紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的曲線(xiàn)繪制

1、一、測(cè)定溶液中物質(zhì)的含量可見(jiàn)或紫外分光光度法都可用于測(cè)定溶液中物質(zhì)的含量。測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度已知的溶液）和未知液（濃度待測(cè)定的溶液）的吸光度，進(jìn)行比較，由于所用吸收池的厚度是一樣的。也可以先測(cè)出不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),在選定的濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)應(yīng)該是一條直線(xiàn)，然后測(cè)定出未知液的吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查到其相對(duì)應(yīng)的濃度。含量測(cè)定時(shí)所用波長(zhǎng)通常要選擇被測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)，這樣做有兩個(gè)好處：靈敏度大，物質(zhì)在含量上的稍許變化將引起較大的吸光度差異；可以避免其它物質(zhì)的干擾。二、用紫外光譜鑒定化合物使用分光光度計(jì)可以繪制吸收光譜曲線(xiàn)。方法是用各種波長(zhǎng)不同的單色光分別通過(guò)某一濃度的溶液，

2、測(cè)定此溶液對(duì)每一種單色光的吸光度，然后以波長(zhǎng)為橫座標(biāo)，以吸光度為縱座標(biāo)繪制吸光度波長(zhǎng)曲線(xiàn)，此曲線(xiàn)即吸收光譜曲線(xiàn)。各種物質(zhì)有它自己一定的吸收光譜曲線(xiàn)，因此用吸收光譜曲線(xiàn)圖可以進(jìn)行物質(zhì)種類(lèi)的鑒定。當(dāng)一種未知物質(zhì)的吸收光譜曲線(xiàn)和某一已知物質(zhì)的吸收光譜曲線(xiàn)開(kāi)關(guān)一樣時(shí)，則很可能它們是同一物質(zhì)。一定物質(zhì)在不同濃度時(shí)，其吸收光譜曲線(xiàn)中，峰值的大小不同，但形狀相似，即吸收高峰和低峰的波長(zhǎng)是一定不變的。紫外線(xiàn)吸收是由不飽和的結(jié)構(gòu)造成的，含有雙鍵的化合物表現(xiàn)出吸收峰。紫外吸收光譜比較簡(jiǎn)單，同一種物質(zhì)的紫外吸收光譜應(yīng)完全一致，但具有相同吸收光譜的化合物其結(jié)構(gòu)不一定相同。除了特殊情況外，單獨(dú)依靠紫外吸收光譜決定一個(gè)未

3、知物結(jié)構(gòu)，必須與其它方法配合。紫外吸收光譜分析主要用于已知物質(zhì)的定量分析和純度分析。選幾個(gè)體積梯度，然后稀釋成相同的體積，得到了不同濃度C的幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液樣組，用紫外分光光度計(jì)分別測(cè)得相應(yīng)的吸光度A1、A2、A3，然后要以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制曲線(xiàn)。當(dāng)然有時(shí)候根據(jù)實(shí)際需要，也會(huì)有小小的變動(dòng)。配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)量，得到濃度與吸光度的曲線(xiàn)，并且利用線(xiàn)性擬合得到回歸方程，直接利用Origin的線(xiàn)性擬合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式為y=A+Bx。那是否需要強(qiáng)制令A(yù)=0,再來(lái)進(jìn)行擬合呢？如果y=A+Bx這樣的形式可以，那么A需要多小才是可以接受的？答：如果用

4、樣品空白溶液做參比，一般可以設(shè)置強(qiáng)制過(guò)零點(diǎn)；如果用蒸儲(chǔ)水做參比，一般不能強(qiáng)制過(guò)零點(diǎn)。做曲線(xiàn)時(shí)一是要帶雙空白并減去空白A0,二是應(yīng)加0回歸。減去A0是希望消除試驗(yàn)方法固定偏倚對(duì)校準(zhǔn)曲線(xiàn)的影響，當(dāng)用校準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)估計(jì)未知樣的濃度時(shí)，要考慮到試樣的測(cè)量吸光度也會(huì)受到固定偏倚的影響，如果校準(zhǔn)曲線(xiàn)和試樣測(cè)定過(guò)程中出現(xiàn)的偏倚一樣，偏倚是無(wú)需校正的，可有時(shí)兩者的操作往往不是同時(shí)同批進(jìn)行的，如由于時(shí)間或批次不同，固定偏倚有所變化，那么兩者的吸光度就要做不同的校正。即在每批分析時(shí)帶空白，并對(duì)相應(yīng)的信號(hào)進(jìn)行校正。試驗(yàn)證明加零回歸的校準(zhǔn)曲線(xiàn)與不加零回歸校準(zhǔn)曲線(xiàn)比較，兩者的r和b值均無(wú)差異，但加零回歸校準(zhǔn)曲線(xiàn)截距a的絕對(duì)

