試驗(yàn)指導(dǎo)書(20211110010343)

1、實(shí)驗(yàn)工程：薄層層析別離順反偶氮苯一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解薄層層析別離有機(jī)化合物的原理及應(yīng)用范圍；2. 掌握薄層的制備、點(diǎn)樣、展開、顯色的操作；3了解紫外燈檢出斑點(diǎn)及常用的薄層展開系統(tǒng)、顯色劑;4.了解值Rf值的意義及計(jì)算。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容應(yīng)用薄層層析別離順反偶氮苯1. 制備薄層層析板2. 配制展開劑3. 檢出斑點(diǎn)4 .計(jì)算Rf值實(shí)驗(yàn)示意圖點(diǎn)樣薄層層析展開四、實(shí)驗(yàn)用主要儀器設(shè)備、消耗品儀器設(shè)備名稱規(guī)格消耗品名稱規(guī)格尺薄板載玻片層析缸硅膠G青島海洋化工ARCMC0.5-1%濃度點(diǎn)樣管0.3*100環(huán)己烷AR乙酸乙酯AR偶氮苯AR五、實(shí)驗(yàn)原理及原始計(jì)算數(shù)據(jù)、所應(yīng)用的公式薄層層析是六十年代開展起來的一種微量、快

2、速而簡單的色譜法。它兼具 了柱色譜和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，既可用于少量樣品0.01微克的別離，也可用于 制備別離，應(yīng)用極為廣泛。Rf值是衡量物質(zhì)在薄層上別離及鑒定的一個(gè)數(shù)值，具有較大極性的化合物 在薄層板上呈現(xiàn)較強(qiáng)吸附力，它們的 Rf值較小，因此利用化合物極性不同，在 不同展開劑上顯示不同Rf值，可以到達(dá)別離。Ff值彼此相差較遠(yuǎn)，說明物質(zhì)別離較好。BAORf值二原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)至溶劑前沿的距離=AO/BO偶氮苯的光化異構(gòu)體hvC6H5活化分子 C6H5、C6H5C6H5N NN 二N+N NC6H5C6H5反式偶氮苯最常見的形式是反式異構(gòu)體，反式偶氮苯在光的照射下能吸收紫外光形成活化分子，活

3、化分子失去能量會(huì)回到順式或反式基態(tài)六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄1. 薄層板的制備：薄層色譜用的吸附劑一般是氧化鋁，硅膠,硅藻土，聚酰胺等，薄層板制作 時(shí)，除吸附劑外，還添加一些另外物質(zhì)。硅膠H即為純硅膠硅膠G硅膠+石膏,適合于板上作記號(hào)硅膠GF254含石膏，可在254納米紫外燈下觀察熒光的物質(zhì)硅膠GF254+365含石膏可在254、365納米紫外燈下觀察熒光的物質(zhì)粘合劑石膏(2CaSQ.H2O)還可用淀粉，羥甲基纖維素鈉(CMC代替，加 粘合劑的薄板叫硬板。薄層板制作方法分干法，濕法兩種。以下為濕法制板：稱取2克硅膠于8毫升1%CM溶液中，調(diào)成糊狀，用研缽的杵在薄板上 涂布均勻，用手輕輕振動(dòng)，使其成平整薄

4、層，平鋪在玻板上，空氣下枯燥，然后 在110C烘箱內(nèi)活化0.5h。2克硅膠可鋪8塊載玻片。2點(diǎn)樣待薄層枯燥后，進(jìn)行點(diǎn)樣，先在薄板底線 1-1.5厘米處畫一條線，將待 別離樣品溶于低沸點(diǎn)溶劑中配置1%左右的溶液，用毛細(xì)管點(diǎn)樣，樣品斑點(diǎn)要小， 點(diǎn)樣間距1-1.5厘米。3. 展開：配制的展開劑置于密閉層析缸中，展開劑用量約在缸底部1厘米高，將薄 板輕輕放入，用上升法展開。4. 顯色：待展開劑距上沿約1厘米處，取出薄板，待溶劑揮發(fā)，紫外燈下看螢光， 或用顯色劑顯色。5. 計(jì)算Rf值七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算及曲線樣品一為光照后的偶氮苯，由于光的激發(fā)使原來反式異構(gòu)體有局部轉(zhuǎn)成 順式。樣品二黑紙包裝的是未光照的偶氮

5、苯。結(jié)果：樣品一有二個(gè)斑點(diǎn)樣品二有一個(gè)斑點(diǎn)Rf = 0.85Rf = 0 85 反式 Rf= a25 順式未光照光照1 .順式偶氮苯具有一定的偶極矩，極性較大，反式偶氮苯由于結(jié)構(gòu)對稱， 偶極矩為零，因此極性較小，Rf值較大。2. 薄層板的活性與含水量有關(guān)系，一般將硅膠板放在105-110°C的烘箱中活化30分鐘，可到達(dá)U級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。八、對實(shí)驗(yàn)結(jié)果和實(shí)驗(yàn)中某些現(xiàn)象的分析討論1 .薄板涂布不勻，有氣泡，致使別離不佳，在硅膠與CMC混合時(shí)要研磨，去除氣泡。2 .光照后的順式斑點(diǎn)不明顯，有時(shí) Rf值計(jì)算有誤，可以在紫外燈下再觀 察。3 .如果別離別的無色的化合物，應(yīng)該加顯色劑。4 .點(diǎn)樣時(shí)斑點(diǎn)盡

6、可能小，以免在展開時(shí)造成擴(kuò)散，別離不佳。通過本試驗(yàn)，要求學(xué)生掌握不同色譜技術(shù)的特點(diǎn)，原理及其應(yīng)用。一般來講：1 薄層色譜應(yīng)用簡單，普及，應(yīng)該牢固掌握，作為今后化學(xué)研究中不可 缺少的工具，并應(yīng)用該技術(shù)來探索柱色譜別離的最正確條件。2 柱色譜用于純品制備，特別是較大量混合物的別離，結(jié)構(gòu)鑒定，離不 開柱色譜的應(yīng)用。3 氣相色譜用于定量、定性分析，但對于加熱易分解，不揮發(fā)性物質(zhì)不 適用。實(shí)驗(yàn)精確度 %九、實(shí)驗(yàn)方法指示及考前須知1 光異構(gòu)化：0.1克反偶氮苯溶于5毫升無水苯中，將此溶液分為二個(gè)試管， 置一試管在太陽光下照射一小時(shí)， 照射要完全，使別離現(xiàn)象明顯。另一試管用黑 紙包好。2 薄板制成后可以在105-1