青皮對大鼠急性四氯化碳肝損傷保護(hù)作用的量效關(guān)系

1、青皮對大鼠急性四氯化碳肝損傷保護(hù)作用的量效關(guān)系 作者：金晶，鄭操，林麗，羅德生，劉全志，劉琴【摘要】 目的觀察不同劑量的青皮煎劑對四氯化碳（CCl4）損傷大鼠肝的影響。方法將40只大鼠隨機(jī)分為5組，即正常對照組、模型對照組及青皮煎劑高、中、低劑量組，分別腹腔注射等容積的生理鹽水，生理鹽水及青皮煎劑（ 0.6g /ml，0.4g/ml, 0.2g /ml）。連續(xù)6d，1次/d。末次給藥后，除正常對照組皮下注射生理鹽水外，其他大鼠皮下注射CCl4原液1次，復(fù)制大鼠急性肝損傷模型，檢測大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）活性，并取肝組織作病檢查。結(jié)果不同劑量的青皮煎劑均可

2、明顯降低CCl4致大鼠血清ALT和AST活性升高，并呈明顯的量效關(guān)系。青皮煎劑組大鼠肝組織變性、壞死的程度與模型對照組比較明顯減輕。結(jié)論青皮煎劑對CCl4所致大鼠急性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用和量效關(guān)系。 【關(guān)鍵詞】 青皮 急性肝損傷 保肝作用Abstract：ObjectiveTo observe the effcets of different doses of citri reticulatae viride decoction on CCl4-induced acute liver injury in rats.Methods40 wistar rats were randomly di

3、vided into four groups, namely the normal control group, the model control group, the high, media and low dose treating groups of citri reticulatae viride decoction. They were injected intraperitoneally with physiologic saline and citri reticulatae viride decoction (0.6g/ml . 0.4g/ml and 0.2g/ml) on

4、ce daily for six days respectively. After the last injection, all groups except the normal group, which were injected with physiologic saline, were injected with CCl4 stock solution to induce acute hepatic injury model. The activity level of ALT and AST were detected, and the hepatic tissue were ide

5、ntified by pathology examination.ResultsDifferent doses of citri reticulatae viride decoction could decrease the contents of ALT and AST, and it had obvious dose-effect relationship. Degree of degeneration and necrosis of hepatic tissues of treatment group was obviously lessened compared with the mo

6、del group.ConclusionCitri reticulatae viride decoction plays a very important role in protection against acute liver injury and the effect depends on its doses.Key words：Citri reticulatae viride; Acute hepatic injury; Liver protection青皮，亦稱青桔皮或青柑皮，系蕓香科植物橘citrus reticulate Blanco及其栽培變種的干燥幼果或未成熟果實(shí)的果皮。青

7、皮藥材包括個(gè)青皮、四花青皮1。性味苦、辛、溫，歸肝、膽、胃經(jīng)。具有疏肝破氣，消積人滯之功能，根據(jù)中醫(yī)“肝與膽相表里”的理論，陳艷華等2的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)青皮可使CCl4肝損傷的大鼠膽汁流量增加，并初步觀察到青皮對CCl4損傷大鼠肝功能有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)觀察不同劑量的青皮煎劑對CCl4致大鼠急性肝損傷的影響。1 器材與方法1.1 動物健康的Wistar大鼠，雌雄不拘，體重（23025）g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。1.2 藥材與試劑青皮購自咸寧市藥材公司，經(jīng)本院中醫(yī)學(xué)教研室專家鑒定為四花青皮，按中藥煎劑法制備煎劑，濃縮為1 g/ml生藥，滅菌4存放，用時(shí)微溫，并用滅菌生理鹽水配成所需含量

8、。ALT試劑盒及AST試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號分別為060231，060415），CCl4（上海長江化工廠，AR）。1.3 儀器AEL-200分析天平、TP5000A電子秤均為湘儀天平儀器廠產(chǎn)品，BT815A型半自動生化分析儀為上海三科儀器有限公司產(chǎn)品。1.4 動物分組與處理大鼠40只，隨機(jī)分為5組，即正常對照組（簡稱對照組）、模型對照組（簡稱模型組）和青皮煎劑高、中、低劑量組（簡稱高劑量組、中劑量組、低劑量組），每組8只。對照組和模型組大鼠每日腹腔注射生理鹽水4ml/kg，高、中、低組大鼠腹腔注射青皮煎劑4ml/kg（生藥含量分別為 0.6 ， 0.4，0.2 g/ml），

