枸杞子多糖提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性研究

1、枸杞子多糖提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性研究                               作者：劉長(zhǎng)建 姜波 劉亮 范圣第【摘要】  目的研究枸杞子多糖的提取及抗氧化活性。方法采用水提法提取枸杞子中的多糖，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)研究了固液比、提取溫度、提取時(shí)間對(duì)枸杞子多糖提取得率的影響

2、，并進(jìn)行了提取次數(shù)實(shí)驗(yàn)。采用羥基自由基、超氧陰離子自由基體系，對(duì)枸杞子多糖的抗氧化活性進(jìn)行了研究，并與維生素C進(jìn)行了比較。結(jié)果確立了水提法提取枸杞子多糖的最佳工藝條件為提取溫度80，固液比130，提取時(shí)間3.5 h，提取2次。當(dāng)多糖濃度達(dá)到229.5 g/ml時(shí)，清除率達(dá)到48.1%，維生素C的清除率為41.2%。對(duì)超氧陰離子自由基的清除率低于維生素C，當(dāng)多糖濃度達(dá)到229.5 g/ml時(shí)，清除率達(dá)到13.5%，維生素C的清除率為48.6%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、環(huán)保，枸杞子中多糖含量為8.34%。枸杞子多糖對(duì)這兩種自由基均有不同的抑制作用。對(duì)羥基自由基的清除率高于維生素C。 【關(guān)鍵詞】 

3、 枸杞子 多糖提取 正交實(shí)驗(yàn) 抗氧化活性枸杞子為茄科（Solanaceae）植物枸杞Lycium chinense Mill的成熟果實(shí)，是我國(guó)傳統(tǒng)的滋補(bǔ)中藥材。本草綱目中記載枸杞子具有堅(jiān)筋骨、補(bǔ)精氣諸不足、明目安神、令人長(zhǎng)壽等功效1。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，植物多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功效，已是當(dāng)前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)25。目前人們對(duì)枸杞子多糖進(jìn)行了較廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)枸杞多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗疲勞、護(hù)肝、防輻射、抗缺氧等功效68，同時(shí)對(duì)多糖的分離與純化進(jìn)行了一些研究9，10，但對(duì)提取的工藝條件研究較少。本文對(duì)影響枸杞子多糖提取因素進(jìn)行了正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選出最佳的枸

4、杞子多糖提取的工藝參數(shù)，同時(shí)進(jìn)行了枸杞子多糖的體外抗氧化活性研究，以期為研究開(kāi)發(fā)枸杞子多糖新的藥物功能及保健食品提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。1    材料與方法1.1   儀器與試劑上海尤尼柯儀器有限公司產(chǎn)WFJ2100型分光光度計(jì)；上海安亭精密儀器廠產(chǎn)TDL80-28臺(tái)式離心機(jī)；所用試劑均為分析純?cè)噭?.2   藥材  枸杞子，原產(chǎn)寧夏，購(gòu)于大連開(kāi)發(fā)區(qū)。1.3   枸杞子多糖的提取圖1  枸杞子提取工藝流程示意圖（略）    準(zhǔn)確稱取已于70烘干并粉碎的枸杞子2 g

5、于三角瓶中，按設(shè)計(jì)好的正交實(shí)驗(yàn)條件在恒溫水浴中進(jìn)行提取，然后將其以4 000 r/min離心18 min，得上清液，經(jīng)濃縮，再加入5倍體積的乙醇，搖勻后，在4冰箱中放置過(guò)夜，以4 000r/min離心20 min。沉淀經(jīng)干燥后得到粗多糖。采用硫酸苯酚法11測(cè)定所提取的枸杞子多糖中多糖含量，然后根據(jù)所用枸杞子的質(zhì)量（2g）出枸杞子中多糖得率。表1  正交水平（略）1.4  體外抗氧化活性122   結(jié)果與討論2.1   枸杞子多糖提取表2  正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）根據(jù)表2的極差分析可見(jiàn)，各因素對(duì)多糖得率的影響順序?yàn)椋築（溫度） C

6、（提取時(shí)間） A（固液比），說(shuō)明在各因素中，水提溫度對(duì)多糖提取率影響最大，然后是提取時(shí)間，最后是固液比。因素A，B以第2水平，C以第3水平為最好。因此，可確定枸杞多糖的提取優(yōu)化條件為A2B2C3，即最佳提取溫度為80，最佳提取時(shí)間為3.5 h，最佳固液比為130。1         表3  不同提取次數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）由表3可以看出，第1次和第2次提取多糖得率較多，而第3次提取多糖得率較少，多糖得率不足0.1%，所以提取次數(shù)可選為2次。2.2   體外抗氧化活性圖1  枸杞子多

7、糖與維生素C清除羥基自由基結(jié)果（略）    由圖1可見(jiàn)，對(duì)羥基自由基的清除作用，枸杞多糖的清除效果要好于等質(zhì)量濃度的維生素C，當(dāng)多糖濃度達(dá)到229.5 g/ml時(shí)，其清除率達(dá)到48.1%,維生素C的清除率為41.2。圖2  枸杞子多糖與維生素C清除超氧陰離子結(jié)果（略）3  結(jié)論    由正交實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)，在影響枸杞子多糖得率3個(gè)主要因素中，溫度的影響最顯著，其次為提取時(shí)間，最后為固液比。由正交實(shí)驗(yàn)可知,枸杞子多糖水浸提法提取的最佳工藝條件為提取溫度80，固液比130，提取時(shí)間3.5 h，提取次數(shù)為2次。在此條件下進(jìn)行實(shí)

8、驗(yàn)，枸杞子多糖得率為8.34%。對(duì)枸杞子多糖抗氧化活性研究表明，枸杞子多糖對(duì)羥基自由基的清除效果較好，其清除率高于維生素C，而對(duì)超氧陰離子自由基的清除率低于維生素C，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，其清除能力不隨多糖濃度的增加而顯著增高?！尽?#160; 1 段昌令,喬善義,王乃利,等.枸杞子活性多糖的研究J.藥學(xué)學(xué) 報(bào)，2001,36(3):196.2 韓果萍,段玉峰.我國(guó)天然活性多糖藥理研究進(jìn)展J.中藥材,2003,26(2):138.3 韋 巍,李雪華.多糖的研究進(jìn)展J.國(guó)外醫(yī)學(xué)·藥學(xué)分冊(cè),2005,32(3):179.4 吳梧桐,高美鳳,吳文俊.多糖的抗腫瘤作用研究進(jìn)展J.天然藥物, 2003,1(3):182.5 王紅英. 中藥多糖研究進(jìn)展J. 實(shí)用醫(yī)技雜志, 2006,13(6):1021.6 朱彩平,張聲華.枸杞多糖對(duì)高脂血癥小鼠血脂及脂質(zhì)過(guò)氧化的影響J.營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2005, 27(1):79.7 蘇 菁,徐宗佩.中藥防治脂肪肝實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006,17(7):1287.8 齊春會(huì),張永祥,趙修南.枸杞粗多糖的免疫活性J.中國(guó)藥與毒理學(xué)雜志，2001,15(3):180.9 羅瓊,閻 俊,張聲華.枸杞多糖的分離純化及其抗疲勞作用J.衛(wèi)生研究，2000,29(2):115.10 張 民,張聲華.枸杞多糖的制備及其結(jié)構(gòu)研究J.食品研