ELISA簡(jiǎn)介及HIV抗體篩查實(shí)驗(yàn)質(zhì)量管理-

1、殳ELISA簡(jiǎn)介及HIV抗體篩查實(shí)驗(yàn)質(zhì)量管理太原市疾病預(yù)防控制中心王驥濤EUSA簡(jiǎn)介壁原理，方法類型齡操作要點(diǎn)1/15/2014-檢測(cè)抗體雙抗原夾心法捕獲法間接法I雙抗體夾心法/雙抗原夾心法測(cè)抗體等雙抗體夾心法測(cè)抗原料捕獲法測(cè)抗體e間接法測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原、抗體第一代：使用HlV全病毒裂解物為抗原，應(yīng)用間接法原理檢測(cè)HIV抗體。如日本富士公司生產(chǎn)的HIV-PA試劑。，第二代：使用在細(xì)菌或真菌中表達(dá)的人工重組或化學(xué)合成多肽HIV抗原，應(yīng)用間接法原理檢測(cè)HIV抗體。基因重組通常易于在培養(yǎng)基中生產(chǎn)大量同源性抗原，產(chǎn)品為單一目的基因而非多樣性抗原混合，特異性高于第一代試劑。酶標(biāo)記的HIV-1/-2型抗

2、原待檢抗體體，此類試劑的敏感性和I高純度的HIV-1/-2型抗原第三代：使用合成多肽HIV抗原（少數(shù)用重組抗原），應(yīng)用雙抗原夾心法原理檢測(cè)HIV抗體。由于標(biāo)記HIV抗原可同時(shí)檢測(cè)血清中HIV-1lgG>lgM>IgA抗特異性均優(yōu)于標(biāo)記抗人免疫球蛋白的間接法。第四代：此類試劑在第三代試劑盒基礎(chǔ)上，將針對(duì)P24抗原的抗體與HIW1抗原一起包被固相載體，可同時(shí)檢測(cè)HIV-1IgG、IgM、IgA抗體和P24抗原。增加了敏感性和特異性。e完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:(1)(2)(3)(4)已包被抗原或抗體的固相載體;酶標(biāo)記的抗原或抗體;酶的底物;陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中

3、)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中)；(5)標(biāo)本(和結(jié)合物)的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。固相載體：常用聚苯乙烯固相載體形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板最為常用，專用于日LSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，國(guó)際上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8X12的96孔式。結(jié)合物（酶標(biāo)記的抗體或抗原）常用的酶:辣根過(guò)氧化物酶（horseradishperoxidase,HRP)堿性磷酸酶(alkalinephosohatase,AP)年底物eHRP：常見(jiàn)的有鄰苯二胺(OPD)反應(yīng)后呈橙紅色，用酸終止酶反應(yīng)后為橙黃色，在492nm處有最高吸收峰四甲基聯(lián)苯胺(TMB)反應(yīng)后顯藍(lán)色，終止后呈

4、黃色，最適吸收波長(zhǎng)為450nm。洗滌液常用含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水o終止液HRP常用強(qiáng)酸，最常見(jiàn)2mol/L硫酸軟洗滌顯色與終止標(biāo)本的采取和保存e避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。標(biāo)本的采取和保存凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。藪混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融過(guò)程中的機(jī)械剪切力會(huì)破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，使抗體效價(jià)下降，因此血清標(biāo)本如需作多次檢測(cè)，宜少量分裝凍

5、存。加樣準(zhǔn)確加到微孔板底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡,加入后及時(shí)放入孵箱。孵育羲孵育的時(shí)間要掌握好，嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。車注意封板，避免蒸發(fā)。反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡注意孵育中邊緣效應(yīng)洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。森ELSIA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離和酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)Oe聚苯乙烯等材質(zhì)對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，所以在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。羲各種試劑盒的洗液不要混用。按要求稀釋，洗液如果結(jié)晶應(yīng)待

