AYLS7062醫(yī)院感染標(biāo)本的采集3.0

1、 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科作業(yè)指導(dǎo)書文件編號: AYL-S7-063版本:3.0頁碼: 第5頁 共6頁編寫者：沈繼錄審核者： 批準(zhǔn)人： 生效日期：2012.1.1文件發(fā)放范圍：微生物組文件年度審核審核者：審核者：審核者：審核者：日期：日期：日期：日期：醫(yī)院感染標(biāo)本的采集1 檢驗項目 環(huán)境空氣的監(jiān)測、物體表面的監(jiān)測、手和皮膚黏膜的監(jiān)測、內(nèi)鏡的監(jiān)測、醫(yī)療器械的監(jiān)測、血液凈化系統(tǒng)的監(jiān)測、使用中消毒滅菌劑的監(jiān)測、壓力蒸汽滅菌器的監(jiān)測等2 物品準(zhǔn)備與檢驗申請2.1 領(lǐng)取標(biāo)本容器。請拿檢驗申請單到內(nèi)科醫(yī)技樓三樓細(xì)菌室登記領(lǐng)取。具體領(lǐng)取容器見下表標(biāo)本及監(jiān)測目的空氣培養(yǎng)物體表面、手及皮膚黏膜監(jiān)測內(nèi)鏡監(jiān)測

2、醫(yī)療器械(活檢鉗)監(jiān)測血液凈化系統(tǒng)監(jiān)測使用中消毒劑監(jiān)測壓力蒸汽滅菌器監(jiān)測所需容器營養(yǎng)瓊脂平板含滅菌生理鹽水的試管無菌試管含滅菌肉湯的試管無菌試管無菌試管自備2.2 填寫檢驗申請單。用鋼筆填寫，字跡清楚，填寫完整。填寫內(nèi)容包括科別、標(biāo)本類型及送檢目的、送檢時間。申請單上須注明采樣具體部位、采集位點編號、標(biāo)本性質(zhì)等。如空氣培養(yǎng)應(yīng)注明是那個房間及那個點；物體表面應(yīng)注明是何物品；手和皮膚應(yīng)注明左手或右手；血液凈化應(yīng)注明是入口還是出口；使用中消毒液應(yīng)注明屬那類消毒液。3 標(biāo)本采集方法3.1 空氣監(jiān)測3.1.1 采樣時間：在消毒處理后、進(jìn)行醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣3.1.2 采樣方法：平板暴露法：室內(nèi)面積30m

3、²，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點，內(nèi)、外布點部位距墻壁1m處；室內(nèi)面積30m²，設(shè)四角及中央5點，四角的布點部位均距墻壁1m。采樣時將普通營養(yǎng)瓊脂平板（直徑9cm）放在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度為距地面80-150cm。采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5min，蓋好立即送檢。注意：采樣前關(guān)好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min進(jìn)行采樣。3.2 物體表面監(jiān)測3.2.1 采樣時間：在消毒處理后4h內(nèi)進(jìn)行采樣。3.2.2 采樣方法：被采樣物體面積100cm²，應(yīng)取全部物體表面；物體面積100cm²，則取100cm²。用5cm×5cm的標(biāo)

4、準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，連續(xù)采樣1-4個規(guī)格板面積，然后剪去或折去采樣人手接觸部位，將棉拭子投入裝有10ml采樣液（含相應(yīng)中和劑的磷酸緩沖液）的試管內(nèi)送檢。門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。3.3 手和皮膚、黏膜監(jiān)測3.3.1 采樣時間：一般要求在接觸病人、從事醫(yī)療、護(hù)理活動前進(jìn)行采樣。3.3.2 采樣方法：手的采樣：被檢人五指并攏，用浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子1支，在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦各2次（一只手涂擦面積約為30cm²），并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸

5、部位，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的采樣液試管內(nèi)送檢。皮膚粘膜采樣：用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦5次，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的皮膚黏膜用棉拭子直接涂擦采樣。皮膚黏膜采樣處，若表面不足5cm×5cm可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。3.4 內(nèi)鏡監(jiān)測3.4.1 采樣時間：在消毒后使用前進(jìn)行進(jìn)行采樣。3.4.2 采樣方法：用無菌注射器抽取10ml含相應(yīng)中和劑的緩沖液，從待檢內(nèi)鏡活檢口注入，用15ml無菌試管從

