茶多酚對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用

1、茶多酚對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用        【摘要】  目的建立家兔酒精性肝損傷病理模型，探討茶多酚對(duì)酒精性肝損傷的作用。方法家兔分為4組：對(duì)照組，茶多酚低劑量組、中劑量、高劑量組。茶多酚低、中、高組分別灌胃以濃度為10，20，40 mg/ml的茶多酚溶液進(jìn)行治療，實(shí)驗(yàn)期2周。測(cè)定肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量，并取肝組織制作石蠟切片，HE染色，普通光鏡觀察。結(jié)果茶多酚能夠直接降低MDA含量，且中劑量（20 mg/ml）和高劑量（40 mg/ml）能夠有效地清除活性氧和自由基

2、。結(jié)論茶多酚對(duì)酒精性肝損傷有良好的治療和保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】  茶多酚； 肝損傷； 超氧化物歧化酶； 丙二醛        茶多酚是從茶葉中提取的有效成分之一，由多種酚性物質(zhì)組成，是一種多酚類化合物，具有清除自由基和抗氧化等作用的生物活性。Marnewick1也發(fā)現(xiàn)，喂飼綠茶和紅茶的大鼠，其肝組織勻漿中氧自由基濃度明顯下降。本實(shí)驗(yàn)試圖建立酒精性肝損傷病理模型，運(yùn)用茶多酚治療的方法，從組織學(xué)與病的角度研究茶多酚在酒精性肝損傷中起到的治療作用，同時(shí)研究其機(jī)制。1  材料與方法1.1  材料98%的

3、茶多酚15g，超氧化物歧化酶試劑盒（南京建成生物工程公司）、丙二醛試劑盒（南京建成生物工程公司）。1.2 動(dòng)物和分組 3月齡雌性大耳白兔24只，體質(zhì)量11.5 kg，體質(zhì)健康。統(tǒng)一編號(hào)后隨機(jī)分為4組，各組6只，分籠喂養(yǎng)，自由飲水?dāng)z食。1.3  酒精性肝損傷病理模型建立2通過(guò)連續(xù)10d對(duì)4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃50%的酒精5 ml建立酒精性肝損傷模型；同時(shí)，對(duì)照組灌胃生理鹽水，低劑量組灌胃10 mg/ml的茶多酚溶液5ml(相當(dāng)于25mg·kg-1·d-1)治療，中劑量組灌胃20 mg/ml的茶多酚溶液5 ml(相當(dāng)于50 mg·kg-1·d-

4、1)治療，高劑量組灌胃40 mg/ml的茶多酚溶液5 ml(相當(dāng)于100 mg·kg-1·d-1)治療。治療兩周，觀察并作相關(guān)記錄。1.4  觀察指標(biāo)和方法取家兔肝組織制備勻漿液，測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，采用超氧化物歧化酶（SOD）活力試劑盒和丙二醛（MDA）含量試劑盒分別測(cè)定SOD的活力和MDA的含量；同時(shí)對(duì)肝組織常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察并記錄。2  結(jié)果2.1   剖檢變化 解剖前，家兔身體消瘦，食欲不振，體毛蓬松，其中對(duì)照組有2只家兔死亡，低劑量組有1只家兔死亡，高劑量組體重?zé)o明顯變化，能夠正常飲食，

5、毛色光滑雪白。      解剖后，對(duì)照組肝組織質(zhì)地松軟，顏色為土黃色；低劑量組肝組織質(zhì)地較松軟，顏色為土黃色；中劑量組肝組織質(zhì)地輕度松軟，顏色為深紅色；高劑量組肝組織有韌性，顏色為深紅色。1         2.2  肝組織中SOD活力和MDA 含量的變化隨著對(duì)酒精性肝損傷的, 模型組 SOD 活性和MDA 含量都顯著性下降。經(jīng)方差分析，高劑量組和低劑量組SOD的活力與對(duì)照組比差異極顯著，低劑量組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異；高劑量組MDA 含量與對(duì)照組比差異極

