夏桑菊顆粒分析方法確認(rèn)方案

1、GMP文件 編號(hào)：T/YZK-AF-030-00技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)/驗(yàn)證規(guī)程分析方法確認(rèn)方案產(chǎn)品名稱： 夏桑菊顆粒 驗(yàn)證類型： 確 認(rèn) 部 門(mén)： 質(zhì)量部 廣明制藥牛黃解毒片分析方法確認(rèn)報(bào)告編號(hào)：T-YZK-AP-001-00 目 錄1.概述2.確認(rèn)目的3.適用范圍4.確認(rèn)小組成員與職責(zé)5.確認(rèn)方案的起草與審批6.確認(rèn)內(nèi)容6.1確認(rèn)相關(guān)文件材料檢查6.2鑒別試驗(yàn)的確認(rèn) 6.3含量測(cè)定的確認(rèn) 7.偏差處理8.確認(rèn)的結(jié)果與評(píng)價(jià)報(bào)告9.再驗(yàn)證周期10.參考文獻(xiàn) 驗(yàn)證方案簽字表：起草人審核人批準(zhǔn)人起草時(shí)間審核時(shí)間批準(zhǔn)時(shí)間1.概述夏桑菊顆粒收載于中國(guó)藥典2015年版一部，鑒別（1）、鑒別（2）、鑒別（3）、指紋圖譜

2、及迷迭香酸含量測(cè)定項(xiàng)下的檢驗(yàn)方法已改變 ，為確保方法的準(zhǔn)確性和可行性，為日常檢測(cè)方法提供依據(jù)，因此按照2010新版GMP要求，需要進(jìn)行分析方法確認(rèn)。方法驗(yàn)證必須按照驗(yàn)證方案進(jìn)行，此次驗(yàn)證方案包括：專屬性、精密度、線性、范圍、準(zhǔn)確度，本確認(rèn)方案使用薄層色譜法對(duì)鑒別檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，再使用高效液相色譜儀對(duì)含量測(cè)定的檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，證明此方法在本公司實(shí)驗(yàn)室的適用性。1.1確認(rèn)方式 按中國(guó)藥典2015年版一部修訂版及2010年版藥品GMP指南質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室與物料系統(tǒng)分析方法確認(rèn)要求進(jìn)行驗(yàn)證。2.確認(rèn)目的  建立夏桑菊顆粒鑒別（1）、鑒別（2）、鑒別（3）、指紋圖譜及迷迭香酸含量測(cè)定方法的確

3、認(rèn)方案，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格按照中國(guó)藥典2015年版一部操作步驟實(shí)行，確保試驗(yàn)結(jié)果真實(shí)可信，以確認(rèn)夏桑菊顆粒按中國(guó)藥典2015年版一部測(cè)定的方法是否適用于本實(shí)驗(yàn)室。3.適用范圍   適用于本公司的鑒別（1）、鑒別（2）、鑒別（3）、指紋圖譜及迷迭香酸含量測(cè)定項(xiàng)下的檢驗(yàn)方法確認(rèn)。4. 確認(rèn)小組成員與職責(zé)部門(mén)及職務(wù)姓名確認(rèn)工作中職責(zé)QC檢驗(yàn)員執(zhí)行確認(rèn)方案；負(fù)責(zé)驗(yàn)證過(guò)程中相關(guān)的檢驗(yàn)操作，收集整理數(shù)據(jù)，起草確認(rèn)報(bào)告。QA監(jiān)督員負(fù)責(zé)確認(rèn)全過(guò)程的監(jiān)控。質(zhì)量保證部負(fù)責(zé)確認(rèn)方案及確認(rèn)報(bào)告的審核；審核確認(rèn)過(guò)程中發(fā)生偏差的解決方案，以及采取糾正措施。QC主任負(fù)責(zé)起草確認(rèn)方案，并組織實(shí)施確認(rèn)工作，及

4、整理確認(rèn)報(bào)告。質(zhì)量負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)確認(rèn)方案、報(bào)告的批準(zhǔn)及確認(rèn)過(guò)程中的協(xié)調(diào)工作5、人員培訓(xùn)情況序號(hào)1234參與人員是否已培訓(xùn) 是 否是 否是 否是 否培訓(xùn)情況合格 不合格合格 不合格合格 不合格合格 不合格確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.確認(rèn)內(nèi)容6.1確認(rèn)相關(guān)文件材料檢查6.1.1對(duì)照品和樣品：名稱批號(hào) 來(lái)源 儲(chǔ)存條件 迷迭香酸對(duì)照品 蒙花苷對(duì)照品夏枯草對(duì)照藥材 野菊花對(duì)照藥材 桑葉對(duì)照藥材 夏桑菊顆粒 確認(rèn)人確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日 6.1.2確認(rèn)前，對(duì)與此次確認(rèn)相關(guān)的文件進(jìn)行檢查（見(jiàn)下表）文件名稱文件編號(hào)是否現(xiàn)行文本檢驗(yàn)方法驗(yàn)證（確認(rèn)）管理規(guī)程 M/ZL-QC038-0

