器官移植和HLA配型

1、整理課件臨床免疫學(xué)檢驗臨床免疫學(xué)檢驗整理課件 器官移植與器官移植與HLAHLA分型檢測技術(shù)分型檢測技術(shù)整理課件major histocompatibility complex,major histocompatibility complex, MHCMHC主要組織相容性復(fù)合體主要組織相容性復(fù)合體人類白細(xì)胞抗原人類白細(xì)胞抗原h(huán)uman leukocyte antigen,human leukocyte antigen, HLA HLA/ HLA/ HLA復(fù)合體復(fù)合體/ / MHCMHC分子分子 / / MHCMHC抗原抗原整理課件 HLA HLA的的結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)HLA-HLA-類分子類分子HLA-H

2、LA-類分子類分子整理課件整理課件整理課件第第1 1節(jié)節(jié) MHCMHC基因和遺傳特點(diǎn)（復(fù)習(xí)）基因和遺傳特點(diǎn)（復(fù)習(xí)）MHC基因的構(gòu)成基因的構(gòu)成MHC基因的特性基因的特性MHC基因的意義基因的意義整理課件一、一、MHCMHC基因的構(gòu)成基因的構(gòu)成（一）定位（一）定位 第第6號染色體短臂（號染色體短臂（6p21.31） 全長全長3600kb，共有，共有224個基因座位，個基因座位，128個表達(dá)產(chǎn)物。個表達(dá)產(chǎn)物。（二）基因區(qū)（二）基因區(qū) 經(jīng)典經(jīng)典類基因：類基因：B、C、A位點(diǎn)位點(diǎn) 經(jīng)典經(jīng)典類基因類基因 ：DP、DQ、DR位點(diǎn)位點(diǎn)整理課件類基因區(qū)類基因區(qū)HLA復(fù)合體復(fù)合體3600kb長度長度224基因座位

3、基因座位類基因區(qū)類基因區(qū)ACBDRDQDP著絲點(diǎn)著絲點(diǎn)Pq人人6 6號染色體號染色體MHC-類分子類分子MHC-類分子類分子整理課件DPDQDRBCA整理課件二、二、MHCMHC基因遺傳特點(diǎn)基因遺傳特點(diǎn)（一）（一）HLA為高度多態(tài)性基因為高度多態(tài)性基因 MHC基因復(fù)合體是由多個位置相基因復(fù)合體是由多個位置相鄰的基因座位組成，可以編碼相同或相鄰的基因座位組成，可以編碼相同或相似的似的MHC抗原?？乖?。整理課件MHC為共顯性表達(dá)為共顯性表達(dá)整理課件類基因類基因類基因類基因DPDQDRBCA24249 96 6282810106262抗原特異性抗原特異性5595593 381812424126126

4、2323506506276276851851等位基因數(shù)等位基因數(shù)DRBDRBDRADRADQBDQBDQADQADPBDPBDPADPAA AC CB B類基因類基因類基因類基因基因型別基因型別整理課件24249 96 6282810106262抗原特異性抗原特異性5595593 3818124241261262323506506276276851851等位基因數(shù)等位基因數(shù)DRBDRBDRADRADQBDQBDQADQADPBDPBDPADPAA AC CB B類基因類基因類基因類基因基因型別基因型別人群之中所有基因座位等位基因都相同的幾率：人群之中所有基因座位等位基因都相同的幾率： 126

5、23 81 24 559 3 851 276 5061 1019 人群之中人群之中MHCMHC抗原相同的幾率：抗原相同的幾率： 6 9 24 62 10 281 109 整理課件（二）單體型和連鎖不平衡性（二）單體型和連鎖不平衡性意義：器官移植選擇供體順序意義：器官移植選擇供體順序自身自身同卵雙生兄弟姐妹父母親屬無關(guān)人群同卵雙生兄弟姐妹父母親屬無關(guān)人群父母與子女父母與子女完全相同完全相同的幾率：的幾率：父母與子女父母與子女一半相同一半相同的幾率：的幾率：子女間子女間完全相同完全相同的幾率：的幾率：子女間子女間一半相同一半相同的幾率：的幾率：子女間子女間完全不同完全不同的幾率：的幾率： 0 01

