實驗一 顯微鏡的結(jié)構(gòu)與使用

1、醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗指導(dǎo)實驗一 顯微鏡的結(jié)構(gòu)與使用由長沙達爾鋒生物科技有限公司整理【文章介紹】實驗是映證理論，對學(xué)生進行基本技能訓(xùn)練和培養(yǎng)科學(xué)研究能力的手段。BioRike博瑞克系統(tǒng)的介紹了14個實驗項目，每個實驗說明實驗?zāi)康模瑢嶒炘?，實驗?nèi)容方法，實驗要求及注意事項，希望廣大師生能夠從中有所收獲。 BioRike簡介：BioRike（中文簡稱“博瑞克”）是長沙達爾鋒生物科技有限公司旗下的產(chǎn)品品牌,由旗下專業(yè)的生命科學(xué)實驗室BioRike博瑞克研發(fā)和生產(chǎn)。BioRike是一家致力于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技實驗室，專門從事以Elisa試劑盒、抗體、細胞因子、免疫檢測試劑盒等免疫學(xué)產(chǎn)品

2、為主的生物試劑的研發(fā)與銷售?！緦嶒?zāi)康摹?.熟悉光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和成像原理。2.掌握普通光鏡的使用方法，尤其是油鏡的正確使用。3.了解暗視野、相差顯微鏡的原理和使用方法?！緦嶒炗闷贰?.器材：普通光學(xué)顯微鏡、暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙。2.標本：細菌革蘭染色玻片標本、普通變形桿菌24h內(nèi)培養(yǎng)液、啤酒酵母新鮮培養(yǎng)的活標本。【內(nèi)容和方法】一、普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用方法微生物是肉眼看不見而必須借助于光學(xué)或電子顯微鏡將其放大數(shù)百乃至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物，因此顯微鏡是認識和研究微生物最重要和最基本的工具之一。因此，掌握其使用方法是進行微生物研究的基本技能。1.普通光鏡的基

3、本結(jié)構(gòu)普通光鏡無論其外觀形狀如何，它都由兩大部分組成，即機械裝置部分和光學(xué)系統(tǒng)部分。機械部分包括鏡座、鏡臂、載物臺及臺上的標本推進器、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換盤以及升降調(diào)節(jié)器等，其主要作用是支撐、固定鏡頭、調(diào)節(jié)物象焦距、擱置和移動標本。光學(xué)系統(tǒng)包括反光鏡、聚光器、物鏡和目鏡。它的作用是收集光源并聚集于標本上，然后通過透鏡放大成像映與眼簾，是肉眼本不能分辨的物體得以清楚觀察（圖1-1）。圖1-1 光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)光學(xué)系統(tǒng)是光學(xué)顯微鏡的核心部分，而物鏡又是其中最重要的部件。一般的光鏡配有3-4個物鏡，有10倍的低倍鏡、40倍的高倍鏡和100倍的油浸鏡（有的配有一個4倍的物鏡頭）。標本的放大主要靠物鏡。為了使

4、用方便，常用紅、黃、藍、白的色圈分別標記物鏡倍數(shù)。另外，在鏡頭上還刻有一些符號和數(shù)值，低倍鏡上刻有10/0.25、160，10指放大倍數(shù)，0.25指鏡口率（N.A），160表示鏡筒長度（mm）。高倍鏡刻有40/0.65和160/0.17，40為放大倍數(shù)，0.65指鏡口率，160表示鏡筒長度，0.17則表示使用時所要求蓋玻片的厚度。油鏡上刻有100/1.25和160/0.17，該數(shù)值也表示放大倍數(shù)、鏡口率、鏡筒長度、蓋玻片厚度，除此之外，油鏡頭上還常刻有一個“油”或“oil”字。2.普通光鏡的使用方法（1）對光和調(diào)焦：首先將顯微鏡平置于實驗臺上，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器使低倍鏡與鏡筒垂直到位（聽到“咔”聲