6、其融解后配制。痂孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成殳泡。顯色與終止羲顯色劑不用過(guò)期顯色劑, 色的TMB顯色劑不可用肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)，加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。如產(chǎn)生較多氣泡，則會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性。羲嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑O(shè)計(jì)，優(yōu)質(zhì)的試劑、正確的操作和良好的儀器是保證ELISA必要條件。嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。HIV抗體篩查實(shí)驗(yàn)質(zhì)量管理質(zhì)量保證質(zhì)量控制質(zhì)量評(píng)價(jià)行政支持應(yīng)將艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)、發(fā)展和質(zhì)量管理納入地方衛(wèi)生行政規(guī)劃，保證實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和主要技術(shù)人員隊(duì)伍的穩(wěn)定，保證實(shí)驗(yàn)室建筑和設(shè)備需要，給予充足的經(jīng)費(fèi)支持，并進(jìn)行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。檢測(cè)技術(shù)人員需經(jīng)過(guò)上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)

7、培訓(xùn)。e上崗培訓(xùn)內(nèi)容至少應(yīng)包括：艾滋病檢測(cè)相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí),艾滋病相關(guān)檢測(cè)技術(shù)及管理要求，實(shí)驗(yàn)操作，質(zhì)量保證與質(zhì)量控制，生物安全。要求掌握相關(guān)專業(yè)知識(shí)和技能，能獨(dú)立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。在崗持續(xù)培訓(xùn)指在工作中要根據(jù)需要接受復(fù)培訓(xùn)，確證實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員每年至少1次，篩查實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員至少每2年1次，除接受檢測(cè)基本培訓(xùn)內(nèi)容外，要求了解相關(guān)技術(shù)、質(zhì)控及安全要求的新進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)室在使用新方法前，須對(duì)技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)，獲得資格后方可開展相應(yīng)工作oe檢測(cè)人員應(yīng)分為檢驗(yàn)者、復(fù)核者、簽發(fā)者。復(fù)核者、簽者應(yīng)具備對(duì)檢測(cè)過(guò)程進(jìn)任分析和解決問(wèn)題的能力。環(huán)境條件艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室及篩查實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及其建應(yīng)符合二級(jí)管

8、理罷HIV<7空間和凌藩，應(yīng)避免交叉污染。HCV,HBV及梅毒等血清學(xué)檢測(cè)在滿足實(shí)驗(yàn)室環(huán)境：室溫1825樣品采集、運(yùn)送和處理（略）檢測(cè)方法和試劑的選擇應(yīng)使用經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)的0應(yīng)選擇敏感性各實(shí)驗(yàn)室更換試劑批號(hào)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行平行試驗(yàn),即新批號(hào)試劑在測(cè)定質(zhì)控品（已知結(jié)果）時(shí)能 夠獲得與原試劑相同的結(jié)果。所有試劑盒須嚴(yán)曹髓求藉翻衿解髓薯最遍蠲拆設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)設(shè)備校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)立常用儀器的維護(hù)及校準(zhǔn)制度，以保證檢測(cè)工作正常運(yùn)轉(zhuǎn)。必須經(jīng)國(guó)家法定部門定期（每年至少1次）校準(zhǔn)的儀器至少包括：酶標(biāo)儀/洗板機(jī)，加樣器，溫度計(jì)，高壓滅菌器。加樣器、溫濕度計(jì)須經(jīng)計(jì)量部門校準(zhǔn)。必要時(shí)可根據(jù)需求每12