6、00%100% 25% 25% 50% 50% 25% 25%1.1.單體型遺傳單體型遺傳整理課件1.1.單體型遺傳單體型遺傳（二）單體型和連鎖不平衡性（二）單體型和連鎖不平衡性2.2.連鎖不平衡性連鎖不平衡性（一）（一）HLAHLA為高度多態(tài)性基因為高度多態(tài)性基因整理課件第第2 2節(jié)節(jié) HLAHLA與器官移植與器官移植整理課件 在三類在三類HLAHLA分子中，分子中，、類分子是觸類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原。次要組織相容性抗原次要組織相容性抗原ABOABO血型抗原系統(tǒng)血型抗原系統(tǒng)其他組織特異性抗原其他組織特異性抗原主要組織相容性抗原主要組織相容性抗原 決定移植決

7、定移植“成敗成敗”的抗原的抗原整理課件 一、器官移植的類型一、器官移植的類型 （1 1）自體移植自體移植（autograftautograft） 皮膚，骨髓，軟骨和骨皮膚，骨髓，軟骨和骨（2 2）同種同基因移植同種同基因移植（syngraftsyngraft） （3 3）同種異基因移植同種異基因移植（allograftallograft） 同種異型移植同種異型移植（4 4）異種移植（）異種移植（xenograftxenograft）整理課件一、同種異型排斥反應(yīng)的識別機(jī)制一、同種異型排斥反應(yīng)的識別機(jī)制受者對受者對T T細(xì)胞對供者的細(xì)胞對供者的MHCMHC分子的直接與間分子的直接與間接識別。接識別

8、。（一）直接識別機(jī)制：（一）直接識別機(jī)制：整理課件整理課件受者受者T T細(xì)胞直接識別的靶結(jié)構(gòu)細(xì)胞直接識別的靶結(jié)構(gòu) 整理課件同種異型抗原的直接識別及其效應(yīng)同種異型抗原的直接識別及其效應(yīng) 整理課件（二）間接識別（二）間接識別受者受者T T細(xì)胞識別受者細(xì)胞識別受者APCAPC加工處理的供加工處理的供者的者的MHCMHC分子分子在急性排斥反應(yīng)中、晚期以及慢性排在急性排斥反應(yīng)中、晚期以及慢性排斥反應(yīng)中起重要作用。斥反應(yīng)中起重要作用。整理課件整理課件 同種異型抗原的間接識別同種異型抗原的間接識別 整理課件整理課件二、二、 同種異型移植排斥反應(yīng)的類型同種異型移植排斥反應(yīng)的類型及效應(yīng)機(jī)制及效應(yīng)機(jī)制（一）宿主抗

9、移植物反應(yīng)一）宿主抗移植物反應(yīng)（host versus graft reaction,HVGRhost versus graft reaction,HVGR）依據(jù)反應(yīng)發(fā)生的時間及病理強(qiáng)度分為：依據(jù)反應(yīng)發(fā)生的時間及病理強(qiáng)度分為：1 1、超急性排斥反應(yīng)（術(shù)后開始至幾個小時）、超急性排斥反應(yīng)（術(shù)后開始至幾個小時）2 2、急性排斥反應(yīng)（術(shù)后幾天至幾周）、急性排斥反應(yīng)（術(shù)后幾天至幾周）3 3、慢性排斥反應(yīng)（術(shù)后數(shù)月至數(shù)年）、慢性排斥反應(yīng)（術(shù)后數(shù)月至數(shù)年）整理課件 超急性排斥反應(yīng)發(fā)生示意圖超急性排斥反應(yīng)發(fā)生示意圖 整理課件（二）移植物抗宿主反應(yīng)（二）移植物抗宿主反應(yīng)（ graftgraft versus

