霉菌和酵母菌檢測

1、霉菌和酵母菌檢測1 設備和材料除微生物試驗室常規(guī)滅菌及培育設備外，其他設備和材料如下：1.1 冰箱：25。1.2 恒溫培育箱：28±1。1.3 均質器。1.4 恒溫振蕩器。1.5 顯微鏡：10×100×。1.6 電子天平：感量0.1g。1.7 無菌錐形瓶:容量500ml、250ml。1.8 無菌廣口瓶：500ml。1.9 無菌吸管：1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)。1.10 無菌平皿：直徑90mm。1.11 無菌試管：10mm×75mm。1.12 無菌牛皮紙袋、塑料袋。2 培育基和試劑2.1 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培育基：見附錄A

2、中A.1。2.2 孟加拉紅培育基：見附錄A中A.2。3 操作方法3.1 試驗前預備3.1.1 將供試品及全部已滅菌的平皿、錐形瓶、勻漿杯、試管、量筒、吸管（1ml、10ml）、稀釋劑等移至操作室內(nèi)。預備好足夠用量，避開操作中出入操作間。3.1.2 開啟無菌室紫外殺菌燈和潔凈工作臺的空氣過濾裝置30min。3.1.3 操作人員用肥皂洗手，關閉紫外殺菌燈，進入緩沖間，換工作鞋，用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手，穿戴好無菌衣、帽、口罩、手套等。 3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作臺面，再用乙醇棉球擦拭供試品瓶、盒、袋等的開口處四周，待干后用滅菌剪刀或鑷子將供試品啟封。 3.2

3、樣品稀釋液的制備依據(jù)供試品的理化特性與生物學特性，實行適宜的方法制備樣品稀釋液。樣品稀釋液制備若需用水浴加溫時，溫度不應超過45。樣品稀釋液從制備至加入檢驗用培育基，不得超過1小時。3.2.1 固體和半固體樣品稱取25g樣品至盛有225ml滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為1:10稀釋液?；蚍湃胧⒂?25ml無菌蒸餾水的均質袋中，用拍擊式均質器拍打2min，制成1:10的樣品勻液。3.2.2 液體樣品以無菌吸管吸取25ml樣品至盛有225ml無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。3.3 霉菌和酵母菌計數(shù)3.3.1 用1ml無菌吸管或微量移

4、液器吸取1:10樣品勻液1ml，沿管壁緩慢注于盛有9ml 稀釋液的無菌試管中（留意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。3.3.2 按3.3.1操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1ml 無菌吸管或吸頭。3.3.3 依據(jù)對樣品污染狀況的估量，選擇2個3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋時，吸取1ml樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1ml空白稀釋液加入兩個無菌平皿內(nèi)作空白對比。3.3.4 準時將15ml20ml冷卻至46的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培

5、育基或孟加拉紅培育基（可放置于46±1恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。3.4 培育待瓊脂凝固后，將平板翻轉，28±1培育5d，觀看并記錄。3.5 菌落計數(shù)肉眼觀看，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colony forming units，CFU）表示。選取菌落數(shù)在10CFU150CFU的平板，依據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌集中生長掩蓋整個平板的可記錄為多不行計。菌落數(shù)應接受兩個平板的平均數(shù)。3.6 結果與報告3.6.1 計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數(shù)計算。3.6.1.1 若全部平板上菌

6、落數(shù)均大于150CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數(shù)，其他平板可記錄為多不行計，結果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。3.6.1.2 若全部平板上菌落數(shù)均小于10CFU，則應按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。3.6.1.3 若全部稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算；如為原液，則以小于1計數(shù)。3.6.2 報告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，接受兩位有效數(shù)字報告。菌落數(shù)大于或等于100時，前3位數(shù)字接受“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)來表示結果；也可用10的指數(shù)形式來表示，此時也按“四舍五入”原則修約，接受兩位有效數(shù)字。稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/ml為單位報告，報告或分別報告霉菌和/或酵母數(shù)。附錄 培育基和試劑1 馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培育基1.1 成分馬鈴薯(去皮切塊) 300g葡萄糖 20.0g瓊脂 20.0g氯霉素 0.1g蒸餾水 1000ml1.2 制法將馬鈴薯去皮切塊，加1000ml蒸餾水，煮沸10min20min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000ml。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121滅菌20min。傾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培育基中2 孟加拉紅培育基2.1 成分蛋白胨 5.0g葡萄糖 10.0g磷酸二氫鉀1.0g硫酸鎂（無水）0.5g瓊脂 20.0