金屬離子的標(biāo)定

1、金屬離子的標(biāo)定一、溶液配制1、pH5.8 的六次甲基四胺溶液：先配制20%的六次甲基四胺溶液，然后再酸度計(jì)上用6mol·L-1HCl調(diào)至pH5.8。2、0.2%二甲酚橙水溶液10mL。3、0.02mol·L-1EDTA溶液500mL。4、0.02 mol·L-1 Zn標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取在8001000灼燒過（需20min）取適量ZnO于100mL燒杯中，用少量水潤濕，然后逐滴加入1:1HCl，邊加邊攪拌至完全溶解為止。然后移入100mL容量瓶中稀釋至刻度并搖勻。5、EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定：準(zhǔn)確移取20.00mL自制的鋅標(biāo)準(zhǔn)溶液于錐形瓶中，加入1-2滴0.2%

2、的二甲酚橙指示劑，滴加六次甲基四胺溶液使溶液呈紫紅色后，再加入4mL，用EDTA溶液滴定，當(dāng)溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色，即為終點(diǎn)。平行滴定三次，其體積差不超過0.04mL，取平均值，計(jì)算EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。6、PbAc2溶液的配制與標(biāo)定：稱取適量醋酸鉛置于燒杯中加水溶解后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容，搖勻。準(zhǔn)確移取20.00mL上述醋酸鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液于錐形瓶中，加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示劑，滴加六次甲基四胺溶液使溶液呈紫紅色后，再加入4mL，用EDTA溶液滴定，當(dāng)溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色，即為終點(diǎn)。平行滴定三次，其體積差不超過0.04mL，取平均值，計(jì)算醋酸鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。7、0.05M

3、 pH=8.2的Tris-HCl緩沖液。8、配合物中Ni含量的分析 稱取一定量NiCl2，用蒸餾水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，搖勻。準(zhǔn)確移取20mL上述配合物溶液于錐形瓶中，加入2滴1：1鹽酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示劑，滴定20%的六次甲基四胺緩沖液使溶液成紫紅色后，再加入4mL，加入過量的EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液，在室溫下仍為紫紅色，用80水浴加熱至溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色后，再用鋅標(biāo)準(zhǔn)液反滴至溶液呈玫瑰紅色，即為終點(diǎn)。平行滴定三份，其體積差不超過0.04mL，去平均值，計(jì)算金屬離子的準(zhǔn)確含量。9、配合物中Cu含量的分析 稱取一定量CuCl2，用蒸餾水溶解后移入100mL容

4、量瓶中，定容，搖勻。準(zhǔn)確移取20mL上述配合物溶液于錐形瓶中，加入2滴1：1鹽酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示劑，滴定20%的六次甲基四胺緩沖液使溶液成紫紅色后，再加入4mL，加入過量的EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液，溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色后，再用醋酸鉛標(biāo)準(zhǔn)液反滴至溶液呈微紅色，即為終點(diǎn)。平行滴定三份，其體積差不超過0.04mL，去平均值，計(jì)算金屬離子的準(zhǔn)確含量。10、配合物中Zn含量的分析 稱取一定量CuCl2，用蒸餾水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，搖勻。準(zhǔn)確移取20mL上述配合物溶液于錐形瓶中，加入2滴1：1鹽酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示劑，滴定20%的六次甲基四胺

5、緩沖液使溶液成紫紅色后，再加入4mL，用EDTA標(biāo)準(zhǔn)液滴定，溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色，即為終點(diǎn)。平行滴定三份，其體積差不超過0.04mL，去平均值，計(jì)算金屬離子的準(zhǔn)確含量。11、配合物中Co含量的分析 稱取一定量CoCl2，用蒸餾水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，搖勻。準(zhǔn)確移取20mL上述溶液于錐形瓶中，加入10mL30%H2O2，加入2滴1：1鹽酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示劑，滴定20%的六次甲基四胺緩沖液使溶液成紫紅色后，再加入4mL，于80水浴中，用EDTA標(biāo)準(zhǔn)液滴定，溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色，即為終點(diǎn)。平行滴定三份，其體積差不超過0.04mL，去平均值，計(jì)算金屬離子的

6、準(zhǔn)確含量。12、配合物中Mn含量的分析稱取一定量MnCl2，用蒸餾水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，搖勻。準(zhǔn)確移取20mL上述配合物溶液于錐形瓶中，加入2滴1：1鹽酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示劑，滴定20%的六次甲基四胺緩沖液使溶液成紫紅色后，再加入4mL，用EDTA標(biāo)準(zhǔn)液滴定，溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色，即為終點(diǎn)。平行滴定三份，其體積差不超過0.04mL，去平均值，計(jì)算金屬離子的準(zhǔn)確含量。13、配合物中Fe含量的分析稱取一定量FeCl2，用蒸餾水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，搖勻。準(zhǔn)確移取20mL上述配合物溶液于錐形瓶中，加入10mL30%H2O2，加入2滴1：1鹽酸