9、個(gè)季度進(jìn)行期間核查。其他精密儀器及出具實(shí)驗(yàn)結(jié)果的儀器，如生物安全柜、離心機(jī)等也必須定期（每年1次）校準(zhǔn),可請(qǐng)生產(chǎn)廠家校準(zhǔn)。設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn) 設(shè)備維護(hù)及使用記錄 酶標(biāo)讀數(shù)儀、洗板機(jī)每個(gè)工作日核對(duì)濾光片波長(zhǎng)，檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有位良好；負(fù)壓是否符合規(guī)定要求。定期（每年至少1次）檢查、，SO現(xiàn)囁矍感售虛怒里塞Q根逅便矍內(nèi)曇有畛校用校程疑，對(duì)濾光并的常密度進(jìn)擰稷準(zhǔn)并保留記箓。驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行處理，可根據(jù)使用情況更必要的部件。 移液器定期（每年至少1次）一校準(zhǔn)，.發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時(shí)進(jìn)行校準(zhǔn)。移液器的精密度應(yīng)在廠家說(shuō)明書規(guī)定的范圍內(nèi)。設(shè)備維護(hù)與校準(zhǔn)設(shè)備維護(hù)及使用記錄冰箱和孵育箱/水

10、浴箱每天檢查和記錄冰箱溫度，每個(gè)工作日檢查記錄孵育箱/水浴箱溫和孵育箱/水浴笄對(duì)溫度要求不同,要求冰箱溫度低于15C；放置要求4C保存的試劑盒的冰箱溫度應(yīng)在28C。霸其它儀器離心機(jī)，生物安全柜，高壓滅菌器等，每次使用前檢查儀器是否鼾亶翳露哮鶻懿播整爵整噩鐮瞥實(shí)驗(yàn)耗材實(shí)驗(yàn)室需選購(gòu)質(zhì)量?jī)?yōu)良的耗材，以保證檢測(cè)工作安全和結(jié)果的可靠性，并定期（每批次）或在更換產(chǎn)品時(shí)對(duì)耗材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。文件和文件管理e標(biāo)準(zhǔn)操作程序（sop）各級(jí)艾滋病實(shí)驗(yàn)室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的sop文件，篩查及確證實(shí)驗(yàn)室SOP文件至少應(yīng)包括：（1）樣品的接收、登記、處理、保存和運(yùn)輸；（2）檢測(cè)方法和步驟；（3）試劑使用和保存；（4）儀

11、器的使用維護(hù)和校準(zhǔn)；（5）質(zhì)量控制要求及程序；（6）結(jié)果解釋與報(bào)告;（7）保密程序；（8）實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)、相關(guān)文件記錄與保存；（9）不確定樣品追蹤和處理；（10）實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)及實(shí)驗(yàn)室的清理和消毒。(9)附錄，包括相關(guān)的附加文、設(shè)備和試劑盒說(shuō)明書等。文件和文件管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)"SOP至少應(yīng)包括以下內(nèi)容/(1)標(biāo)題和編號(hào)(圖本?)；(2)編寫和修T訂日期(批準(zhǔn)日期曲；(3)編寫和修訂人員(批準(zhǔn)人？)姓、(4)方法、目的和應(yīng)用范圍；(5)檢測(cè)設(shè)備；(6)試劑及有效期;(7)安全防護(hù)相關(guān)步驟；(8)結(jié)果文件和文件管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）SOP編寫及修訂由各崗位工作人員起草，實(shí)驗(yàn)室主

12、任審定，每年修訂一次。修訂應(yīng)該在實(shí)驗(yàn)室主管人員（技術(shù)負(fù)責(zé)人）的領(lǐng)導(dǎo)下進(jìn)行。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），不得擅自修改。e文件和文件管理實(shí)驗(yàn)原始記錄表應(yīng)按實(shí)驗(yàn)要求，設(shè)計(jì)試驗(yàn)操作原始記錄表，標(biāo)明空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、外部對(duì)照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員加樣。要注明試劑盒廠家、測(cè)定方法、批號(hào)、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測(cè)日期。文件和文件管理結(jié)果報(bào)告分析結(jié)果及發(fā)出檢測(cè)報(bào)告前，應(yīng)注意須在試劑盒及外部質(zhì)控品結(jié)果滿足要求的前提下，對(duì)樣品進(jìn)行分析。試劑盒及外部質(zhì)控品不合格，樣品需要重新檢測(cè)；復(fù)核人對(duì)檢