10、host reaction,GVHRversus host reaction,GVHR ）更為嚴(yán)重的一種排斥反應(yīng)更為嚴(yán)重的一種排斥反應(yīng)原因：原因： （1 1）受者與供者）受者與供者HLAHLA不相匹配；不相匹配； （2 2）移植物中成熟的）移植物中成熟的T T細(xì)胞多；細(xì)胞多； （3 3）受者處于免疫功能極度低下的狀態(tài)）受者處于免疫功能極度低下的狀態(tài)常見于：骨髓移植（造血干細(xì)胞移植）、胸常見于：骨髓移植（造血干細(xì)胞移植）、胸腺、脾移植及新生兒接受大量輸血。腺、脾移植及新生兒接受大量輸血。整理課件三、同種異體移植排斥反應(yīng)的防治三、同種異體移植排斥反應(yīng)的防治（一）尋求與受者（一）尋求與受者M(jìn)HCMH

11、C相配的供者組織或器官相配的供者組織或器官 是目前最為有效多見的方法。是目前最為有效多見的方法。1 1、ABOABO血型抗原配型血型抗原配型 2 2、HLAHLA抗原配型抗原配型供者與受者供者與受者HLA-AHLA-A、B B相配的位點(diǎn)越多存活率相配的位點(diǎn)越多存活率越高；越高； 上述的基礎(chǔ)上，上述的基礎(chǔ)上，HLA-DRHLA-DR、DQDQ盡可能的匹配；盡可能的匹配； HLA-DRHLA-DR類型對存活率影響較大。類型對存活率影響較大。整理課件（二）使用免疫抑制藥物（二）使用免疫抑制藥物 1 1、多為抑制、多為抑制T T細(xì)胞藥物細(xì)胞藥物 環(huán)孢菌素環(huán)孢菌素A A（CsACsA），）， FK-50

12、6FK-506、RapamycinRapamycin 2 2、去氧精胍菌素等抗生素類；阻斷、去氧精胍菌素等抗生素類；阻斷T T細(xì)胞的生細(xì)胞的生長周期長周期 3 3、激素、激素 4 4、可溶性、可溶性CKCK受體、抗受體、抗CKCK抗體和抗粘附分子抗體抗體和抗粘附分子抗體 整理課件阻斷協(xié)同刺激信號誘導(dǎo)阻斷協(xié)同刺激信號誘導(dǎo)T T細(xì)胞失能細(xì)胞失能 整理課件（三）誘導(dǎo)對移植抗原的特異性耐受三）誘導(dǎo)對移植抗原的特異性耐受 免疫抑制劑的毒副作用（致死性感染和免疫抑制劑的毒副作用（致死性感染和腫瘤）腫瘤） 理想方法是誘導(dǎo)特異性耐受。新方案：理想方法是誘導(dǎo)特異性耐受。新方案：誘導(dǎo)凋亡；誘導(dǎo)凋亡；誘導(dǎo)誘導(dǎo)T T

13、細(xì)胞無應(yīng)答（細(xì)胞無應(yīng)答（anergyanergy）包括輸入）包括輸入可溶性可溶性CTLA-4CTLA-4及及CD40L-CD40CD40L-CD40、CD2-CD58CD2-CD58等等信息傳遞阻斷。信息傳遞阻斷。整理課件第第3 3節(jié)節(jié) HLAHLA分型檢測技術(shù)分型檢測技術(shù)分子生物學(xué)分型分子生物學(xué)分型血清學(xué)分型技術(shù)血清學(xué)分型技術(shù)細(xì)胞分型技術(shù)細(xì)胞分型技術(shù)2020世紀(jì)世紀(jì)60 60 年代年代2020世紀(jì)世紀(jì)80 80 年代年代2020世紀(jì)世紀(jì)70 70 年代年代整理課件一、血清學(xué)分型技術(shù)一、血清學(xué)分型技術(shù)1.1.原理原理 應(yīng)用一系列已知應(yīng)用一系列已知HLAHLA特異性的特異性的分分型血清型血清與待

14、測的淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過與待測的淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性實驗，來檢測補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性實驗，來檢測HLAHLA抗原特異性。抗原特異性。典型技術(shù)：定型板法（微量細(xì)胞毒實驗）整理課件反應(yīng)結(jié)果測定1.1.染料拒染法染料拒染法臺盼藍(lán)臺盼藍(lán)伊紅伊紅碘化丙啶碘化丙啶7-AAD7-AAD2.2.流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)整理課件死（著染）細(xì)胞（死（著染）細(xì)胞（% %）記分記分結(jié)果判斷結(jié)果判斷0 010101 1陰性陰性111120202 2可疑陰性可疑陰性212150504 4弱陽性弱陽性515180806 6陽性陽性80808 8強(qiáng)陽性強(qiáng)陽性0 0未試驗或不能讀數(shù)未試驗或不能讀數(shù)染料拒染法的判定標(biāo)準(zhǔn)染

