法測(cè)定虎杖中白藜蘆醇和白藜蘆醇苷的含量11孔改doc

1、HPLC法測(cè)定降酶片中白藜蘆醇和虎杖苷的含量劉德茂1 史德勝2（1大連公安醫(yī)院，遼寧 大連 116011 2天津丹溪國(guó)藥研究所 天津 300061）降酶片由虎杖、白花舌蛇草、柴胡、茵陳等中藥組成，具有疏肝理氣，清熱利濕的功效，臨床主治慢性肝炎及早期肝硬化?；⒄葹槠渲魉幹?，白藜蘆醇和虎杖苷為其中的主要有效成分，因此可選擇白藜蘆醇和虎杖苷作為其質(zhì)量控制的定量指標(biāo)。本研究建立了HPLC法測(cè)定其主要有效成分白藜蘆醇和虎杖苷含量的方法。1.儀器與試劑LC10A型高效液相色譜儀；SPD10A紫外檢測(cè)器；Anastar色譜工作站；乙腈為色譜純，水為蒸餾水，其他試劑為分析純?；⒄溶諏?duì)照品（批號(hào) 11575-

2、200301），白藜蘆醇對(duì)照品（批號(hào) 111535-200301）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。降酶片由本院制劑室提供，批號(hào)060820、060821、060822。2.方法與結(jié)果2.1色譜分析條件：Irregular C18 柱 （4.6×250mm 5）；流動(dòng)相：乙腈：水（25：75）；流速：1.0ml·min-1；柱溫：35；檢測(cè)波長(zhǎng)：306nm；進(jìn)樣量：20l；理論塔板數(shù)以虎杖苷峰計(jì)不低于3000，以白藜蘆醇峰計(jì)不低于3000。2.2對(duì)照品溶液的制備：精密稱取虎杖苷對(duì)照品8.04mg、白藜蘆醇對(duì)照品6.12mg，分別置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻

3、，作為儲(chǔ)備液。各精密量取3ml，分別置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。2.3供試品溶液的制備：取本品20片，研細(xì)，取50mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理30分鐘，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。2.4線性關(guān)系考察：分別精密量取虎杖苷對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，白藜蘆醇對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別吸取20l進(jìn)樣，記錄峰面積。以對(duì)照品的濃度為橫坐標(biāo)（X），以相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)（Y

4、），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程。虎杖苷：Y=38364300X5194.1，=0.9999，進(jìn)樣濃度在0.008040.04020mg·ml-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系；白藜蘆醇：Y=85777166 2272.48，r=0.9999，進(jìn)樣濃度在0.006120.03060mg·ml-1與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.5陰性對(duì)照試驗(yàn)：按降酶片的處方量制備不含虎杖藥材的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液，吸取20l進(jìn)樣，按上述條件測(cè)定，結(jié)果表明，陰性樣品中其他成分對(duì)虎杖苷、白藜蘆醇色譜無(wú)干擾。2.6精密度試驗(yàn)：各取虎杖苷、白藜蘆醇對(duì)照品溶液，進(jìn)樣20l，連續(xù)進(jìn)樣

5、6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果峰面積RSD分別為0.36%、0.87%。2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：對(duì)同一供試品溶液，按上述色譜條件，于0、2、4、6、8小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果溶液8h內(nèi)穩(wěn)定，虎杖苷峰面積RSD為0.57%，白藜蘆醇峰面積為0.86%。2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一供試品樣品平行制備6份供試品溶液，依法檢測(cè)，測(cè)定虎杖苷、白藜蘆醇的含量，結(jié)果虎杖苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24.22mg/g，RSD=1.05%。白藜蘆醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.61 mg/g，RSD=1.42%。2.9回收率試驗(yàn)：采用加樣回收法。取已知含量的樣品，分別加虎杖苷、白藜蘆醇對(duì)照品適量，按樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定虎杖苷、白藜蘆醇的含量，計(jì)算回收率

6、。結(jié)果虎杖苷平均回收率為100.44%，RSD為1.67%；白藜蘆醇平均回收率為101.02%，RSD為1.86%（n=6）。2.10樣品的測(cè)定：將3批樣品分別按供試品溶液制備法制成溶液，依上述色譜條件分別進(jìn)樣20l，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中虎杖苷、白藜蘆醇的含量，結(jié)果見表1，色譜圖見圖1。表1 降酶片中虎杖苷含量測(cè)定的結(jié)果（n=3） Table1 Analysis of content of Peceid and Resveratol in Jiangmei Tablet (n=3)批號(hào) 虎杖苷的含量(mg·g-1) RSD（%） 白藜蘆醇的含量（mg·g-1） RSD（%）0

7、60820 24.25 1.49 18.62 1.81060821 24.48 1.32 18.57 1.54060822 24.23 1.30 19.08 1.36 A B C D圖1 虎杖苷對(duì)照品（A）、白藜蘆醇對(duì)照品（B）、供試品（C）和陰性對(duì)照（D）的色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of Peceid reference substance (A), Resveratol reference substance (B),Sample（C）and Sample without Polygonum cuspidatum Sieb (D)3.討論31一般白藜蘆醇和虎杖苷都能同時(shí)存在于植物中，二者在一定外界條件下會(huì)相互轉(zhuǎn)化。目前的研究表明反式異構(gòu)體是其活性成分，現(xiàn)一般測(cè)定反式的白藜蘆醇和虎杖苷的總量作為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。在葡萄及葡萄酒中同時(shí)發(fā)現(xiàn)了四種異構(gòu)體，而目前虎杖中的順式白藜蘆醇及其苷鮮見報(bào)道。因此用反式白藜蘆醇及虎杖苷為指標(biāo)性評(píng)價(jià)虎杖質(zhì)量是很有必要且合理的。32本文建立了用HPLC法測(cè)定虎杖中白藜蘆醇和虎杖苷的分析方法。選用甲醇超聲提取30min為最佳