13、測(cè)結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)復(fù)核并對(duì)結(jié)果提出結(jié)論、簽發(fā)人對(duì)試驗(yàn)結(jié)論進(jìn)行審核、分析、總結(jié)、簽字。e文件和文件管理實(shí)驗(yàn)原始記錄表應(yīng)按實(shí)驗(yàn)要求，設(shè)計(jì)試驗(yàn)操作原始記錄表，標(biāo)明空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、外部對(duì)照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)人員加樣。要注明試劑盒廠家、測(cè)定方法、批號(hào)、效期、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測(cè)日期。e文件和文件管理勤樣品登記和保存收到樣品后,建立唯一編碼,及時(shí)登記有關(guān)信息，包括受檢者姓名或代號(hào)、試管編號(hào)、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗(yàn)結(jié)果、送檢日期、報(bào)告日期、備注（必要時(shí)記錄通信地址）等。運(yùn)送樣品必須有記錄。e文件和文件管理，文件存檔實(shí)驗(yàn)原始記錄表、打印數(shù)據(jù)（熱敏紙不宜長(zhǎng)期保

14、存）、檢測(cè)記錄表、樣品登記以及儀器設(shè)備維修和校準(zhǔn)記錄、人員培訓(xùn)記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存1。年以上。最好同時(shí)使用計(jì)算機(jī)保存各種文件和記錄。質(zhì)量控制是監(jiān)視全過(guò)程,排除誤差，防止變化,維持標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀的一個(gè)管理過(guò)程。這一過(guò)程是通過(guò)一個(gè)反饋環(huán)路進(jìn)行的。1）確定控制的對(duì)象；2）規(guī)定控制對(duì)象的標(biāo)準(zhǔn)（預(yù)期值）；3）制定或選擇控制方法和手段；3）測(cè)量實(shí)際數(shù)據(jù)；4）比較或較對(duì)實(shí)際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異,并說(shuō)明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù)定誤差范圍,報(bào)警系發(fā)出信號(hào)，反饋通道中斷。5）采取行動(dòng)，解決差異?；謴?fù)原狀（原標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)）的手段發(fā)揮作用。試劑內(nèi)對(duì)照在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過(guò)程質(zhì)控，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操

15、作全部完成并且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測(cè)區(qū)背景是內(nèi)部陰性過(guò)程質(zhì)控。如實(shí)驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說(shuō)明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，樣品須重檢。外部質(zhì)控品對(duì)照采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽(yáng)性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽(yáng)性樣品。不能使用酶聯(lián)試驗(yàn)的外部質(zhì)控品O下列情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號(hào);更換檢測(cè)人員；更換包裝；每個(gè)檢測(cè)日;更換試劑廠家。出現(xiàn)以下問(wèn)題，提示存在質(zhì)量隱患,應(yīng)引起重視:運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理?yè)p傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯(cuò)誤、缺失或字跡模糊（特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號(hào)和貨號(hào)，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄漏或

16、污染；不適宜的存放條件；保護(hù)包裝紙破損或污染；未達(dá)到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性/陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標(biāo)志）建議：每個(gè)檢測(cè)日檢測(cè)一次陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品;如果日檢測(cè)量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控?；虻厥屑?jí)CDC組織的實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證。開展快速檢測(cè)的篩查實(shí)驗(yàn)室及檢測(cè)點(diǎn)須參加省級(jí)抗體檢測(cè)的統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制（質(zhì)量控制）該質(zhì)量控制主要采用質(zhì)控圖進(jìn)行。質(zhì)控圖是把某一檢驗(yàn)的性能數(shù)據(jù)與所計(jì)算出來(lái)的預(yù)期的“控制限”進(jìn)行比較的圖。這種性能數(shù)據(jù)是在按規(guī)程正常進(jìn)行時(shí)，按時(shí)間順序而抽選出來(lái)的，其目的是檢測(cè)檢驗(yàn)過(guò)程中變異的“可追逆“性原因?！笨勺纺妗毙缘恼`差原因，是指除去隨機(jī)誤差以外的其他原因。試劑盒內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品