5、即可），然后將反光鏡凹面對著光源翻動，側(cè)面觀察聚光器明亮或從目鏡觀察視野明亮即說明對光完成。如果此時雖對光較好卻是也不夠明亮?xí)r，應(yīng)檢查聚光器的光圈是否打開，聚光器是否升至最高。對好光后即將標本置于載物臺上的標本夾中（注意標本面向上），先用低倍鏡觀察。用粗調(diào)節(jié)器調(diào)出物像后，再用細調(diào)節(jié)器調(diào)出清晰物像。在換高倍鏡觀察時，由于高倍鏡視野范圍比低倍鏡小，故須先將觀察內(nèi)容移至視野中央后再換之。有時顯微鏡存在偏心現(xiàn)象，此時要記住其偏心的方向和距離。（2）油鏡的原理、使用、保護在免疫學(xué)中主要使用的是油鏡。油鏡是因為在使用時需用香柏油等作介質(zhì)而得名。光學(xué)顯微鏡的放大倍數(shù)與玻璃透鏡的大小有關(guān)。油鏡的透鏡小，鏡孔也

6、小，觀察時由于聚光器聚集的光源要通過載玻片、空氣，才能進入物鏡中。玻璃與空氣的折光率不同，會產(chǎn)生折射，使一部分光線失掉，進入物鏡的光線減少，致使觀察視野暗淡，物像不清。如果使用折射率與玻璃相近的油介質(zhì)，即可減少折射，增加視野亮度，提高分辨率。如圖1-2所示。圖1-2油鏡頭使用原理 最常用的油介質(zhì)為香柏油和石蠟油，其折光率分別為1.515和1.46，與玻璃的折光率1.52相近似（空氣為1）。故可達到上述減少折射，增加光亮度的效果。使用油鏡時應(yīng)先將集光器升至最高，光柵增至最大。轉(zhuǎn)開物鏡鏡頭，在玻片上加一滴鏡油，再轉(zhuǎn)換油鏡頭。眼從側(cè)方看，調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)器，使鏡頭浸入鏡油中，以輕輕接觸玻片為止(注意勿壓碎

7、玻片)。眼看目鏡，調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)器緩慢下降載物臺，看到物像，立即停止，改用細調(diào)節(jié)器調(diào)出清晰物像。觀察結(jié)束后，應(yīng)用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭油鏡頭，再用于擦鏡紙擦去殘存二甲苯。下降集光器，豎起反光鏡，將物鏡鏡頭擺成“八”字型，對號送入鏡盒內(nèi)。二、暗視野顯微鏡和相差顯微鏡簡介觀察暗視野顯微鏡和相差顯微鏡實物或圖片。暗視野顯微鏡是將普通光學(xué)顯微鏡換裝上特制的暗視野聚光器或者在普通光鏡聚光器上加一個中央遮光板改裝而成。使用暗視野聚光器或光板，光線不能通過聚光器的中心部位透入物鏡；而只能從周邊斜射經(jīng)標本反射進入物鏡，因此視野背景是暗的，標本成為亮點。使用暗視野顯微鏡可檢查不經(jīng)染色，在普通顯微鏡下不易看清的活體微生物，如活的細菌、螺旋體等，它的缺點是不能觀察生物體的內(nèi)部結(jié)結(jié)構(gòu)。相差顯微鏡也稱相襯顯微鏡。相差顯微鏡具一個特殊的由環(huán)狀光圈和聚光鏡組合的轉(zhuǎn)盤聚光鏡和一組特別的相差物鏡（內(nèi)裝相位板），能使直射光和繞射光產(chǎn)生干涉，改變其光相與振幅，形成明暗差，增強觀察物體的立體感，并使細胞的內(nèi)部構(gòu)造清晰，因而可觀察活體微生物的形態(tài)及某些內(nèi)部細微結(jié)構(gòu)?！咀⒁馐马棥?.取送顯微鏡時動作要輕，一只手托鏡座，一只手持鏡臂，防止反光鏡、目鏡、物鏡等脫落損壞。2.油鏡用后一定要擦洗，以防止油干影響其使用壽命。注意擦鏡時一定要用專用擦鏡紙。