢測(cè)池；電流30 mA；進(jìn)樣體積100 L，峰面積定量。 1.3 溶液的配制 2.0 mmol/L Na2CO3：稱取0.2120 g 碳酸鈉基準(zhǔn)試劑，加水溶解，定容至1000 mL，搖勻。三氟乙酸所需濃度均有1000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制而成。 1.4 樣品的制備 精確稱取藥物樣品0.1056g，加入10 ml乙腈，超聲萃取20min，待樣品完全溶解后，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至100 ml容量瓶中，用二次去離子水定容至刻度。 2 結(jié)果與分析 2.1 有機(jī)萃取溶劑的選擇 分別用甲醇、異丙醇和乙腈對(duì)多肽藥物進(jìn)行萃取溶解，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)運(yùn)用甲醇和異丙醇不能將樣品完全溶解，而運(yùn)用乙腈對(duì)樣品進(jìn)行溶解的效果很

5、理想，因此有機(jī)萃取溶劑選擇乙腈。 2.2 色譜條件的優(yōu)化 由于三氟乙酸的保留較弱，因此選擇高容量的離子色譜交換色譜柱WY-Anion 2陰離子分析柱。選用2.0 mmol/L Na2CO3作為淋洗液，可以實(shí)現(xiàn)三氟乙酸與雜質(zhì)離子的基線分離。 2.3 重現(xiàn)性、線性關(guān)系和檢測(cè)限 在選定的色譜條件下，同一天內(nèi)，連續(xù)測(cè)定11次同一濃度待測(cè)離子的溶液的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），以考察其穩(wěn)定性。此時(shí)待測(cè)離子的色譜峰的保留時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別小于0.56%和1.68%；對(duì)連續(xù)5 d 待測(cè)離子的保留時(shí)間和峰面積的RSD分別小于1.06%和2.03%，從而驗(yàn)證了此方法應(yīng)用于待測(cè)離子測(cè)定的穩(wěn)定性和前處理方法的合理性。在較寬的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2=0.9993，檢測(cè)限為 30.0 g/L，保證實(shí)際樣品中待測(cè)離子檢測(cè)的準(zhǔn)確性。 2.4樣品測(cè)定和回收率 對(duì)樣品分別以高中低三個(gè)濃度進(jìn)行了加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，三種樣品的加標(biāo)回收率均在95.7%98.3%之間。圖1為三氟乙酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖。圖2為多肽樣品色譜圖。表1為樣品測(cè)定結(jié)果及回收率數(shù)據(jù)。 3 結(jié)論 離子色譜用于檢測(cè)藥物多肽中的三氟乙酸，方法快速