Agilent高效液相驗證

1、編號：STP-YZ-HY-004-00檢測儀器驗證報告Agilent1200高效液相色譜儀浙江花園藥業(yè)有限公司1概述：高效液相色譜法(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)是一種現(xiàn)代液相色譜法，其基本方法是用高壓輸液泵將流動相泵入到裝有填充劑的色譜柱，注入的供試品被流動相帶入柱內(nèi)進行分離后，各成分先后進入檢測器，用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖并進行數(shù)據(jù)處理，得到測定結果。由于應用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點。1.1 設備的描述本公司所用的高效液相色譜儀是由在線脫泡機、四元泵、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢

2、測器以及相關管路等組成，主要是針對本公司所有適用高效液相色譜法分析的各種產(chǎn)品而購入的，該設備現(xiàn)安裝于QC三樓儀器室(三)。設備名稱：高效液相色譜儀型號：Agilent-1200生產(chǎn)廠商：USAAgilentTechnologies1.2 設備檔案資料名稱編號存放地點1.3儀器備件備件名稱提供廠家或型號數(shù)量存放地點1.4維修服務單位名稱聯(lián)系人地址電話1.5設備選擇標準依據(jù)來源與驗證標準1.5.1 JJG705-2002液相色譜儀檢定規(guī)程1.5.2 中國藥典2005年版1.5.3 Agilent-1200高效液相色譜儀操作和維護保養(yǎng)規(guī)程(SOP-QC-GY-032-00)2驗證目的：為了確保Agi

3、lent-1200高效液相色譜儀的設計符合要求，為了確保使用該儀器的所檢測數(shù)據(jù)真實可靠，為了確保該儀器的各項指標能達到該儀器所設計的性能指標。3參與驗證的相關部門及其職責3.1 驗證小組3.1.1 負責驗證方案的審批；3.1.2 負責驗證數(shù)據(jù)及結果的審核；3.1.3 負責驗證報告的審核；3.1.4 負責驗證周期的確認；3.1.5 負責發(fā)放驗證證書；3.2 工程部3.2.1 負責設備的安裝、調(diào)試，并做好相應的記錄；3.2.2 負責建立設備檔案；3.2.3 負責擬定驗證周期；3.2.4 負責收集預、安裝確認的試驗記錄；3.3 質(zhì)量管理部3.3.1 負責對驗證參數(shù)要求進行確認；3.3.2 負責根據(jù)檢

4、驗結果出具檢驗報告單；3.3.3 負責儀器、儀表的校驗；3.3.4 負責起草設備操作、清潔和維護保養(yǎng)等方面的標準操作規(guī)程；3.3.5 負責設備日常的維護保養(yǎng)工作；4驗證內(nèi)容4.1 四元泵4.1.1 泵的耐壓性將儀器各部分連接好，以100%甲醇為流動相，流量為1ml/min,按Agilent-1200高效液相色譜儀操作和維護保養(yǎng)規(guī)程啟動儀器，壓力平穩(wěn)后保持10min,用濾紙檢查各管路接口處應無濕跡，卸下色譜柱，堵住泵出口端（壓力傳感器以下），使壓力達到最大允許值的90%,保持5min應不漏液；壓力最大允許值泵壓力是否漏液結果檢查人/日期：復核人/日期:4.1.2 泵流量設定值誤差Ss、流量穩(wěn)定性

5、誤差Sr流里設止值（ml/min）0.51.02.0測量次數(shù)333流動相收集時間1055允許誤差Ss5%3%2%sr3%2%2%注：最大流量的設定值可根據(jù)用戶使用情況而定。對特殊的、流量小的儀器，流量的設定可根據(jù)用戶使用情況選大、中、小三個流量，流動相的收集時間則根據(jù)情況適當?shù)目s短或延長。啟動儀器，按上表的要求設定流量，壓力穩(wěn)定后，在流動相出口處用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，收集上表規(guī)定時間流出的流動相，在分析天平上稱重，按式（1）、（2）計算SsSr,結果記錄在下表中；流星(ml/min)次數(shù)W1W2W2-W1SsSr0.51231.01232.0123注：Ss=(Fm

6、-Fs)/FsX100%式(1)Sr=(Fmax-Fmin)/Fm><100%式（2）式中：FmFm=(W2-Wi)/(P?t),流量實測值，ml/min;W2容量瓶+流動相的質(zhì)量，g；W1容量瓶的質(zhì)量，g；試驗溫度下流動相的密度，g/mL；t收集流動相的時間，min；Fm同一組測量的算術平均值，mL/min；Fs流量設定值，mL/min；Fmax同一組測量中流量最大值，mL/min；Fmin同一組測量中流量最小值，ml/min。檢查人/日期：復核人/日期：4.1.3 梯度誤差由梯度控制裝置設置階梯式的梯度洗脫程序，A溶劑為純水，C溶劑為甲醇，100%CC經(jīng)由5個階梯從0變到100

