決明子的不同提取物及炮制品對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護作用(一)

1、決明子的不同提取物及炮制品對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護作用(一)【摘要】 目的觀察不同極性溶劑的系列提取物、總蒽醌中的游離型和結(jié)合型蒽醌（蒽醌苷）及不同的炮制品的保肝作用。方法將KM小鼠隨機分組，分成正常組、模型組、聯(lián)苯雙酯組（0.1 g/kg）、各決明子組（11 g生藥/kg），連續(xù)給藥9 d，末次給藥后約10 h，除正常組外，其它各組均腹腔注射0.15%四氯化碳溶液10 ml/kg。16 h后采用比色法測定血清中轉(zhuǎn)氨酶ALT，AST的含量。結(jié)果以不同極性溶劑提取的5種決明子提取物中，除石油醚部分外，其余各組均有顯著降低轉(zhuǎn)氨酶活性的作用；游離型和結(jié)合型蒽醌均有顯著的降低轉(zhuǎn)氨酶活性作用；決

2、明子的生、炒兩類炮制品也同樣有顯著的降酶作用，但生品略優(yōu)。結(jié)論 總蒽醌類成分是保肝降酶的主要活性成分；除總蒽醌外尚有其他多種保肝降酶的活性成分，有待于對不同提取物作進一步的活性成分追蹤研究；決明子的生、炒兩類炮制品在用于保肝降酶活性時以生品為佳。 【關(guān)鍵詞】 決明子 決明子提取物 蒽醌類 炒決明子 保肝作用Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effects of different extracts and processed products of Semen Cassiae on the acute liver injury in

3、duced by CCl4. MethodsKM mice were divided into normal group, control group, biphenyl dimethylester group (0.1 g/kg) and Semen Cassiae group (11g crude drug/kg), which were processed by intragastric administration for 9 days. 0.15%CCl4 oil solution (10 ml/kg, diluted with plant oil) was injected int

4、o the mice of all groups but normal group by intraperitoneal injection 10hr after last administration. The contents of ALT and AST in the serum were determined by chromatometry 16hr after administration of CCl4. ResultsThe five kinds of extracts extracted by different heteropolarity dissolvents but

5、ligarine extract, the free and conjugated anthraquinones significantly decreased the activities of aminopherase. The processed products of Semen Cassiae, the crude and the parched, significantly decreased the activities of aminopherase too. The effect of the crude on the decrease of aminopherase act

6、ivities was prior to the parched slightly. ConclusionAll of the anthraquinones in Semen Cassiae was the primary active component at the protective effects on liver and decrease of the aminopherase activities and there would be other active components besides all anthraquinones. The follow-up of acti

7、ve components in other extracts but ligarine extract would be urgent at protective effects on liver in the future. The crude may be optimal between two processed products of semen cassiae if Semen Cassiae is used for the protective aim on liver and decrease of aminopherase activities. Key words：Seme

8、n cassiae； Extract of semen cassiae； Anthraquinones； Parched semen cassiae； Protective effect on liver 決明子為豆科草本植物決明或小決明的干燥成熟的種子，為常用中藥材，其性味甘、苦、咸、微寒，歸肝、腎、大腸經(jīng)。具有清肝明目和潤腸通便的功效1?，F(xiàn)代研究認為，決明子中的化學(xué)成分主要有蒽醌類、多糖類、萘并吡酮類、氨基酸類等2，3，藥理作用主要有降血脂、降血壓、潤腸通便等3，4，在保肝方面主要對總蒽醌類、多糖類、醇提物、水提物進行了研究57，但對不同極性溶劑的系列提取物、總蒽醌中的游離型和結(jié)合型蒽醌（

9、蒽醌苷）及不同的炮制品的保肝作用卻未見報道，本文就上述目前文獻未及內(nèi)容，以CCl4肝損傷為模型進行了保肝作用研究，為豐富和完善決明子的保肝作用提供科學(xué)的理論依據(jù)。1 器材1.1 藥品與試劑 決明子藥材購自江蘇江浦，經(jīng)鑒定為豆科植物決明Cassia Obtusifolia L.的干燥成熟種子。聯(lián)苯雙酯由浙藥集團新昌制藥廠生產(chǎn)，臨用前用蒸餾水于研缽中研磨制成5 mg/ml的混懸液。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒購自南京建成生物科技有限公司；四氯化碳、石油醚、二氯甲烷、正丁醇、乙醇、氯仿均為分析純（市購）；食用油(市購)。1.2 動物KM小鼠，體重1822 g，雄性，

