Agilent高效液相驗(yàn)證

1、編號(hào)：STP-YZ-HY-004-00檢測(cè)儀器驗(yàn)證報(bào)告Agilent1200高效液相色譜儀浙江花園藥業(yè)有限公司1概述：高效液相色譜法(HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC)是一種現(xiàn)代液相色譜法，其基本方法是用高壓輸液泵將流動(dòng)相泵入到裝有填充劑的色譜柱，注入的供試品被流動(dòng)相帶入柱內(nèi)進(jìn)行分離后，各成分先后進(jìn)入檢測(cè)器，用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖并進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到測(cè)定結(jié)果。由于應(yīng)用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動(dòng)相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點(diǎn)。1.1 設(shè)備的描述本公司所用的高效液相色譜儀是由在線脫泡機(jī)、四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、紫外檢

2、測(cè)器以及相關(guān)管路等組成，主要是針對(duì)本公司所有適用高效液相色譜法分析的各種產(chǎn)品而購(gòu)入的，該設(shè)備現(xiàn)安裝于QC三樓儀器室(三)。設(shè)備名稱：高效液相色譜儀型號(hào)：Agilent-1200生產(chǎn)廠商：USAAgilentTechnologies1.2 設(shè)備檔案資料名稱編號(hào)存放地點(diǎn)1.3儀器備件備件名稱提供廠家或型號(hào)數(shù)量存放地點(diǎn)1.4維修服務(wù)單位名稱聯(lián)系人地址電話1.5設(shè)備選擇標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)來源與驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)1.5.1 JJG705-2002液相色譜儀檢定規(guī)程1.5.2 中國(guó)藥典2005年版1.5.3 Agilent-1200高效液相色譜儀操作和維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程(SOP-QC-GY-032-00)2驗(yàn)證目的：為了確保Agi

3、lent-1200高效液相色譜儀的設(shè)計(jì)符合要求，為了確保使用該儀器的所檢測(cè)數(shù)據(jù)真實(shí)可靠，為了確保該儀器的各項(xiàng)指標(biāo)能達(dá)到該儀器所設(shè)計(jì)的性能指標(biāo)。3參與驗(yàn)證的相關(guān)部門及其職責(zé)3.1 驗(yàn)證小組3.1.1 負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審批；3.1.2 負(fù)責(zé)驗(yàn)證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核；3.1.3 負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的審核；3.1.4 負(fù)責(zé)驗(yàn)證周期的確認(rèn)；3.1.5 負(fù)責(zé)發(fā)放驗(yàn)證證書；3.2 工程部3.2.1 負(fù)責(zé)設(shè)備的安裝、調(diào)試，并做好相應(yīng)的記錄；3.2.2 負(fù)責(zé)建立設(shè)備檔案；3.2.3 負(fù)責(zé)擬定驗(yàn)證周期；3.2.4 負(fù)責(zé)收集預(yù)、安裝確認(rèn)的試驗(yàn)記錄；3.3 質(zhì)量管理部3.3.1 負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證參數(shù)要求進(jìn)行確認(rèn)；3.3.2 負(fù)責(zé)根據(jù)檢

4、驗(yàn)結(jié)果出具檢驗(yàn)報(bào)告單；3.3.3 負(fù)責(zé)儀器、儀表的校驗(yàn)；3.3.4 負(fù)責(zé)起草設(shè)備操作、清潔和維護(hù)保養(yǎng)等方面的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；3.3.5 負(fù)責(zé)設(shè)備日常的維護(hù)保養(yǎng)工作；4驗(yàn)證內(nèi)容4.1 四元泵4.1.1 泵的耐壓性將儀器各部分連接好，以100%甲醇為流動(dòng)相，流量為1ml/min,按Agilent-1200高效液相色譜儀操作和維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程啟動(dòng)儀器，壓力平穩(wěn)后保持10min,用濾紙檢查各管路接口處應(yīng)無濕跡，卸下色譜柱，堵住泵出口端（壓力傳感器以下），使壓力達(dá)到最大允許值的90%,保持5min應(yīng)不漏液；壓力最大允許值泵壓力是否漏液結(jié)果檢查人/日期：復(fù)核人/日期:4.1.2 泵流量設(shè)定值誤差Ss、流量穩(wěn)定性