6、活檢出口收集，立即送檢。3.5 醫(yī)療器械監(jiān)測3.5.1 采樣時間：在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)進(jìn)行采樣。3.5.2 采樣方法：取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管（其中一管作陽性對照）與4管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為15ml/管。 取5付注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次，洗下管內(nèi)細(xì)菌，混合后接種需-厭氧菌培養(yǎng)管（共6管，其中1管作陽性對照）與霉菌培養(yǎng)管（共4管）。接種量：1ml注射器為0.5ml，2ml注射器為1ml，5-10ml注射器為2ml，20-50ml注射器為5ml。培養(yǎng)基用量：接種量為2ml以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。 手術(shù)鉗、鑷子等大

7、件醫(yī)療器械取2件用蘸有無菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養(yǎng)管（共6管，其中1管作陽性對照）與霉菌培養(yǎng)基（共4管）。接種量為1ml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。3.5.3 注意事項：送檢時間不得超過6h，若樣品保存于0-4，則不得超過24h；被采樣本面積100cm²取全部面積，被采樣本面積100cm²，取100cm²；若消毒因子為化學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。3.6 血液凈化系統(tǒng)監(jiān)測3.6.1 采樣時間：在透析用水和透析液制作好后即將進(jìn)行透析前采樣。3.6.2 采樣方法：用無菌注射器吸取透析用水或

8、透析液2-5ml，放入無菌管中送檢。3.7 使用中性消毒劑、滅菌劑監(jiān)測3.7.1 采樣時間：更換前、使用中的消毒劑與滅菌劑3.7.2 采樣方法：在無菌條件下，用無菌注射器抽吸1ml被檢液加入9ml含相應(yīng)中和劑的稀釋液中混勻送檢。3.8 壓力蒸汽滅菌器監(jiān)測3.8.1 采樣時間：使用中的壓力蒸汽滅菌器3.8.2 采樣方法：將2個自含式生物指示物分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，放于一標(biāo)準(zhǔn)測試包中心部位。預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器及下排氣壓力蒸汽滅菌器標(biāo)準(zhǔn)測試包均置于滅菌柜內(nèi)排氣口上方。手提壓力蒸汽滅菌器將儲物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。經(jīng)1個滅菌周期后，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗包或儲物盒中的自含式生物指示菌片，將

9、安瓿折斷或擠破，讓管內(nèi)溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基玉嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片融為一體，與1支陽性對照管一起送細(xì)菌室。附：1 各類環(huán)境中空氣、物體表面、醫(yī)護(hù)人員手細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境類別范圍空氣 菌落總數(shù)(cfu/m³)物體表面菌落總數(shù)(cfu/m²)醫(yī)護(hù)人員手菌落總數(shù)(cfu/m²)空氣、物表、醫(yī)護(hù)人員手致病菌類層流潔凈手術(shù)室、層流潔凈病房1055不得檢出類普通手術(shù)室、產(chǎn)房、嬰兒室、早產(chǎn)兒室、普通保護(hù)性隔離室、供應(yīng)室無菌區(qū)、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房20055不得檢出類兒科病房、婦產(chǎn)科檢查室、注射室、換藥室、治療室、供應(yīng)室清潔區(qū)、急診室、化驗室、各類普通病房和房間50

10、01010不得檢出類傳染病科及病房1515不得檢出注：空氣和物體表面的致病菌是指金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌。醫(yī)護(hù)人員手的致病菌：、類區(qū)域致病菌指金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌；、類區(qū)域致病菌指金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門菌。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房醫(yī)務(wù)人員手上，不得檢出沙門菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌。2 內(nèi)鏡、醫(yī)療器械、血液凈化系統(tǒng)、消毒滅菌劑、壓力蒸汽滅菌器細(xì)菌菌落總數(shù)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)類別執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)鏡消毒后內(nèi)鏡：20cfu/件，不能檢出致病菌；滅菌后內(nèi)鏡：無細(xì)菌生長醫(yī)療器械進(jìn)入人體：無細(xì)菌生長；接觸黏膜：20cfu/100cm²，致病微生物不得檢出；接觸皮膚：200cfu/100cm²，致病微生物不得檢出血液凈化系統(tǒng)透析用水：200cfu/ml；透析液：2000cfu/ml，不得檢出致病菌消毒滅菌劑消毒劑：100cfu/ml，不能檢出致病菌；滅菌劑：無細(xì)菌生長壓力蒸汽滅菌器陽性對照：陽性，監(jiān)測結(jié)果：陰性3 層流手術(shù)室空氣監(jiān)測（暫未開展）3.1 采樣時間：級潔凈手術(shù)室和潔凈輔助用房檢測前，系統(tǒng)應(yīng)已經(jīng)運行15min，其他潔凈房間應(yīng)已運行40min。3.2 采樣方法：平板暴露法：用直徑90mm培養(yǎng)皿在空氣中暴露30m