10、由南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。1.3 儀器2401型紫外可見分光光度計（SHIMADZU）。2 方法與結(jié)果2.1 決明子各提取部位對四氯化碳致急性肝損傷的保護作用取KM小鼠70只，體重1822 g，雄性，隨機分為7組，分別為正常組；聯(lián)苯雙酯組（0.1 g/kg）；四氯化碳模型組（11g生藥/kg）；石油醚提取物組（11 g生藥/kg）；二氯甲烷提取物組（11 g生藥/kg）；正丁醇提取物組（11 g生藥/kg）；乙醇提取物組（11 g生藥/kg）；水煎液組（11 g生藥/kg）。各組每天每鼠按0.2 ml/10 g灌胃給藥1次，正常組和四氯化碳模型組給予等體積生理鹽水，連續(xù)9 d。末次給藥

11、后約10 h，除正常組外，其它各組均腹腔注射0.15%四氯化碳油溶液10 ml/kg，同時禁食、自由飲水。16 h后由眼眶靜脈叢取血，分離血清，按試劑盒說明書采用比色法測定血清中ALT，AST的含量。結(jié)果見表1。表1 決明子各提取部位對四氯化碳致急性肝損傷的保護作用(略)結(jié)果表明，決明子的二氯甲烷提取物、正丁醇提取物、乙醇提取物及水煎液能顯著降低小鼠血清中的升高的ALT值；正丁醇提取物、乙醇提取物及水煎液能顯著降低小鼠血清中升高的AST值，其中正丁醇部位對四氯化碳致急性肝損傷的保護作用最為顯著。2.2 決明子中蒽醌類成分的保肝作用取決明子粉末，過二號篩，加10倍量的70%乙醇回流提取2次，每次

12、1.5h。合并乙醇液，減壓回收至無醇味。將濃浸膏加適量水溶解后加載于已預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱上，分別用水（30%，50%，70%，95%）乙醇洗脫，收集30%和50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，即得決明子蒽醌苷提取物。分組及給藥方法、造模方法基本同前。結(jié)果見表2。表2 決明子蒽醌類成分對四氯化碳致急性肝損傷的保護作用(略)結(jié)果表明，決明子的游離蒽醌和蒽醌苷能顯著降低小鼠血清中的ALT值及AST值，對四氯化碳致急性肝損傷的保護作用較為顯著，提示決明子的總蒽醌為其保肝的重要有效活性成分。2.3 生、炒決明子對四氯化碳致急性肝損傷的保護作用 決明子炮制品制備：取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，烘干即得生決明

13、子。取凈決明子，照清炒法（2000版中國藥典附錄D）炒至微有香氣，即得炒決明子。分組及給藥方法、造模方法基本同前。結(jié)果見表3。表3 決明子各炮制品對四氯化碳致急性肝損傷的保護作用(略)結(jié)果表明，決明子的炒制后，其保肝作用有所下降。3 討論臨床引起肝損傷的原因有多種，但均以肝細胞損傷為最終結(jié)果。存在于肝細胞中的可溶性酶AST，ALT在肝細胞損傷后釋放入血，最終導(dǎo)致血清轉(zhuǎn)氨酶活性的升高，因此測定血清轉(zhuǎn)氨酶活性是反應(yīng)肝細胞損傷程度最為靈敏可靠、簡單實用的方法。本文采用的CCl4肝損傷模型是一種常用的、經(jīng)典的實驗性病理模型8，其主要機理是CCl4在肝臟細胞色素P-450酶作用下產(chǎn)生大量的自由基，自由基

14、可損傷肝細胞膜，同時與肝細胞內(nèi)大分子發(fā)生共價結(jié)合，最終導(dǎo)致肝細胞腫脹壞死。本文的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以不同極性溶劑提取的決明子提取物中，除石油醚部分外，其余各組均有顯著降低轉(zhuǎn)氨酶活性的作用；游離型和結(jié)合型蒽醌均有顯著的降低轉(zhuǎn)氨酶活性作用。上述結(jié)果提示，總蒽醌類成分有顯著的保肝降酶活性作用，由于決明子中蒽醌類含量較高8，因此可以認為蒽醌類成分可作為決明子保肝降酶的主要活性成分，除總蒽醌外尚有其他多種保肝降酶的活性成分，有待于對其他不同溶劑的提取物（石油醚部分除外）進一步分離研究。決明子的生、炒兩類炮制品也同樣有顯著的降酶作用，但生品略優(yōu)。因此決明子的生、炒兩類炮制品在用于保肝降酶活性時以生品為佳。陳秋東等8的研究顯示，決明子經(jīng)炒制后其所含的蒽醌類成分顯著減少。因此基本認為炒制品保肝作用的下降與炮制后蒽醌類成分顯著減少有直接關(guān)系?！緟⒖嘉墨I】1國家藥典委員會. 中國藥典，部S. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：98.2楊懷禮，張幫啟，張 明. 決明子中有效成分和臨床應(yīng)用的初步研究J. 基層中藥雜志，2002，16（4）：45.3呂翠婷，黎海彬，李續(xù)娥，等.中藥決明子的研究進展J. 食品科技，2006，8：295.4馬愛華.決明子配伍臨床應(yīng)用研究進展J. 時珍國醫(yī)國藥，2006，17（12）：2587.5楊永久，劉安軍，