5、5 AE240型電子天平標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程W/SOP-ZL-QC10-023-05AE240型電子天平維護(hù)保養(yǎng)及清潔標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程W/SOP-ZL-QC11-023-05高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程W/SOP-ZL-QC10-022-05高效液相色譜儀維護(hù)保養(yǎng)及清潔標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程W/SOP-ZL-QC11-022-05夏桑菊顆粒檢驗(yàn)操作規(guī)程 W/SOP-ZL-06-C18-02 夏桑菊顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) T/ZLB-06-C18-02 確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日確認(rèn)人： 年 月 日 6.1.3試劑：無(wú)水乙醇 石油醚（30-60） 甲醇 環(huán)己烷 乙酸丁酯 異丙醇 甲酸 正己烷 三氯化鋁 乙酸乙酯、均為分析純。6.1

6、.4可接受標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)照品、試液、試劑與試藥符合驗(yàn)證要求且在效期內(nèi)；所有文件都應(yīng)為現(xiàn)行版本，且經(jīng)過(guò)批準(zhǔn)6.2.鑒別（1）的確認(rèn)：6.2.1 專屬性 6.2.1.1取本品10g，研細(xì)，加無(wú)水乙醇30ml，超聲處理30分鐘，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取夏枯草對(duì)照藥材0.5g,加水50ml，煎煮30分鐘，過(guò)濾，濾液用石油醚（30-60）振搖提取2次，每次25ml，棄去石油醚液，水層蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作對(duì)照藥材溶液。再取迷迭香酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各2-4l分別點(diǎn)

7、于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-異丙醇-甲酸（15：3:3.5:1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，在紫外光（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。6.2.1.2空白樣品的制備：稱取未加夏桑菊稠膏的供試品 0.2 g，加無(wú)水乙醇30ml，充分振搖溶解，作為空白樣品溶液。同上述普通樣品的制備的方法進(jìn)行點(diǎn)板、展開(kāi)劑顯色。 6.2.1.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：普通樣品的色譜圖中，主成分的斑點(diǎn)與其它干擾物的斑點(diǎn)均應(yīng)完全分離，互不干擾；空白樣品的色譜圖中，應(yīng)無(wú)其它干擾物的斑點(diǎn)影響。結(jié)果見(jiàn)下表。確認(rèn)內(nèi)容 標(biāo)準(zhǔn)要

8、求 檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果評(píng)價(jià)專屬性 被測(cè)物的斑點(diǎn)應(yīng)得到良好分離確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.2.鑒別（2）的確認(rèn)：6.2.2專屬性 6.2.2.1取野菊花對(duì)照藥材1g，加無(wú)水乙醇20ml，超聲處理30分鐘，過(guò)濾，濾液濃縮至2ml，作為對(duì)照藥材溶液。另取蒙花苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法操作規(guī)程試驗(yàn)，吸?。ㄨb別1）項(xiàng)下的供試品溶液及上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（5:3:3:)5以下放置過(guò)夜的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，揮干，在紫外光（365nm）下檢視。供試品色譜

9、中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。6.2.2.2空白樣品的制備：稱取未加夏桑菊稠膏的供試品約0.2g，加無(wú)水乙醇30ml，充分振搖溶解，作為空白樣品溶液。同上述普通樣品的制備的方法進(jìn)行點(diǎn)板、展開(kāi)劑顯色。 6.2.2.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：普通樣品的色譜圖中，主成分的斑點(diǎn)與其它干擾物的斑點(diǎn)均應(yīng)完全分離，互不干擾；空白樣品的色譜圖中，應(yīng)無(wú)其它干擾物的斑點(diǎn)影響。結(jié)果見(jiàn)下表。確認(rèn)內(nèi)容 標(biāo)準(zhǔn)要求 檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果評(píng)價(jià)專屬性 被測(cè)物的斑點(diǎn)應(yīng)得到良好分離確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.2.鑒別（3）的確認(rèn)：6.2.3專屬性 6.

10、2.3.1取桑葉對(duì)照藥材1g，加水100ml，煎煮1小時(shí)，濾過(guò)，濾液蒸至近干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇10ml，超聲處理10分鐘，濾過(guò)濾液濃縮至2ml，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法操作規(guī)程試驗(yàn)，吸取（鑒別1）項(xiàng)下的供試品溶液及上述兩種溶液各2ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（12:8:1:)為展開(kāi)劑，在相對(duì)濕度60以下展開(kāi)，取出，晾干，放置30分鐘，在紫外光（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。 6.2.3.2空白樣品的制備：稱取未加夏桑菊稠膏的供試品 約 0.2 g，加無(wú)水乙醇30ml，充分振搖溶解，作為空白樣品溶液。同上

11、述普通樣品的制備的方法進(jìn)行點(diǎn)板、展開(kāi)劑顯色。 6.2.3.3可接受標(biāo)準(zhǔn)：普通樣品的色譜圖中，主成分的斑點(diǎn)與其它干擾物的斑點(diǎn)均應(yīng)完全分離，互不干擾；空白樣品的色譜圖中，應(yīng)無(wú)其它干擾物的斑點(diǎn)影響。結(jié)果見(jiàn)下表。確認(rèn)內(nèi)容 標(biāo)準(zhǔn)要求 檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果評(píng)價(jià)專屬性 被測(cè)物的斑點(diǎn)應(yīng)得到良好分離確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.3.指紋圖譜 照高效液相色譜法操作規(guī)程測(cè)定。6.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，以1%醋酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；流速為每分鐘0.9ml；柱溫為35；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm。理論板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2