5、誤差Sr流里設(shè)止值（ml/min）0.51.02.0測(cè)量次數(shù)333流動(dòng)相收集時(shí)間1055允許誤差Ss5%3%2%sr3%2%2%注：最大流量的設(shè)定值可根據(jù)用戶使用情況而定。對(duì)特殊的、流量小的儀器，流量的設(shè)定可根據(jù)用戶使用情況選大、中、小三個(gè)流量，流動(dòng)相的收集時(shí)間則根據(jù)情況適當(dāng)?shù)目s短或延長(zhǎng)。啟動(dòng)儀器，按上表的要求設(shè)定流量，壓力穩(wěn)定后，在流動(dòng)相出口處用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動(dòng)相，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，收集上表規(guī)定時(shí)間流出的流動(dòng)相，在分析天平上稱重，按式（1）、（2）計(jì)算SsSr,結(jié)果記錄在下表中；流星(ml/min)次數(shù)W1W2W2-W1SsSr0.51231.01232.0123注：Ss=(Fm

6、-Fs)/FsX100%式(1)Sr=(Fmax-Fmin)/Fm><100%式（2）式中：FmFm=(W2-Wi)/(P?t),流量實(shí)測(cè)值，ml/min;W2容量瓶+流動(dòng)相的質(zhì)量，g；W1容量瓶的質(zhì)量，g；試驗(yàn)溫度下流動(dòng)相的密度，g/mL；t收集流動(dòng)相的時(shí)間，min；Fm同一組測(cè)量的算術(shù)平均值，mL/min；Fs流量設(shè)定值，mL/min；Fmax同一組測(cè)量中流量最大值，mL/min；Fmin同一組測(cè)量中流量最小值，ml/min。檢查人/日期：復(fù)核人/日期：4.1.3 梯度誤差由梯度控制裝置設(shè)置階梯式的梯度洗脫程序，A溶劑為純水，C溶劑為甲醇，100%CC經(jīng)由5個(gè)階梯從0變到100

7、%,如下圖所示，將輸液泵和檢測(cè)器連接（不接色譜柱），開機(jī)以后以A溶劑沖洗系統(tǒng)，基線平穩(wěn)后開始執(zhí)行梯度程序，畫出梯度變化曲線，求出A、C溶劑不同比例時(shí)的記錄儀讀數(shù)，重復(fù)測(cè)量2次，計(jì)算平均值。從C溶劑的含量及對(duì)應(yīng)的記錄儀讀數(shù)，按式（3）計(jì)算梯度誤差Gci,取Gci最大者作為儀器梯度誤差，應(yīng)不超過±3%,結(jié)果記錄在下表中；時(shí)間t次數(shù)第一階段讀數(shù)第二階段讀數(shù)第三階段讀數(shù)第四階段讀數(shù)第五階段讀數(shù)12LmGci注：Gci=（Ti-Lm）/Lm>100%式（3）式中：Gci第i段梯度誤差（）；L第i段記錄儀讀數(shù)平均值；Lm各段記錄儀讀數(shù)平均值的平均值。檢查人/日期：復(fù)核人/日期：4.1.4

8、泵控制流動(dòng)相比例的精密度開啟儀器，按照下表中的流動(dòng)相比例設(shè)定流動(dòng)相，用兩量筒（已校驗(yàn)）接收流動(dòng)相，經(jīng)10分鐘，比較在設(shè)定流動(dòng)相比例的理論流出量與實(shí)際流出量，誤差允許范圍：F（1-F）10%,F為所測(cè)流動(dòng)相組分所占的體積比：廳P設(shè)定流動(dòng)相比例實(shí)際流出量結(jié)果1ABCD2ABCD3ABCD檢查人/日期：復(fù)核人/日期：4.2 柱溫箱溫度設(shè)定值誤差A(yù)TS和控溫穩(wěn)定性TC的檢定將溫度計(jì)(已校驗(yàn)，分度值為0.1C)放置在柱溫箱內(nèi)，選擇35c和45c進(jìn)行檢定，按儀器說明書操作，通電升溫，待溫度穩(wěn)定后，記下溫度計(jì)讀數(shù)并開始計(jì)時(shí)，以后每隔10min記錄一次讀數(shù)，共計(jì)7次，求出平均值，平均值與設(shè)定值之差為ATs,7