15、料拒染法的判定標(biāo)準(zhǔn)整理課件整理課件2.2.血清學(xué)分型可檢測的抗原血清學(xué)分型可檢測的抗原 （SD SD 抗原）抗原）HLA-HLA-類分子類分子: :HLA-HLA-類分子類分子: :B, C , ADR, DQ （B細(xì)胞為靶細(xì)胞）整理課件3.3.方法學(xué)評價方法學(xué)評價操作簡便易行操作簡便易行節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好 無需特殊設(shè)備無需特殊設(shè)備耗時長耗時長不同批號抗血清結(jié)果常有不同不同批號抗血清結(jié)果常有不同優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)缺點(diǎn)整理課件二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)（二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)（LD LD 抗原）抗原）1.1.原理原理混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，檢測細(xì)胞增殖混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，檢測細(xì)胞增殖

16、（mixed lymphocyte culture,MLCmixed lymphocyte culture,MLC）單向單向MLCMLC雙向雙向MLCMLC整理課件陰性分型法陰性分型法 陽性分型法陽性分型法 1. 單向單向MLC刺激細(xì)胞：已知刺激細(xì)胞：已知HLAHLA型別的分型細(xì)胞型別的分型細(xì)胞 （預(yù)處理，使其失去增殖能力預(yù)處理，使其失去增殖能力）反應(yīng)細(xì)胞：受檢者外周血單個核細(xì)胞反應(yīng)細(xì)胞：受檢者外周血單個核細(xì)胞 （具有增殖能力）（具有增殖能力）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化（形態(tài)學(xué)）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化（形態(tài)學(xué)）3 3H-TdR H-TdR 摻入法摻入法MTTMTT還原法還原法整理課件（1 1）陰性分型法）陰性分型法

17、刺激細(xì)胞刺激細(xì)胞 HLA-DP1受者受者T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 +增殖弱增殖弱HLA-DP1HLA-DP1非非HLA-DP1HLA-DP1 增殖強(qiáng)增殖強(qiáng) 純合子細(xì)胞純合子細(xì)胞只表達(dá)只表達(dá)HLA-DP1HLA-DP1 照射處理照射處理整理課件（2 2）陽性分型法）陽性分型法 預(yù)致預(yù)致T T敏細(xì)胞敏細(xì)胞 非非HLA-DP1待測待測B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 +增殖弱增殖弱非非HLA-DP1HLA-DP1HLA-DP1HLA-DP1 增殖強(qiáng)增殖強(qiáng) 刺激細(xì)胞刺激細(xì)胞 HLA-DP1HLA-DP1 除除DP抗原外，其他抗原外，其他 HLA 抗原相同抗原相同照射處理照射處理整理課件2. 雙向雙向MLC 遺傳型

18、不同的兩個個體淋巴細(xì)胞在體外混合遺傳型不同的兩個個體淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者培養(yǎng)時，由于兩者HLAHLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對不同，能相互刺激導(dǎo)致對方淋巴細(xì)胞增殖，故稱雙向方淋巴細(xì)胞增殖，故稱雙向MLCMLC。方法學(xué)評價方法學(xué)評價： 不能分型，但可全面地反應(yīng)供不能分型，但可全面地反應(yīng)供- -受雙方組織相受雙方組織相容性。容性。整理課件三、分子生物學(xué)分型技術(shù)三、分子生物學(xué)分型技術(shù)( (一）基本技術(shù)一）基本技術(shù)1.1.限制性片斷長度多態(tài)性限制性片斷長度多態(tài)性分析分析（restriction fragment length polymorphism,restriction fragment