6、顯著，中劑量組與對(duì)照組之間差異顯著，低劑量組與對(duì)照組之間無(wú)顯著差異。結(jié)果見(jiàn)表1。表1  肝組織中SOD的活力和MDA的含量（略）2.3  肝組織病理變化光鏡下，對(duì)照組肝組織受損較嚴(yán)重，肝細(xì)胞條索狀不明顯，且雜亂無(wú)章，肝板間隙較小，肝小葉邊緣模糊，界限不清（圖1）。肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，細(xì)胞膜破損，雙核現(xiàn)象較多（圖2）。低劑量組與正常組的變化基本相同（圖34）。茶多酚中劑量組肝小葉邊緣界限清楚，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈發(fā)射狀排列，肝板間隙較大（圖5）。細(xì)胞核雙核較多，細(xì)胞膜完整（圖6）。高劑量組肝細(xì)胞呈有的條索狀，肝板間隙較大（圖7）。細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，雙核現(xiàn)象較少（圖8）。3

7、60; 討論    研究表明，茶多酚清除自由基的能力大大超過(guò)目前已知的抗氧化劑維生素C和維生素E，其抗氧化能力是維生素C的310倍，是維生素E的39倍3。通過(guò)對(duì)組織中SOD活力和MDA含量的測(cè)定可以間接反映出茶多酚清除活性氧與自由基的能力。MDA的測(cè)定常常與SOD的測(cè)定相互配合，SOD活力的高低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。許多研究表明，茶多酚不僅能防護(hù)體內(nèi)抗氧化酶，還能促進(jìn)和調(diào)動(dòng)機(jī)體內(nèi)各種抗氧化酶的活性，生物體內(nèi)的抗氧化酶主要有超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽酶(GSH)和過(guò)氧化氫酶(CAT)。因此，茶

8、多酚對(duì)氧自由基的清除主要表現(xiàn)在能使SOD活性顯著提高，MDA水平顯著降低，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系4。本研究通過(guò)對(duì)酒精性肝損傷家兔動(dòng)物模型進(jìn)行茶多酚治療實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)了肝損傷中相關(guān)酶的活性，發(fā)現(xiàn)肝組織中SOD活力和MDA含量都呈下降趨勢(shì)，茶多酚高劑量組和低劑量組SOD的活力與對(duì)照組比差異極顯著；茶多酚高劑量組MDA含量與對(duì)照組比差異極顯著，中劑量組與對(duì)照組之間差異顯著。說(shuō)明茶多酚能顯著降低肝組織中丙二醛的含量，但不能顯著提升超氧化物歧化酶的活性，此結(jié)果與以往大多數(shù)研究結(jié)果并不完全一致。究其原因，可能與茶多酚抗自由基機(jī)理的多樣性有關(guān)，茶多酚并沒(méi)有提高抗氧化物酶活性和協(xié)同抗氧化物酶清除自由基。對(duì)于肝臟的損害，

9、主要是氧自由基形成的脂質(zhì)過(guò)氧化引起的。鐵離子能促使氧自由基生成，催化脂質(zhì)過(guò)氧化物裂解，引發(fā)新的脂質(zhì)過(guò)氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，而茶多酚能有效絡(luò)合鐵離子與低分子鐵結(jié)合成配合物，促使低分子鐵排出體外，從而減少自由基的形成5，6，說(shuō)明茶多酚可以自身直接清除組織細(xì)胞中的MDA，因此隨著茶多酚的濃度不斷增高，MDA的含量逐漸降低。通過(guò)此途徑減輕自由基對(duì)機(jī)體的損傷可能是造成本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要原因。另一方面，通過(guò)組織學(xué)的觀察發(fā)現(xiàn)隨著灌喂的茶多酚濃度的增加，肝組織的受損程度就越低。其中中劑量和高劑量的濃度對(duì)該病理現(xiàn)象起到了很好的治療效果。    綜上所述，茶多酚有眾多的生物學(xué)活性，本研究表明茶

10、多酚對(duì)家兔酒精性肝損傷有一定的預(yù)防和治療效果，具有廣泛的臨床應(yīng)用價(jià)值，但其機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究?！尽?#160; 1Marneurick. The inhibition of mitochondrial peroxidation by ubiquinone and ubiquinolJ.The Journal of Biological Chemistry，1966，2 41(19):4353.2杜施霖,遲寶榮.酒精性肝損傷動(dòng)物模型的研究J.白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,27(6):682.3龔盛昭,葉孝兆,駱雪萍.利用廢茶制備茶多酚護(hù)膚霜的研究J.廣西化工,2002,31(1):12.4李春美,謝筆鈞,姚 平.茶色素體外清除氧自由基及對(duì)老齡