7、水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示劑，滴定20%的六次甲基四胺緩沖液使溶液成紫紅色后，再加入4mL，加入過量的EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液，溶液由紫紅色變?yōu)榱咙S色后，再用醋酸鉛標(biāo)準(zhǔn)液反滴至溶液呈微紅色，即為終點(diǎn)。平行滴定三份，其體積差不超過0.04mL，取平均值，計(jì)算金屬離子的準(zhǔn)確含量?？寡趸瘜?shí)驗(yàn)方案二、清除DPPH-自由基實(shí)驗(yàn)在1.95mL 56.0M DPPH中加入0.05mL不同濃度的樣品乙醇溶液。在517nm下，每隔5s測一次吸光度AT，直到吸光度值不再下降為止。以1.95mLDPPH乙醇溶液+0.05mL乙醇為空白對(duì)照，吸光度Amax。以1.95mL乙醇+0.05mL樣品的吸光度為A0

8、。以Vc為陽性對(duì)照。清除率%=1 (AT A0)/Amax1、計(jì)算IC50，2、DPPH與抗氧化物質(zhì)化學(xué)當(dāng)量數(shù)的確定確定不同組分與DPPH·反應(yīng)的化學(xué)當(dāng)量數(shù)n（molDPPH/g抗氧化物質(zhì)），計(jì)算出每1g抗氧化物質(zhì)中的活性氫供體數(shù)目：n×6.02×1023個(gè)分子。n=A/lcA為反應(yīng)前和反應(yīng)平衡時(shí)吸光度的差值；為DPPH乙醇溶液的摩爾消光系數(shù)（M-1cm-1），通過DPPH乙醇溶液濃度對(duì)517nm吸光度值曲線斜率求??；l為光程（cm）；c為抗氧化物質(zhì)濃度（g/L或mol/L）。3、DPPH·清除速率常數(shù)的確定根據(jù)公式（3）回歸一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)k1，根據(jù)

9、公式（5）繪制一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)與抗氧化物質(zhì)濃度的曲線，回歸二級(jí)速率常數(shù)k2=dk1/dt（g-1·L·s-1），根據(jù)斜率求取二級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)常數(shù)k2。根據(jù)化學(xué)當(dāng)量數(shù)n、二級(jí)速率常數(shù)k2，和公式（6）確定每個(gè)抗氧化物質(zhì)分子與DPPH·結(jié)合的動(dòng)力學(xué)常數(shù)k2=k2/n（mol-1·L·s-1），k2越大表明該分子越易與DPPH·結(jié)合，清除DPPH·，k2可以評(píng)價(jià)抗氧化物清除DPPH·的效率和速率快慢。一、清除O2-自由基實(shí)驗(yàn)（鄰苯三酚法） 在試管中加入2.8 mL 0.05M pH=8.2的Tris-HCl緩沖液和0.1

10、mL乙醇，于25恒溫水浴中放置20min，然后加入0.1mL 25預(yù)熱的鄰苯三酚溶液(60mmol/L 0.756g鄰苯三酚溶于10mmol/L HCl溶液中制成)，總體積3.0mL，迅速搖勻，倒入比色皿中，在420nm處，每隔0.5min測一次吸光度，此吸光度值記為A1。同時(shí)以不加入鄰苯三酚溶液測一次，記為A0。向2.8 mL 0.05M pH=8.2的Tris-HCl緩沖液中加入不同濃度的0.1mL樣品溶液，于25恒溫水浴中放置20min，然后加入0.1mL 25預(yù)熱的鄰苯三酚溶液，總體積3.0mL，迅速搖勻，倒入比色皿中，在420nm處，每隔0.5min測一次吸光度，此吸光度值記為A3。

11、同時(shí)以不加入鄰苯三酚溶液測一次，記為A4。則：清除率%=1(A3 A4)/ (A1 A2)×100A1不含樣品的吸光度值；A2不含樣品和鄰苯三酚的吸光度值；A3含有樣品的吸光度值；A4含樣品,但不含鄰苯三酚的吸光度值。在總體積為5mL的溶液中加入2.5mL的KH2PO4-NaOH(pH=8.20)緩沖溶液中加入0.5mL不同濃度的配合物（或槲皮素或金屬離子）溶液和1.8mL溶劑，在25電熱恒溫水浴放置20min，加入0.2mL預(yù)熱過的鄰苯三酚(60mmol/L 0.756g鄰苯三酚溶于10mmol/L HCl溶液中制成)引發(fā)反應(yīng)，準(zhǔn)確地反應(yīng)5min后（反應(yīng)在25水浴中進(jìn)行），加入60

