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1、奶牛注射維生素ADE后的受胎率變化摘要:為了研究新獸藥維生素ADE注射液對(duì)奶牛受胎率的影響,試驗(yàn)選取190 頭 60d 以上不發(fā)情或未受孕荷斯坦奶牛 ,分別在4個(gè)牧場(chǎng)按同一試驗(yàn)方案開(kāi)展試驗(yàn),每個(gè)牧場(chǎng)分為對(duì)照組、試驗(yàn)1 4 組,其中對(duì)照組不予給藥,試驗(yàn)1 4 組分別給予促性腺激素釋放激素+氯前列醇鈉(GnRH+PG-Cl)、GnRH+PG-Cl+維生素ADE注射液、維生素ADE注射液、維生素 AD+維生素E注射液 ,以觀察維生素ADE注射液對(duì)奶牛受胎率的影響。結(jié)果表明:試驗(yàn)?zāi)膛E浞N后45d 經(jīng)直腸檢查發(fā)現(xiàn), 與對(duì)照組相比,4 個(gè)牧場(chǎng)各試驗(yàn)組奶牛的發(fā)情率和受胎率均明顯升高 ,其中試驗(yàn)1 組、試驗(yàn)2
2、 組受試奶牛的發(fā)情率和受胎率均呈現(xiàn)出極顯著提高(P<0.01);試驗(yàn)3 組和試驗(yàn)4 組受試奶牛發(fā) 情 率 表 現(xiàn) 為 顯 著 提 高 (P<0.05), 受 胎 率 為 極 顯 著 提 高(P<0.01)。說(shuō)明維生素ADE 注射液與激素類(lèi)藥物聯(lián)合應(yīng)用(或單獨(dú)交替使用)可以有效提高奶牛的發(fā)情率和受胎率。關(guān)鍵詞:維生素ADE 注射液 ;奶牛;發(fā)情率 ;受胎率 ;促性腺激素釋放激素(GnRH); 氯前列醇鈉(PG-Cl);奶牛不孕癥嚴(yán)重阻礙著奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,對(duì)奶牛養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益造成重大影響。因此 ,提高奶牛養(yǎng)殖業(yè)人工輸精受胎率至關(guān)重要,尤其是對(duì)長(zhǎng)期不發(fā)情的奶牛,需要采取同期發(fā)情
3、處理等措施以提高其繁殖率1 。通常將達(dá)到初配年齡的母牛,或者產(chǎn)后60d 以上的母牛,無(wú)發(fā)情表現(xiàn)或有發(fā)情表現(xiàn)但 經(jīng)三個(gè)情期配種仍未受孕的癥狀,均視為不孕癥1,2 。維生素ADE注射液是由脂溶性維生素A、維生素D3 和維生素E混合制備出的制劑,臨床上用于預(yù)防和治療維生素A、維生素D 和維生素E 缺乏癥 ,還可輔助治療夜盲癥、角膜軟化、皮炎、佝僂病、骨軟化癥、白肌癥和不孕癥等3,4,5 。促性腺激素釋放激素(GnRH)是動(dòng)物生殖生理的中樞啟動(dòng)激素和調(diào)控激素, 通過(guò)下丘腦-垂體 -性腺軸緊密調(diào)控動(dòng)物的生殖功能和行為6 。氯前列醇鈉(PG-Cl)屬于藥效較強(qiáng)的前列腺素F2類(lèi)似物 , 可引起黃體形態(tài)和功能
4、的退化,而降低動(dòng)物血液中孕酮的含 量,達(dá)到解除孕酮對(duì)GnRH釋放抑制的目的7 。本試驗(yàn)采用維生素 ADE注射液和生殖激素處理產(chǎn)后60 d 以上不發(fā)情或未受孕奶牛 ,觀察維生素ADE 注射液對(duì)奶牛受胎率的影響,以期為各牧場(chǎng)的繁育工作提供參考。1 、試驗(yàn)地點(diǎn)選擇寧夏地區(qū)養(yǎng)殖規(guī)模在5000 頭左右的4 個(gè)牧場(chǎng)作為試驗(yàn)地點(diǎn) ,并按同一試驗(yàn)方案同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。2 、材料2.1 、試驗(yàn)動(dòng)物選取產(chǎn)后60 d 以上不發(fā)情或未受孕、但無(wú)嚴(yán)重疾病的荷斯坦奶牛共計(jì)190 頭作為受試動(dòng)物,4 個(gè)牧場(chǎng)符合要求的試驗(yàn)用奶牛分別為49 頭、 51 頭、 40 頭和50 頭。2.2 、試驗(yàn)藥品對(duì)照藥物注射用促性腺激素釋放激素主