5、值明顯變小，因此在作校準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸計(jì)算時(shí)必須加零回歸，使回歸線(xiàn)接近原點(diǎn)。截距a對(duì)低濃度樣品計(jì)算卻影響甚大。尤其是當(dāng)樣品濃度接近空白濃時(shí)，用回歸方程計(jì)算時(shí)會(huì)出現(xiàn)負(fù)值，這是因?yàn)樾?zhǔn)曲線(xiàn)回歸后截距a空白信號(hào)值所致，并非樣品中存在產(chǎn)生負(fù)值的物質(zhì)。用回歸方程計(jì)算結(jié)果將引入一個(gè)固定的誤差，當(dāng)a為正時(shí)，計(jì)算結(jié)果為負(fù)誤差，當(dāng)a為負(fù)時(shí)，計(jì)算結(jié)果為正誤差。本來(lái)樣品的信號(hào)值>空白信號(hào)值，計(jì)算出來(lái)的結(jié)果卻為負(fù)值，本來(lái)不可能檢出的，卻通過(guò)計(jì)算被檢出了。若將這些截然相反的結(jié)果上報(bào)將誤導(dǎo)數(shù)據(jù)的后續(xù)應(yīng)用工作。因此應(yīng)按規(guī)定將回歸方程中的截距a與0作t檢驗(yàn)，當(dāng)取95%置信水平，經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異時(shí)，a作0處理，方程y=a+

6、bx簡(jiǎn)化為y=bx后再投入使用，一般情況下a<0.005和r>0.999時(shí)可不必進(jìn)行檢驗(yàn)，a=處理(3)。回歸方程若不經(jīng)過(guò)上述檢驗(yàn)和處理而直接投入使用，必將使計(jì)算結(jié)果引入差值相當(dāng)于截距a的系統(tǒng)誤差。肉桂醛苯甲醛雙組分體系的紫外光譜特性研究：標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制及檢出限分別用空白液配制桂醛標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度系列0.595mg/L、0.794mg/L、0.99211mg/L、2.013nmg/L、3.005mg/LL、3.997mg/L、4.990mg/L、6.010mg/L、7.003mg/L和苯甲醛標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度系列0.998mg/L、1.995mg/L、2.993mg/L、3.997mg/L、

7、5.986mg/L、7.981mg/L、10.026mg/L、12021mg/L.以空白液為參比，于249nm和291nm處分別測(cè)定苯甲醛和桂醛的吸光度.以吸光度為縱坐標(biāo)，溶液濃度為橫坐標(biāo)，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，如圖3所示.醒iJid求度mg/LI)246810t112圖3桂醛和基甲醛的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Fig3Thextmndardcurveofcinnannldehydcandbenzaldehyde經(jīng)線(xiàn)性回歸，得桂醛回歸方程：A=01706x十0.004,A為吸光度，x為桂醛質(zhì)量濃度(mg/L),相關(guān)系數(shù)r=0.9997,方法的線(xiàn)性范圍0.88mg/L,檢出限0.0352mg/Lo苯甲醛的回歸方程為：A=0.1169x+0.0007,x為桂醛質(zhì)量濃度(mg/L),相關(guān)系數(shù)：=0.9998,方法的線(xiàn)性范圍1-12mg/L,檢出限0.0796mg/L。紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，先建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，大概測(cè)多少個(gè)樣比較準(zhǔn)確？還有一般測(cè)的時(shí)候如何分布濃度會(huì)使得結(jié)果比較準(zhǔn)確呢？答：標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立一般選取5個(gè)以上的濃度水平，濃度選取范圍一般在方法規(guī)定濃度的70%130%，但紫外分光光度法還要考慮吸收值在0.20.6之間比較好！物質(zhì)的最大吸收峰是在可見(jiàn)光范圍內(nèi)的。所以想問(wèn)下那樣的話(huà)最好在什么范圍比