9、1次/d，連續(xù)6d。于第6天，除對照組皮下注射生理鹽水2ml/kg外，其余大鼠按3給予CCl4，建立急性化學(xué)性肝損傷模型。24h后，用3%戊巴比妥鈉按1ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹主動脈取血，及時(shí)分離出血清，備用。取血后迅速處死動物，取肝組織作病理學(xué)檢查。肝組織用10%甲醛溶液固定，常規(guī)石臘包埋，HE染色，光鏡下觀察組織損傷程度。1 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Spss統(tǒng)計(jì)軟件包處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差（S）表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，p0.05表示有顯著性差異。2 結(jié)果2.1 不同劑量青皮煎劑對CCl4致大鼠急性肝損傷血清酶活性的影響如表1所見，模型組

10、與對照組相比血清ALT，AST活性均有非常顯著差異（P0.001），青皮煎劑高、中、低3個(gè)劑量組均能顯著降低CCl4所致大鼠血清ALT，AST活性的升高，并呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系，與模型組相比均有非常顯著差異（P0.001）。表1 不同劑量青皮煎劑對ccl4致大鼠急性肝損傷血清ALT，AST活性的影響（略）2.2 動物肝組織病檢查鏡下可見正常組大鼠的肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)清晰可辨，核膜清晰、核大而圓。模型組動物肝小葉正常結(jié)構(gòu)被破壞，肝細(xì)胞氣泡樣變，細(xì)胞境界不清，細(xì)胞索解離，細(xì)胞腫脹、混濁，可見較多的點(diǎn)狀、片狀壞死灶，肝組織充血，伴有淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞廣泛浸潤。青皮煎劑高、中劑量組的肝細(xì)胞腫脹

11、、壞死、肝組織充血明顯減輕，有少量的肝細(xì)胞脂肪變性和較少的炎癥細(xì)胞浸潤，肝小葉結(jié)構(gòu)較清晰，而小劑量組大鼠的肝組織充血、肝細(xì)胞壞死及炎癥細(xì)胞浸潤較明顯，亦可見點(diǎn)狀或帶狀壞死。3 討論CCl4是目前常用的復(fù)制動物急性肝損傷模型的經(jīng)典方法，為化學(xué)性肝損傷。該法能準(zhǔn)確反映肝細(xì)胞的功能、代謝及形態(tài)學(xué)變化，重復(fù)性好，肝細(xì)胞受損的最佳基本表現(xiàn)是細(xì)胞質(zhì)膜的損傷4。自由基及自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化是導(dǎo)致CCl4肝損傷的重要因素5。動物體內(nèi)的CCl4經(jīng)細(xì)胞色素P450代謝系統(tǒng)反應(yīng)生成自由基CCl3，后者攻擊肝細(xì)胞膜上的磷脂分子引起脂質(zhì)過氧化，或與肝微粒體脂質(zhì)和蛋白質(zhì)發(fā)生共價(jià)結(jié)合，破壞肝細(xì)胞膜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能的完整性

12、，導(dǎo)致糖原，蛋白質(zhì)合成障礙，從而使ALT、AST釋放入血，造成血清中ALT、AST活性顯著升高6。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛笫笱錋LT、AST活性非常顯著高于對照組，表明本實(shí)驗(yàn)復(fù)制CCl4急性肝損傷模型成功，同時(shí)肝組織病理學(xué)檢查進(jìn)一步證實(shí)CCl4導(dǎo)致肝細(xì)胞的嚴(yán)重?fù)p傷。青皮煎劑高、中、低劑量組動物血清AST、ALT活性均顯著低于模型組，且劑量越大血清酶活性降低越顯著，顯現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。肝組織病理學(xué)變化，也發(fā)現(xiàn)CCl4所致大鼠肝細(xì)胞的變性，壞死的嚴(yán)重程度隨青皮煎劑的劑量增大而減輕。血清酶學(xué)變化和組織學(xué)改變的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均說明青皮煎劑對CCl4致肝組織損傷有明顯的保護(hù)作用，并呈明顯的量效關(guān)系?！尽?1陳紅,劉傳玉,李承晏.青皮的化學(xué)及藥理作用研究進(jìn)展J.中草藥,2001,32(11):10502隋艷華,趙加泉,崔世奎,等.香附、青皮、剌梨、茵陳、西南、獐牙菜對大鼠膽汁分泌作用的比較J.河南中醫(yī),1993,13(1):193羅德生,鄭紅花,羅麗丹,等.黃芩煎劑