5、要成分為促性腺激素釋放激素(GnRH)100 g瓶/,批號(hào)為20161202 、注射用氯前列醇鈉 主要成分為氯前列醇鈉(PG-Cl)0.5mg/ 瓶,批號(hào)為20161202, 購(gòu)自寧波三生藥業(yè)有限公司;受試藥物維生素ADE 注射液 (100 mL/ 瓶,主要成分為維生素A 1 000 萬(wàn)單位 +維生素D3 100萬(wàn)單位 +維生素E 3萬(wàn)單位 ,批號(hào)為20170301), 由寧夏智弘生物科技有限公司生產(chǎn)和提供;對(duì)照藥物維生素AD 注射液(5 mL/ 支,主要成分為維生素A 25 萬(wàn)單位 +維生D2 2.5 萬(wàn)單位 , 批號(hào)為20170102) 和對(duì)照藥物維生素E注射液 (10 mL/ 支,主要成
6、分為維生素E 500 mg,批號(hào)為20170201), 均購(gòu)自四川維爾康動(dòng)物藥業(yè)有限公司。3、方法3.1 分組將 190 頭受試荷斯坦奶牛均分為對(duì)照組、試驗(yàn)1 組、試驗(yàn) 2 組、試驗(yàn)3 組和試驗(yàn)4 組,每組38 頭,且每個(gè)牧場(chǎng)的試驗(yàn)用奶牛都設(shè)置對(duì)照組和試驗(yàn)組,具體分組情況見(jiàn)表1。表 1試驗(yàn)用荷斯坦奶牛的分組情況3.2 、給藥及處理對(duì)照組 :不予給藥 ,直接進(jìn)行人工輸精。試驗(yàn)1 組:采用定時(shí)輸精程序處理,即第1 天每頭試驗(yàn)?zāi)膛<∪庾⑸銰nRH 100g第,8天每頭試驗(yàn)?zāi)膛<∪庾⑸銹G-Cl 0.5 mg,48 h 后每頭試驗(yàn)?zāi)膛T俅渭∪庾⑸銰nRH 100 g,觀察受試奶牛的發(fā)情表現(xiàn)并記錄,若發(fā)
7、情即可直接人工輸精(發(fā)情后16 18 h 為最佳輸精時(shí)間),若未發(fā)情則直接給母牛進(jìn)行人工輸精。試驗(yàn)2 組:采用定時(shí)輸精程序處理,即第1 天每頭試驗(yàn)?zāi)膛<∪庾⑸銰nRH 100 g,同時(shí)每頭試驗(yàn)?zāi)膛C看畏贮c(diǎn)肌肉注射維生素ADE注射液10 mL,連續(xù)注射3 d,第 8天每頭試驗(yàn)?zāi)膛<∪庾⑸銹G-Cl 0.5 mg,48 h后每頭試驗(yàn)?zāi)膛T俅渭∪庾⑸銰nRH 100 觀g,察受試奶牛的發(fā)情表現(xiàn)并記錄 ,若發(fā)情即可直接人工輸精 (發(fā)情后 16 18 h 為最佳輸精時(shí)間 ),若未發(fā)情則直接給母牛進(jìn)行人工輸精。試驗(yàn)3組:采用定時(shí)輸精程序處理,即每頭試驗(yàn)?zāi)膛C看畏贮c(diǎn)肌肉注射維生素ADE 注射液10 mL,連
8、續(xù)注射3 d,觀察受試奶牛的發(fā)情表現(xiàn)并記錄,若發(fā)情即可直接人工輸精(發(fā)情后16 18h為最佳輸精時(shí)間),若未發(fā)情則直接給母牛進(jìn)行人工輸精。試驗(yàn)4組:采用定時(shí)輸精程序處理,即每頭試驗(yàn)?zāi)膛C看畏贮c(diǎn)于肌肉注射維生素AD注射液20 mL,連續(xù)注射3 d;同時(shí)肌肉注射維生素E注射液60 mL, 連續(xù)注射3 d, 觀察受試奶牛的發(fā)情表現(xiàn)并記錄,若發(fā)情即可直接人工輸精(發(fā)情后16 18h 為最佳輸精時(shí)間),若未發(fā)情則直接給母牛進(jìn)行人工輸精。所有試驗(yàn)?zāi)膛T谂浞N45 d 后進(jìn)行直腸檢查。3.3 、數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,采用單因素方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn),采用Duncan氏法進(jìn)
9、行多重比較檢驗(yàn)。選擇4 個(gè)牧場(chǎng)重復(fù)試驗(yàn),每個(gè)牧場(chǎng)的樣本數(shù)為50 頭左右受試奶牛。4 、結(jié)果與分析采用維生素ADE注射液和生殖激素處理產(chǎn)后60 d 以上不發(fā)情或未受孕荷斯坦奶牛后,各組試驗(yàn)?zāi)膛5陌l(fā)情率和受胎 率統(tǒng)計(jì)計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2 和表3。表2不同牧場(chǎng)各組試驗(yàn)?zāi)膛5陌l(fā)情數(shù)和受胎數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表 3各組試驗(yàn)?zāi)膛5陌l(fā)情率和受胎率計(jì)算結(jié)果注:發(fā)情率 =發(fā)情頭數(shù)/ 處理頭數(shù)×100%受;胎率 =受胎數(shù) /輸精牛數(shù)×100%。同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)大寫(xiě)字母完全不同表示差異極顯著(P<0.01),小寫(xiě)字母完全不同表示差異顯著(P<0.05),小寫(xiě)字母相同表示差異不顯著(P>0.05)。