9、次讀數(shù)中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性Tc,結(jié)果記錄在下表,柱溫箱溫度設(shè)定值誤差A(yù)Ts<土3C,Tc<±TC；設(shè)定溫度實(shí)測(cè)溫度平均值A(chǔ)TsTc結(jié)果35C123456745C1234567檢查人/日期：復(fù)核人/日期：4.3 紫外-可見檢測(cè)器4.3.1 基線噪音和基線漂移選用Ci8色譜柱，以100%甲醇為流動(dòng)相，流量為1.0ml/min,紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)設(shè)定為254nm,待儀器穩(wěn)定后，記錄基線30min,由檢測(cè)器的衰減倍數(shù)和測(cè)得的基線峰一峰高對(duì)應(yīng)的記錄儀標(biāo)度，計(jì)算基線噪音，用檢測(cè)器自身的物理量(AU)作單位表示，基線噪音應(yīng)不超過5X10-4；衰減倍數(shù)測(cè)得的基線峰一峰高對(duì)應(yīng)的記

10、錄儀標(biāo)度基線噪音結(jié)果注：Nd=KB式中：K:衰減倍數(shù)；B:測(cè)得的基線峰一峰高對(duì)應(yīng)的記錄儀標(biāo)度基線漂移在1h內(nèi)偏離原點(diǎn)的值為(AU/h),應(yīng)不超過5M0-3AU/h。檢查人/日期：復(fù)核人/日期：4.3.2 最小檢測(cè)濃度在4.3.1的色譜條件下，進(jìn)樣量20M；取適量的蔡，用甲醇稀釋制成1M0-7g/ml的溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄紊/甲醇溶液的色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰一峰高，按下式來計(jì)算最小檢測(cè)濃度(Cl),應(yīng)不超過1xi0-7g/ml,結(jié)果記錄在卜表;票的稱樣量稀釋倍數(shù)蔡的色譜峰高平均峰高最小檢測(cè)濃度結(jié)果2Nd>C>V注：Cl=HX20式中：Nd：基線噪聲峰一峰高；c：標(biāo)準(zhǔn)溶液濃

11、度；H:標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰高；V:進(jìn)樣體積檢查人/日期：復(fù)核人/日期：5整機(jī)性能在4.3.2所記錄的色譜圖中,按下式計(jì)算Rsd值，Rsd磴.0%,并將結(jié)果記錄在下表中;品名稱樣量項(xiàng)目指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果分離度（R）>1.5Rsd02%圖譜文件名峰面積（A）平均數(shù)（M）Rsd值結(jié)果注：M=(Ai+A2+An)/n”(A-m)2Rsd=n-1M復(fù)核人/日期：式中：M:峰面積平均數(shù)；a：峰面積；n：測(cè)量次數(shù)檢查人/日期：6偏差說明及措施:7驗(yàn)證小組人員簽字/日期:8偏差處理及驗(yàn)證總結(jié)報(bào)告在整個(gè)驗(yàn)證工作全部結(jié)束后，起草驗(yàn)證方案的部門負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證工作進(jìn)行總結(jié)，并做出科學(xué)的評(píng)價(jià)，對(duì)驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)的內(nèi)容包括：8.1 .驗(yàn)證活動(dòng)是否有遺漏；8.2 驗(yàn)證實(shí)施過程中對(duì)驗(yàn)證方案有無修改；修改的原因、依據(jù)及是否經(jīng)過批準(zhǔn)；8.3 驗(yàn)證記錄是否完整；8.4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合規(guī)定；偏差及對(duì)偏差的說明是否合理；是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)；驗(yàn)證結(jié)果由驗(yàn)證小組審核，驗(yàn)證報(bào)告經(jīng)驗(yàn)證小組組長(zhǎng)批準(zhǔn)后生效。9再驗(yàn)證要求：9.1 再驗(yàn)證周期：9.1.1 設(shè)備大修后需再校驗(yàn)；9.1.2 由于檢修、調(diào)整、遷移或其它原因，可能對(duì)設(shè)備的安裝情況