17、：即為試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照血清。每次實(shí)驗(yàn)試劑盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測(cè)樣品時(shí)，必須按試劑盒說(shuō)明書使用內(nèi)部對(duì)照，且不同批次不可混用。內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置的，包括強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽(yáng)性質(zhì)控,以該試劑盒臨界值（Cutoff）的23倍為宜（目前國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室主要使用）。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測(cè)的有效性，因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無(wú)效，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以是商品或?qū)嶒?yàn)室自行制備。室內(nèi)質(zhì)控品的使用和質(zhì)量要求每一次

18、實(shí)驗(yàn)必須使用室內(nèi)質(zhì)控品，以便監(jiān)控實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。同時(shí)可以了解各批試劑盒的批間或孔間差異。室內(nèi)質(zhì)控品的管間或瓶間變異必須小于監(jiān)測(cè)系統(tǒng)預(yù)期的變異（CW20%）,并且質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無(wú)菌，且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。e按照一周實(shí)驗(yàn)用量分裝、標(biāo)記、封口，-20凍存，質(zhì)控血清融化后不可反復(fù)凍融，存放28C冰箱，一周內(nèi)使用完畢。外部質(zhì)控品稀釋問(wèn)題：多份無(wú)感染源、無(wú)污染、無(wú)溶血血清稀釋統(tǒng)計(jì)室內(nèi)質(zhì)控的主要表示方法一建立質(zhì)控圖,最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，該圖使用累計(jì)和技術(shù)或趨勢(shì)分析技術(shù)的圖形提供系統(tǒng)偏移和漂移的狀況。eELISA方法檢測(cè)HIV抗體建立質(zhì)控圖步驟:建立質(zhì)控圖參數(shù)外部質(zhì)控品的

19、均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對(duì)外部質(zhì)控品重復(fù)測(cè)定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測(cè)取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測(cè)，也至少做5個(gè)批次的檢測(cè),每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到如批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。建立質(zhì)控圖參數(shù):1）算術(shù)平均值（國(guó)）：代表一組質(zhì)控血清測(cè)定的S/CO值的均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采少20發(fā)（天）所測(cè)得的外部對(duì)照質(zhì)控血清S/CO4色2）標(biāo)準(zhǔn)差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的個(gè)指標(biāo)，是與W O整3）變異系數(shù)（CU）：是反映各次S/CO值相對(duì)于均值一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以謹(jǐn)示0計(jì)算出平均值。嘉

20、瞽覆度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來(lái)衡量檢測(cè)的重復(fù)性或限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對(duì)外部質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的均之差來(lái)確定。k量控制:IYe建立質(zhì)控圖參數(shù)-Vxx一iis=f"對(duì)CV=£xl00%X繪制質(zhì)控圖質(zhì)控圖是把檢測(cè)數(shù)據(jù)與已確定的（計(jì)算出的）“控制限”進(jìn)勺比較的圖，包禽一條史心橫線和其上、下兩twwwa,笠援蔚凰胭序點(diǎn)人天寒驗(yàn)塞每批次試驗(yàn)質(zhì)控血清的測(cè)定樓。扇控圖繪制方驟包括：1）在常規(guī)條件下，對(duì)同一批血清連續(xù)測(cè)定20次（天）或以上，獲得一組S/CO值，求均數(shù)（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）,超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2）將均值（）和標(biāo)型差（s）分別在質(zhì)控框架圖中標(biāo)示出來(lái)。以S/CO值作縱座標(biāo)（Y軸），每一