10、從表2 和表3 可以看出:試驗(yàn)?zāi)膛E浞N45d 后經(jīng)直腸檢查發(fā)現(xiàn) ,與對(duì)照組相比,4個(gè)牧場(chǎng)各試驗(yàn)組奶牛的發(fā)情率和受 胎率均明顯升高,其中試驗(yàn)1 組、試驗(yàn)2 組受試奶牛的發(fā)情率和受胎率均呈現(xiàn)出極顯著的提高(P<0.01);試驗(yàn)3組和試驗(yàn)4組受試奶牛發(fā)情率為顯著提高(P<0.05),受胎率為極顯著提高(P<0.01)。與試驗(yàn)3 組和試驗(yàn)4 組相比 ,4 個(gè)牧場(chǎng)的試驗(yàn)1 組與試驗(yàn)2組受試奶牛發(fā)情率均表現(xiàn)為顯著提高(P<0.05),受胎率為極顯著提高(P<0.01),且試驗(yàn)2組受試奶牛的發(fā)情率和受胎 率為最高 ;而試驗(yàn)3 組與試驗(yàn)4 組受試奶牛相比較,其發(fā)情率和受胎率無(wú)顯著
11、變化(P>0.05)。5 、討論維生素雖然不是能量物質(zhì),也不是構(gòu)成機(jī)體組織或器官 的原料 ,但它們對(duì)于機(jī)體物質(zhì)代謝的正常進(jìn)行、能量轉(zhuǎn)變以及生理功能的維持等起著十分重要的作用,尤其是維生素A、維生素 D和維生素E對(duì)反芻動(dòng)物的生殖系統(tǒng)也具有一定的影響,如維生素A 缺乏會(huì)引起雌性反芻動(dòng)物不發(fā)情、屢配不孕、流產(chǎn)、死胎、胎盤(pán)滯留等癥狀,也會(huì)引起雄性反芻動(dòng)物曲細(xì)精管內(nèi)精子的生成;維生素D對(duì)機(jī)體鈣磷的吸收和代謝具有重要的調(diào)節(jié)作用,其缺乏會(huì)影響胚胎骨骼系統(tǒng)的發(fā)育;維生素E又名為 “生育酚 ”具,有促進(jìn)垂體分泌促性腺激素的作用,其缺乏會(huì)引起流產(chǎn)、 胚胎發(fā)育異常和死胎等癥狀4 。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn), 奶牛和小母牛
12、在日糧中缺乏-胡蘿卜素會(huì)引起產(chǎn)后發(fā)情延 緩、排卵延緩、子宮對(duì)合延遲和囊性卵巢發(fā)生率增加等一系列生殖問(wèn)題;而維生素E 對(duì)牛的排卵率、 受孕率、胚胎存活率、精子活力和胎膜排出等生殖問(wèn)題具有影響8 。母牛發(fā)情通常會(huì)有明顯的行為表現(xiàn),如哞叫、弓腰、舉尾、興奮、排尿頻繁 等,在整個(gè)發(fā)情期,以上臨床表現(xiàn)會(huì)呈現(xiàn)出先弱后強(qiáng),再逐步減弱至消失。 母牛的發(fā)情時(shí)間可持續(xù)約18 h,排卵時(shí)間出現(xiàn)在性欲消失后的10 15h,因此合適輸精時(shí)間為發(fā)情的中后期或 后期,以發(fā)情16 18h 為最佳輸精時(shí)間。在臨床上也不乏見(jiàn)到母牛發(fā)情期持續(xù)時(shí)間短,或母牛安靜發(fā)情和夜間發(fā)情等現(xiàn) 象,這些母牛輸精時(shí)間和受胎率對(duì)配種人員是一大挑戰(zhàn)。在
13、本試驗(yàn)過(guò)程中,同樣遇到了發(fā)情癥狀很難分辨的奶牛,根據(jù)配種人員豐富臨床經(jīng)驗(yàn)選擇合適輸精時(shí)間,很大程度上提高了受 胎率。因此,母牛受胎率的提高,需要配種人員具備豐富的臨 床經(jīng)驗(yàn)和精湛的配種技術(shù),也就是說(shuō)發(fā)情癥狀是基石,經(jīng)驗(yàn)與技術(shù)是關(guān)鍵。程之淵等9 使用中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧所研制的維生素 ADE 注射液治療卵巢靜止的經(jīng)產(chǎn)母牛,發(fā)現(xiàn)肌內(nèi)注射維生素ADE液后,受試奶牛于7 10 d 出現(xiàn)發(fā)情癥狀,直腸檢查發(fā)現(xiàn)卵 巢增大、有卵泡發(fā)育;育成母牛注射維生素ADE液后14 20 d 表現(xiàn)發(fā)情 ,比未注射維生素ADE 液的對(duì)照母牛發(fā)情日期提前80 120 d。黃占欣10 利用激素和維生素治療奶牛不孕癥的研究發(fā)現(xiàn) ,