7、%,如下圖所示，將輸液泵和檢測器連接（不接色譜柱），開機以后以A溶劑沖洗系統(tǒng)，基線平穩(wěn)后開始執(zhí)行梯度程序，畫出梯度變化曲線，求出A、C溶劑不同比例時的記錄儀讀數(shù)，重復測量2次，計算平均值。從C溶劑的含量及對應的記錄儀讀數(shù)，按式（3）計算梯度誤差Gci,取Gci最大者作為儀器梯度誤差，應不超過±3%,結果記錄在下表中；時間t次數(shù)第一階段讀數(shù)第二階段讀數(shù)第三階段讀數(shù)第四階段讀數(shù)第五階段讀數(shù)12LmGci注：Gci=（Ti-Lm）/Lm>100%式（3）式中：Gci第i段梯度誤差（）；L第i段記錄儀讀數(shù)平均值；Lm各段記錄儀讀數(shù)平均值的平均值。檢查人/日期：復核人/日期：4.1.4

8、泵控制流動相比例的精密度開啟儀器，按照下表中的流動相比例設定流動相，用兩量筒（已校驗）接收流動相，經(jīng)10分鐘，比較在設定流動相比例的理論流出量與實際流出量，誤差允許范圍：F（1-F）10%,F為所測流動相組分所占的體積比：廳P設定流動相比例實際流出量結果1ABCD2ABCD3ABCD檢查人/日期：復核人/日期：4.2 柱溫箱溫度設定值誤差ATS和控溫穩(wěn)定性TC的檢定將溫度計(已校驗，分度值為0.1C)放置在柱溫箱內(nèi)，選擇35c和45c進行檢定，按儀器說明書操作，通電升溫，待溫度穩(wěn)定后，記下溫度計讀數(shù)并開始計時，以后每隔10min記錄一次讀數(shù)，共計7次，求出平均值，平均值與設定值之差為ATs,7

9、次讀數(shù)中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性Tc,結果記錄在下表,柱溫箱溫度設定值誤差ATs<土3C,Tc<±TC；設定溫度實測溫度平均值ATsTc結果35C123456745C1234567檢查人/日期：復核人/日期：4.3 紫外-可見檢測器4.3.1 基線噪音和基線漂移選用Ci8色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0ml/min,紫外檢測器的波長設定為254nm,待儀器穩(wěn)定后，記錄基線30min,由檢測器的衰減倍數(shù)和測得的基線峰一峰高對應的記錄儀標度，計算基線噪音，用檢測器自身的物理量(AU)作單位表示，基線噪音應不超過5X10-4；衰減倍數(shù)測得的基線峰一峰高對應的記

10、錄儀標度基線噪音結果注：Nd=KB式中：K:衰減倍數(shù)；B:測得的基線峰一峰高對應的記錄儀標度基線漂移在1h內(nèi)偏離原點的值為(AU/h),應不超過5M0-3AU/h。檢查人/日期：復核人/日期：4.3.2 最小檢測濃度在4.3.1的色譜條件下，進樣量20M；取適量的蔡，用甲醇稀釋制成1M0-7g/ml的溶液，連續(xù)進樣6次，記錄紊/甲醇溶液的色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰一峰高，按下式來計算最小檢測濃度(Cl),應不超過1xi0-7g/ml,結果記錄在卜表;票的稱樣量稀釋倍數(shù)蔡的色譜峰高平均峰高最小檢測濃度結果2Nd>C>V注：Cl=HX20式中：Nd：基線噪聲峰一峰高；c：標準溶液濃

11、度；H:標準溶液的色譜峰高；V:進樣體積檢查人/日期：復核人/日期：5整機性能在4.3.2所記錄的色譜圖中,按下式計算Rsd值，Rsd磴.0%,并將結果記錄在下表中;品名稱樣量項目指標實驗結果結果分離度（R）>1.5Rsd02%圖譜文件名峰面積（A）平均數(shù)（M）Rsd值結果注：M=(Ai+A2+An)/n”(A-m)2Rsd=n-1M復核人/日期：式中：M:峰面積平均數(shù)；a：峰面積；n：測量次數(shù)檢查人/日期：6偏差說明及措施:7驗證小組人員簽字/日期:8偏差處理及驗證總結報告在整個驗證工作全部結束后，起草驗證方案的部門負責對驗證工作進行總結，并做出科學的評價，對驗證結果評價的內(nèi)容包括：8.1 .驗證活動是否有遺漏；8.2 驗證實施過程中對驗證方案有無修改；修改的原因、依據(jù)及是否經(jīng)過批準；8.3 驗證記錄是否完整；8.4 驗證試驗結果是否符合規(guī)定；偏差及對偏差的說明是否合理；是否需要進一步補充試驗；驗證結果由驗證小組審核，驗證報告經(jīng)驗證小組組長批準后生效。9再驗證要求：9.1 再驗證周期：9.1.1 設備大修后需再校驗；9.1.2 由于檢修、調(diào)整、遷移或其它原因，可能對設備的安裝情況