21、批次試驗(yàn)作橫座標(biāo)（X軸），繪制質(zhì)控圖。3）從第21 ?該質(zhì)控框架,將每次質(zhì)控血清的檢測(cè)結(jié)果依次點(diǎn)入,檢驗(yàn)進(jìn)入質(zhì)控狀態(tài)。質(zhì)控規(guī)則及其使用實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果之前必須評(píng)價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù),可通過(guò)圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來(lái)決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12s和13s規(guī)則。質(zhì)控規(guī)則-3SD-2SD-SD質(zhì)控規(guī)則及其使用率，所以一般不采用。1）告警（12S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出+2s范圍瓢辱糠告I鼠噓貢麝瓢是普需詈®2）失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出+3s范工時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀蠶本次實(shí)蟹結(jié)果不能被融，可能顯系統(tǒng)誤差、隨抗誤壁或外的質(zhì)強(qiáng)品穩(wěn)定性禧所致。3）漂移：連續(xù)幾

22、次（35次）外部質(zhì)控品的S/C。值都篥憑均值的一側(cè)則稱為漂移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的箕化。4）趨勢(shì)：連續(xù)幾次（57次）外部質(zhì)控品的S/CO值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱為趨勢(shì)，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差，即具有質(zhì)控規(guī)則及其使用高的檢出分析誤差的能力，同時(shí)應(yīng)具有較低的假失控概率。考察試驗(yàn)系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多規(guī)則質(zhì)擅方案,鑫則懿鍛能提高誤差檢出，并具有低的假失控e出現(xiàn)一次2s范圍的變化時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測(cè)需要進(jìn)一步觀察。出現(xiàn)下列情況時(shí)，應(yīng)暫停檢測(cè)查找原因：（1）出現(xiàn)一次急出3s范圍的變化；（2）連續(xù)兩次出現(xiàn)同一方向超出2s范圍的變化；（

23、3）連續(xù)四次出現(xiàn)同一方向的超出1s范圍的變化；（4）連續(xù)10次結(jié)果都在1s范圍內(nèi)，但落在均值線的同一側(cè)。e質(zhì)控圖的分析及失控處理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計(jì)劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時(shí)，要求可靠的均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計(jì)算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)，對(duì)原有外部質(zhì)控品重復(fù)測(cè)定或更換新的外部質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定不是最有效的方法，必須找出問(wèn)題發(fā)生的原因，找出解除問(wèn)題的方法，并消除原因，防止將來(lái)出現(xiàn)同樣的問(wèn)題。«質(zhì)控圖的分析及失控處理繪制和分析質(zhì)控圖的要點(diǎn):1）分析數(shù)據(jù)時(shí)，超出2s或3s的數(shù)據(jù)不應(yīng)刪除。2）由專人負(fù)責(zé)建立質(zhì)控圖，每月定期召開質(zhì)控分析會(huì)，討論本月的質(zhì)量控制情況

24、。3）建議長(zhǎng)期和穩(wěn)定地使用一種質(zhì)量好的試劑，更換不同廠家的試劑后，須重新繪制質(zhì)控圖。改用新批號(hào)試劑如外部質(zhì)控品測(cè)定出現(xiàn)較大變化也應(yīng)重新制作質(zhì)控圖。使用新批號(hào)或不同廠家的試劑，必須在質(zhì)控圖上注明使用日期。4）發(fā)現(xiàn)質(zhì)控結(jié)果失控，應(yīng)填寫報(bào)告單，上交質(zhì)量負(fù)責(zé)人，分析原因并決定是否發(fā)出檢測(cè)報(bào)告。5）使用新批次的外部質(zhì)控品時(shí)，如測(cè)定值出現(xiàn)較大變化，須重新繪制質(zhì)控圖。變異系數(shù)（cu）小于20%,表示外部質(zhì)控品處于穩(wěn)定狀態(tài)。“即刻法”質(zhì)控:在對(duì)同一外部質(zhì)控血清連續(xù)測(cè)定3次后，即可對(duì)第3次檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。步驟:計(jì)算國(guó)和s。計(jì)算SI上限和SI下限SI上限和SI下限與SI值表比較“即刻法”質(zhì)控:1）當(dāng)SI上限和S