14、采用清宮兼補(bǔ)充維生素AD 液和維生素E 液及孕激素的母牛 ,受胎率最高,且較對(duì)照組提高了49.5%。樊滌東等11 給予奶牛肌肉注射維生素AD注射液后,提高了首次受胎率, 其推測(cè)維生素AD 注射液可提高子宮腺體功能活動(dòng),激發(fā)性激素效果 ,促使母牛血清精子凝集效價(jià)的下降,從而減少退化胚 胎數(shù),提高胚胎成活率。李雪等12 研究維生素ADE 注射液聯(lián)合 GnRH和 PGF2誘導(dǎo)奶牛同期發(fā)情,發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥后奶牛的 同期發(fā)情率和受胎率明顯提高,該研究結(jié)果說(shuō)明維生素ADE 注射液對(duì)奶牛同期發(fā)情有很好的誘導(dǎo)作用。通過(guò)本試驗(yàn)結(jié)果可以明顯看出,激素類(lèi)藥物、 激素聯(lián)用維生素ADE注射液、 維生素ADE 注射液、維生
15、素AD 注射液 +維生素E 注射液分別使用時(shí) ,給藥奶牛發(fā)情率和受胎率顯著高于未給藥奶牛(對(duì)照組)。但激素聯(lián)合維生素ADE 注射液對(duì)奶牛受胎率明顯高于激素類(lèi)藥物單獨(dú)使用,說(shuō)明維生素ADE 注射液可以改善奶牛發(fā)情率和受胎率低的情況。維生素ADE 注射液、維生素AD注射液 +維生素E注射液對(duì)奶牛發(fā)情率和受胎率也有一定的影響,不過(guò) ,本試驗(yàn)在臨床使用維生素AD 注射液 +維生素E 注射液時(shí)觀察到其對(duì)受試奶牛的刺激性也較高,且使用不方便。6 、結(jié)論根據(jù)前期研究結(jié)果及本試驗(yàn)研究結(jié)果,建議牧場(chǎng)在臨床 治療產(chǎn)后60d 以上不發(fā)情或未受孕的奶牛時(shí),將維生素ADE 注射液與激素類(lèi)藥物聯(lián)合應(yīng)用(或單獨(dú)交替使用)可
16、以有效提高奶牛的發(fā)情率和受胎率。參考文獻(xiàn)1 楊利國(guó).動(dòng)物繁殖學(xué)M.2版.北京 :中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2010.2 齊長(zhǎng)明 .奶牛疾病學(xué)M. 北京 :中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2006.3 張玉彥 ,楊玉東 ,馮巖,等.維生素ADE 注射液的研究與應(yīng)用J.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2018,39(5):120 -123.4 吳春燕 ,張金寶 ,劉海艷 ,等.HPLC測(cè)定維生素ADE注射液中三種維生素的含量J.中國(guó)獸藥雜志,2018,52 (7):52 -58.5 張玉彥 ,狄良嬌 ,王莉 ,等.HPLC 法測(cè)定維生素ADE 注射液中苯甲醇的含量 J.畜牧與獸醫(yī) ,2018,50 (12):42 -46.6 CLARKEH,DHILLO W S,JAYASENAC N.Comprehensive review on kisspeptin and its role in reproductive disordersJ.Endocrinol Metab,2015,30(2):124 -141.7 周濤 ,韓苗苗,陳樹(shù)林,等.氯前列醇鈉對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3體外生長(zhǎng)的影響 J.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 ,2009,30(10):18 -22.8 BINDARI Y R,SHRESTHAS,SHRESTHAN,etal.Effects of nutritiononreproduction -areviewJ.Adv
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