12、µL的0.1mol/L Vit C 水溶液終止反應(yīng)，以相應(yīng)的Vit C為空白，于1小時(shí)內(nèi)測定420nm處的吸光度值，其抗氧化能力用清除率表示，清除率越大，抗氧化能力越強(qiáng)，計(jì)算公式：清除率%=1(A3 A4)/ (A1 A2)×100A1不含樣品的吸光度值;A2不含樣品和鄰苯三酚的吸光度值;A3含有樣品的吸光度值;A4含樣品,但不含鄰苯三酚的吸光度值。三、清除·OH 的實(shí)驗(yàn)1、 水楊酸捕獲法10 Nicholas Smirnoff, Quinton J Cumbes. Hydroxyl radical scavenging activity of compatibl

13、e solutesJ. Phytochemistry, 1989, 28(4): 1057-1060.體系中通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH氧化水楊酸產(chǎn)生對(duì)510nm光有特征吸收的2,3-二羥基苯甲酸，通過測定水楊酸捕獲·OH 所得到的產(chǎn)物確定·OH的清除率。3ml反應(yīng)液中含0.15mmol/L FeSO4，6mmol/L H2O2以及不同濃度的樣品溶液，最后加入H2O2 啟動(dòng)反應(yīng)。37溫浴1h 后測定510nm 處的吸光值。吸光值越低，清除·O H 的效果越好。計(jì)算·OH 的清除率：1 (Ai Aio)/ Ao × 100%其中，A

14、i 為含樣品的吸光值，Aio 為不加水楊酸時(shí)樣品溶液的本底值，Ao為對(duì)照，不加樣品溶液。2、Phen-Cu-VC-H2O2 -DNA法鄰啡羅啉(Phen)與金屬Cu2+生成配合物Cu(Phen)22+，再被VC還原成Cu(Phen)2+，與H2O2反應(yīng)生成·OH，生成的·OH 作用于DNA，產(chǎn)生3及5單磷酸酯末端的DNA片斷，伴隨DNA的氧化降解產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。當(dāng)加入受試物后，若受試物具有清除·OH 功能，則可以使發(fā)光強(qiáng)度減弱或發(fā)光時(shí)間推遲，將這一發(fā)光變化用微弱發(fā)光測量儀檢測并記錄。四、R·清除實(shí)驗(yàn)濃乙醇在堿性有氧條件下，通過強(qiáng)紫外線照射產(chǎn)生自由基引發(fā)劑作

15、用于大豆植物油中多不飽和脂肪酸形成R·，產(chǎn)生丙二醛（MDA）。測定MDA的量就可以反映出R·的變化。其反應(yīng)體系包括：50%乙醇，0.01%大豆油，0.1mol/L的FeSO4-EDTA，0.1mol/L的pH8.0 PB緩沖液以及不同濃度的樣品溶液，對(duì)照為蒸餾水。紫外照射30分鐘后加入1mL的20%TCA終止反應(yīng)，加入1.5mL的0.67%TBA，沸水加熱10分鐘后，532nm處測定吸光度。五、抗脂質(zhì)過氧化功能的測定采用亞油酸加速氧化法3測定樣品抗脂質(zhì)過氧化功能。將不同濃度的樣品溶液1mL分別放入具塞試管中，加入5mL 2.5%亞油酸、4mL 0.05mol/L 混合磷酸鹽緩沖液(PB pH=7.0)，置于(40±1)電熱恒溫培養(yǎng)箱中，定時(shí)取樣用硫氰酸鐵(FTC)法測定過氧化物生成量，以吸光值表示。對(duì)照用1mL 無水乙醇代替樣品溶液，用BHT、Vc 作標(biāo)準(zhǔn)抗氧化劑。FTC 法：取(40±1)恒溫培養(yǎng)液0.1mL，分別加入9.7mL 75%乙醇溶液和0.1mL 30%硫氰酸銨，然后再加入0.1mL 0.02mol/L 氯化亞鐵/3.5%鹽酸溶液，準(zhǔn)確反應(yīng)3min，用分光光度計(jì)測定500 nm 吸光度。同時(shí)作一試劑空白吸光值A(chǔ)0。按下式計(jì)算抑制率