25、I下限vn2s時(shí)表示處于控制范圍內(nèi),可以繼續(xù)測(cè)定。繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。2）當(dāng)SI上限和SI下限有一值處于n2sn3s值之間時(shí)說(shuō)明該值在2s3s范圍，處于“告警”狀態(tài)。3）當(dāng)SI上限和SI下限有一值n3s值時(shí)說(shuō)明該值已在3s范圍之外，屬“失控”。“即刻法”只能在前20次內(nèi)使用，超出即可采用LJ質(zhì)控圖方法。交質(zhì)量控制中常見(jiàn)的問(wèn)題：1）只會(huì)用程序生成質(zhì)控圖進(jìn)行質(zhì)控2）臨時(shí)框架一用到底3）以月為單位的質(zhì)控圖能否反映實(shí)際質(zhì)控狀態(tài)4）不對(duì)質(zhì)控中的異常進(jìn)行分析5）無(wú)質(zhì)控分析報(bào)告k/質(zhì)量控制;推薦質(zhì)控方法：即亥U 法+Levey-Jen nings 質(zhì)控內(nèi)部質(zhì)量評(píng)價(jià)內(nèi)部質(zhì)量評(píng)價(jià)指由本實(shí)驗(yàn)室組織的質(zhì)量評(píng)價(jià),實(shí)

26、驗(yàn)室應(yīng)定期組織內(nèi)部質(zhì)量評(píng)價(jià)，應(yīng)包括樣品接收、檢測(cè)、保存至發(fā)出檢測(cè)報(bào)告的各個(gè)環(huán)節(jié)。確證中心實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證認(rèn)可，并按照認(rèn)證認(rèn)可的相關(guān)要求建立質(zhì)量評(píng)價(jià)機(jī)制；鼓勵(lì)確證實(shí)驗(yàn)室及篩查實(shí)驗(yàn)室通過(guò)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證認(rèn)可或按照認(rèn)證認(rèn)可的有關(guān)條款建立適宜的內(nèi)部質(zhì)量評(píng)價(jià)機(jī)制。外部質(zhì)量評(píng)價(jià)外部質(zhì)量評(píng)價(jià)由本實(shí)驗(yàn)室之外的機(jī)構(gòu)或單位組織,包括對(duì)質(zhì)量保證和質(zhì)量控制工作的評(píng)價(jià)，職能工作考核主要是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證工作，能力驗(yàn)證(PT)或室間質(zhì)量評(píng)價(jià)主要是評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制工作，是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室對(duì)未知樣品獲得正確結(jié)果的能力。所有艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室必須參加外部質(zhì)量評(píng)價(jià)，其中篩查實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加省級(jí)職能工作考核和PT。職能工作考核組織者：參比

27、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)組織確證中心實(shí)驗(yàn)室職能工作考核，確證中心實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)組織轄區(qū)內(nèi)艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室和篩查實(shí)驗(yàn)室的職能工作考核。頻度：每年對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行一次職能工作考核。方式：職能工作考核采取問(wèn)卷調(diào)查和現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)相結(jié)合的方式進(jìn)行。所有實(shí)驗(yàn)室必須接受問(wèn)卷調(diào)查,可對(duì)部分實(shí)驗(yàn)室(5-10%)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)抽查。問(wèn)卷調(diào)查1）省級(jí)考核至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：人員培訓(xùn)及能力，環(huán)境條件，儀器設(shè)備使用及校準(zhǔn)，管理性文件及實(shí)驗(yàn)記錄，檢測(cè)報(bào)告，試劑使用情況，樣品接受及保存情況，質(zhì)量保證和質(zhì)量控制。根據(jù)需要問(wèn)卷內(nèi)容可進(jìn)行合理調(diào)整。魁2）考核程序:由組織者發(fā)放問(wèn)卷,各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照要求，根據(jù)當(dāng)年實(shí)際情況逐項(xiàng)如實(shí)填寫實(shí)驗(yàn)室問(wèn)卷調(diào)查表，并在規(guī)