19、 length polymorphism, RFLPRFLP）2.PCR/SSP2.PCR/SSP3.PCR-SSCP3.PCR-SSCP分型法分型法4.4.序列特異性寡核苷酸序列特異性寡核苷酸- -聚合酶鏈反應(yīng)聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-sequence specific oligonucleotide,PCR-sequence specific oligonucleotide, PCR-SSO PCR-SSO）5.5.基于序列的基于序列的HLAHLA分型法分型法（sequence-based HLA typing,SBTsequence-based HLA typing,SBT） 整理課件芯片技

20、術(shù)芯片技術(shù)原理原理：PCR-SSOPCR-SSO反向斑點(diǎn)或印漬法的微型化。反向斑點(diǎn)或印漬法的微型化。( (二）集成技術(shù)二）集成技術(shù)整理課件（三）（三）PCR-SSCPPCR-SSCP分型法分型法原理：原理：對對ssDNAssDNA進(jìn)行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳，序進(jìn)行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳，序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測出如此可分辨出單一堿基的差異和檢測出DNADNA多態(tài)性或點(diǎn)突多態(tài)性或點(diǎn)突變。變。（單鏈非變性電泳遷移分析）（單鏈非變性電泳遷移分析）整理課件病例介紹病例介紹一例鏈球群

21、感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。男，男，1414歲。首診前歲。首診前3 3個月，感冒發(fā)燒病史。個月，感冒發(fā)燒病史。首次就診原因首次就診原因: :頭痛，乏力，眼瞼浮腫。實驗室檢頭痛，乏力，眼瞼浮腫。實驗室檢查：蛋白尿，尿紅細(xì)胞陽性?？寡装Y治療查：蛋白尿，尿紅細(xì)胞陽性?？寡装Y治療1 1周，稍好，周，稍好，恢復(fù)上學(xué)，正常飲食?；謴?fù)上學(xué)，正常飲食。2 2月后，惡心、乏力，眼瞼浮腫加重，月后，惡心、乏力，眼瞼浮腫加重，2424小時尿量小時尿量減少，蛋白管型。減少，蛋白管型。住院治療住院治療2 2個月，腎臟衰竭加重，每周透析個月，腎臟衰竭加重，每周透析3 3到到4 4

22、次。次?；顧z見腎小球內(nèi)活檢見腎小球內(nèi)CICCIC沉淀，抗人沉淀，抗人IgAIgA、IgGIgG陽性。陽性。建議：申請腎移植手術(shù)。親屬自愿做建議：申請腎移植手術(shù)。親屬自愿做HLAHLA配型，同配型，同時申請自無關(guān)人群尋找供體腎。時申請自無關(guān)人群尋找供體腎。整理課件半年后分配到合適供體腎（無關(guān)人群）；檢查身半年后分配到合適供體腎（無關(guān)人群）；檢查身體，符合手術(shù)要求，進(jìn)行腎臟移植手術(shù)。體，符合手術(shù)要求，進(jìn)行腎臟移植手術(shù)。術(shù)后臨床觀察并服用移植排斥抑制藥物，補(bǔ)充術(shù)后臨床觀察并服用移植排斥抑制藥物，補(bǔ)充EPOEPO。定期到醫(yī)院檢測血藥濃度，檢測免疫功能。定期到醫(yī)院檢測血藥濃度，檢測免疫功能。（移植后（移

23、植后8 8年后生存狀態(tài)良好，但長期服用抗移植排年后生存狀態(tài)良好，但長期服用抗移植排斥藥物。斥藥物。病例介紹病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。整理課件腎臟移植前選擇供者的檢查項目：腎臟移植前選擇供者的檢查項目： 傳染性疾病病原學(xué)檢查傳染性疾病病原學(xué)檢查 ABOABO血型配型血型配型 HLAHLA配型符合要求配型符合要求 供受雙方淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)陰性供受雙方淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)陰性腎源選擇的原則腎源選擇的原則： 以以ABOABO血型完全相同者為好，選擇最佳血型完全相同者為好，選擇最佳HLAHLA配型的配型的供者器官，供者無傳染性疾病。供者器官，供者無傳染性疾病。整理課件移植后的臨床觀測移植后的臨床觀測: :1.1.T T細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8CD4/CD8比值、比值、IL-2IL-2及其受體的檢測，及其受體的檢測，判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評估免疫抑制劑治療效果；判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評估免疫抑制劑治療效果；2.2.必要時做腎組織活