12、0 000。 時(shí)間（分鐘） 流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%） 050 833 9267 5051 338 6792 5160 8 92 6.3.2參照物溶液的配制 取綠原酸對(duì)照品，迷迭香酸對(duì)照品和蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每1ml含綠原酸25ug迷迭香酸15ug和蒙花苷25ug的溶液，即得。6.3.3測(cè)定法 分別精密吸取參照物溶液和（含量測(cè)定）項(xiàng)下的供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄60分鐘色譜圖，即得。6.3.4.結(jié)果判斷：供試品指紋圖譜中，應(yīng)分別呈現(xiàn)與參照物色譜保留時(shí)間相應(yīng)的色譜峰。按中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算560分鐘的色譜峰，供試品指紋圖譜與對(duì)照指紋圖

13、譜的相似度不得低于0.90。結(jié)果見(jiàn)下表檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)要求測(cè)試結(jié)果結(jié)果評(píng)價(jià)備注指紋圖譜的相似度相似度應(yīng)大于0.90附圖譜圖確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.4含量測(cè)定（迷迭香酸）6.4.1回收率試驗(yàn)1）色譜條件：色譜柱：C18柱；以乙腈：1%醋酸(19：:81)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為329nm。理論板數(shù)按迷迭香酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。2）對(duì)照品溶液的制備：取迷迭香酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含25ul的溶液，即得。3）供試品溶液的制備：取同一批已知含量的供試品，研細(xì)，共稱取6份，每份稱取樣量為規(guī)定取樣量的約50%（約0.62）g，精密稱定，置具塞錐形瓶中。再分別精密加入

14、迷迭香酸對(duì)照品約3.0mg（直接加入），精密加入75%甲醇25ml，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。4）測(cè)定法：分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20ul,注入液相色譜儀，測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表：5）可接受標(biāo)準(zhǔn)：將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率。要求：各濃度下的平均回收率均為98.0%102.0%，6個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)2.0?；厥章?=檢出率 樣品含量×100%對(duì)照品取樣量迷迭香酸回收率試驗(yàn)結(jié)果編號(hào)取樣量（g）樣品含量（mg）對(duì)照品加入量（mg）檢出率（mg）回收率（%）平均回收

15、率（%） RSD（%）123456結(jié)果評(píng)價(jià) 確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.4.2.重復(fù)性1）供試品的制備：取100%處方量的供試品取約1.25g，精密稱定，置具塞錐形瓶中。精密加入75%甲醇25ml，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。2）測(cè)定法：吸取供試品溶液10ul,注入液相色譜儀，按上述色譜條件中連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表。3）可接受標(biāo)準(zhǔn)：采用6次的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%. 序號(hào)主份名峰面積平均值RSD%123456 迷迭

16、香酸 綜合評(píng)價(jià) 確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.4.3.穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、1、3、7、13小時(shí)進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)下表 附圖： 放置時(shí)間 迷迭香酸對(duì)照品平均峰面積RSD（%）0小時(shí)1小時(shí)3小時(shí)7小時(shí)13小時(shí) 結(jié)果評(píng)價(jià) 確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.4.4專屬性1）普通樣品的制備：取重復(fù)性項(xiàng)下處理得的樣品作為的供試品溶液。2）空白樣品的制備：稱取未加迷迭香酸的供試品約1g，按上述供試品的制備方法進(jìn)行處理樣品。3）測(cè)定法：按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，吸取普通樣品和空白樣品各20ul,各進(jìn)樣1次，注入液相色譜儀中，進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)

17、果見(jiàn)下表。4）可接受標(biāo)準(zhǔn)：色譜圖中，各主份應(yīng)分離良好，空白樣品無(wú)干擾。檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)要求測(cè)試結(jié)果結(jié)果評(píng)價(jià)備注專屬性色譜峰應(yīng)分離良好，無(wú)干擾附圖譜圖確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日6.4.5線性關(guān)系考察 分別精密量取迷迭香酸對(duì)照品 mg/ml甲醇溶液（1、2、3、4、5、6mL），分別加入75%甲醇制備成濃度為 、 、 、 、 、 ug/mL的對(duì)照品溶液。各精密吸取10uL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。以迷迭香酸對(duì)照品的濃度（ug/mL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。可接受標(biāo)準(zhǔn)：相關(guān)系數(shù)R 應(yīng)大于0.999。結(jié)果見(jiàn)下表 附標(biāo)準(zhǔn)曲線表。 濃度（ug/mL）C峰面積A回歸方程為A相關(guān)系數(shù)R結(jié)果評(píng)價(jià) 確認(rèn)確認(rèn)人： 年 月 日復(fù)核人： 年 月 日 7.偏差處理確認(rèn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格按照本確認(rèn)