28、定時(shí)間內(nèi)反饋。3）考核結(jié)果判定：組織者接到調(diào)查問(wèn)卷后，根據(jù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各實(shí)驗(yàn)室的問(wèn)卷進(jìn)行匯總、統(tǒng)計(jì)、分析和評(píng)估。必要合格,時(shí)可調(diào)用有關(guān)實(shí)驗(yàn)的原始記錄進(jìn)行分析核查。分析各實(shí)驗(yàn)室考核結(jié)果，并進(jìn)行評(píng)分和評(píng)價(jià)：優(yōu)秀，良好,不合格。現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)1）評(píng)價(jià)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)室人員組成及其職責(zé)分工；實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、布局、恒溫設(shè)施；儀器設(shè)備及其使用、校準(zhǔn)記錄;質(zhì)量保證文件、實(shí)驗(yàn)室SOP文件及原始記錄；實(shí)驗(yàn)室的安全防護(hù)措施，安全用品及安全規(guī)程；消毒與污物處理方法及設(shè)施；HIV檢測(cè)資料數(shù)據(jù)庫(kù)的建設(shè)、存檔、備份、安全和保密；樣品保存和安全；開展的HIV檢測(cè)項(xiàng)目和檢測(cè)試劑。其它：包括檢測(cè)對(duì)象，各人群檢測(cè)情況，檢測(cè)前后咨詢，檢測(cè)中遇到的難題

29、一。現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)2）工作程序?qū)嶒?yàn)室人員全部到場(chǎng)，匯報(bào)人員組成及其職責(zé)分工、正常情況下實(shí)驗(yàn)室收樣、檢測(cè)、直至發(fā)出報(bào)杳的全過(guò)程（專家組可隨時(shí)提問(wèn)）。全面聽取上級(jí)主管部門和實(shí)驗(yàn)室人員介紹歷年檢測(cè)工作情況匯報(bào)、存在照懶蠡組的工作建議和今后工作的設(shè)想。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)提供相應(yīng)的文對(duì)實(shí)驗(yàn)室人員業(yè)務(wù)素質(zhì)、儀器設(shè)備、場(chǎng)地布局、室內(nèi)質(zhì)控及檢測(cè)對(duì)象、安全防護(hù)措施等進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)。討論分析年度考核中存在的問(wèn)題和經(jīng)驗(yàn)，指出不正確或有出入的結(jié)果，共同分種原因（可隨時(shí)提出問(wèn)題）。專家組對(duì)評(píng)價(jià)情況進(jìn)行討論，根據(jù)評(píng)價(jià)全面情況寫出實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)抽查報(bào)告并簽字。（當(dāng)?shù)貙?shí)驗(yàn)室人員回避）。式兩份，一份保留在實(shí)驗(yàn)室；另現(xiàn)場(chǎng)反饋：專家組向被評(píng)價(jià)單位及上級(jí)主管部門匯報(bào)評(píng)價(jià)情況及發(fā)現(xiàn)問(wèn)驗(yàn)有PT實(shí)&定盛確.愿It'包的要負(fù)演間主室確津驗(yàn)油驗(yàn)程實(shí)HC心中k證川證。鬻i.篩次1少至國(guó)用10由商一可置5O.播品成或河樣年。每詼構(gòu).藕級(jí)y及攘省”源搏rT、a、置11111者病。：織來(lái)室門性1織滋核度組品驗(yàn)測(cè)陽(yáng)實(shí)室組艾考頻年樣著,能力驗(yàn)證（PT）考核結(jié)果及判定標(biāo)準(zhǔn)1）抗體檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)采用PT得分實(shí)驗(yàn)室PT得分=該項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果可接受樣品數(shù)該項(xiàng)目總的檢測(cè)