葛根芩連湯藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)網(wǎng)絡(luò)教育學(xué)院畢 業(yè) 論 文校外學(xué)習(xí)中心： 年 級(jí)： 專(zhuān) 業(yè)： 學(xué) 號(hào)： 姓 名： 實(shí) 習(xí) 單 位： 實(shí) 習(xí) 科 室： 實(shí) 習(xí) 時(shí) 間： 論 文 題 目： 年 月 日葛根芩連湯藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展摘要葛根芩連湯，出自著名的中醫(yī)古籍、由張仲景所著的傷寒論，處方有葛根、黃芩、黃連、甘草四味藥組成，具有輕清解肌、清熱止利等功效，主要用來(lái)治療濕熱所致的腹瀉與痢疾。是中藥治療急性腹瀉的經(jīng)典方劑。中藥的作用特點(diǎn)就是多途徑、多組分、多靶點(diǎn)，因此中藥的藥代動(dòng)力學(xué)研究是中藥研究的關(guān)鍵技術(shù)之一。本文詳細(xì)地闡述了葛根芩連湯的概況、化學(xué)成分、有效成分以及臨床應(yīng)用現(xiàn)狀，并且較為系統(tǒng)地綜述了葛根芩連湯有效成分及其

2、藥代動(dòng)力學(xué)的研究進(jìn)展，詳細(xì)介紹了采用現(xiàn)代色譜及其聯(lián)用技術(shù)對(duì)中藥復(fù)方有效成分進(jìn)行研究的方法，并展望了以后葛根芩連湯藥代動(dòng)力學(xué)的主要研究方向。關(guān)鍵詞：葛根芩連湯 藥代動(dòng)力學(xué) 研究進(jìn)展目錄引言 4一、葛根芩連湯概述及臨床應(yīng)用現(xiàn)狀 4（一）概述 4（二）化學(xué)成分 4（三）臨床應(yīng)用現(xiàn)狀 5二、 葛根芩連湯有效成分研究 5（一）有效成分研究現(xiàn)狀 6（二）研究方法 6三、葛根芩連湯有效成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究 7（一） 儀器與材料 7（二） 實(shí)驗(yàn)方法 71、灌胃液制備 72、動(dòng)物處理 83、色譜條件 84、血漿預(yù)處理及測(cè)定 8（三）討論 8四、總結(jié)與展望 9五、參考文獻(xiàn) 9葛根芩連湯藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展引言葛根芩

3、連湯是中藥中治療急性腹瀉的經(jīng)典方劑，由葛根30g、黃連5g、黃芩20g、甘草5g組成，四藥配伍，重在清熱堅(jiān)陰止利，兼透表邪，共成清熱解肌之劑1。方中用藥較少、藥味間作用明確，是中醫(yī)的經(jīng)典方劑。該方劑見(jiàn)于傷寒論三十四條太陽(yáng)病上篇，原文為：“太陽(yáng)病，桂枝證，醫(yī)反下之，利遂不止。脈促者，表未解也；喘而汗出者，葛根黃連黃芩湯主之?！北疚闹饕U述了葛根芩連湯的化學(xué)成分、有效成分及臨床應(yīng)用現(xiàn)狀，介紹了采用現(xiàn)代色譜及其聯(lián)用技術(shù)對(duì)中藥復(fù)方有效成分進(jìn)行研究的方法，較為詳細(xì)得綜述了當(dāng)前對(duì)葛根芩連湯有效成分及其藥代動(dòng)力學(xué)的研究進(jìn)展，并對(duì)以后葛根芩連湯藥代動(dòng)力學(xué)的研究方向進(jìn)行了展望。一、葛根芩連湯概述(一)概述葛根芩

4、連湯是中藥中治療急性腹瀉的經(jīng)典方劑，本方之病味特點(diǎn)為主陽(yáng)明經(jīng)脈，張仲景治太陽(yáng)陽(yáng)明合病采用桂枝湯加麻黃及葛根，且葛根、黃芩、黃連皆為解肌功效，是用此以斷太陽(yáng)陽(yáng)入陽(yáng)明之路，非即為太陽(yáng)藥也；由此可以得出，葛根芩連湯是以葛根為君藥，主治病位應(yīng)在陰陽(yáng)靜脈。本方之病勢(shì)特點(diǎn)為病及太陰，臟腑表里同病，根據(jù)傷寒論原文來(lái)看，本方證病因?yàn)楣鹬C醫(yī)用下法所至，表未解非太陽(yáng)經(jīng)表邪未解，而為邪傳陽(yáng)明經(jīng)之表，脈促為表邪欲入于里，邪正交爭(zhēng)的結(jié)果，因而本方證的病勢(shì)他點(diǎn)為病及太陰，太陰陽(yáng)明經(jīng)臟腑表里同病。本方之病性特點(diǎn)為陽(yáng)明風(fēng)燥主表，太陰濕熱主里；其主癥可以表現(xiàn)為前額痛連后項(xiàng)，目痛而鼻干苔白或薄黃，舌正?；蚱t，脈浮。本方由于

5、其病勢(shì)表現(xiàn)由傷寒邪氣由陽(yáng)人陰，內(nèi)犯太陰，故其癥狀表現(xiàn)可以為熱利下迫，里急后重，或伴喘促汗出，而舌質(zhì)紅，苔可黃膩2。（二）化學(xué)成分葛根為豆科植物野葛（Pueraria lobata(Willd.)Ohwi）或甘葛藤（Pueraria themsonii Bench）的干燥根。其味甘涼可口，常作煲湯之用；入藥有解表退熱、生津止渴、止瀉的功效。葛根的主要成分為淀粉，其主要用藥用成分葛根素、大豆苷、大豆苷元等，葛根中含有大量的黃酮類(lèi)化合物，含量約為12%。另外，葛根中還有香豆素、有機(jī)酸、三萜類(lèi)、尿囊類(lèi)、胡蘿卜苷、谷甾醇、以及多種微量元素等成分。黃芩為唇形科植物黃芩（Scutellaria baical

6、ensis Georgi.）的干燥根，別名山茶根、土金茶根，屬于半野生半家種品種。黃芩味苦、性寒，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血的作用；對(duì)溫?zé)岵　⑸虾粑栏腥?、肺炎、痢疾、高血壓都有很好的療效；且黃芩的臨床應(yīng)用抗菌性要優(yōu)于黃連，且不會(huì)產(chǎn)生抗藥性。黃芩的主要成分包括黃芩苷元、黃芩苷、漢黃芩苷、換黃芩素、白羊黃素等三十多種黃酮類(lèi)化合物及苯乙醇糖苷類(lèi)化合物，有著極佳的抗菌作用；另外，黃芩還含有豆甾醇、揮發(fā)油以及14種氨基酸等成分3。黃連是毛茛科植物黃連（Coptis chinesis Franch）、三角葉黃連（Coptis deltoiden C. Y.Cheng et Hsiao）或云連（Copti

7、s teeta wall.）的干燥根莖，又名味連、川連、雞爪連。黃連味入口極苦，有清熱燥濕、瀉火解毒之功效。黃連的主要成分包括黃連堿、甲基黃連堿、小檗堿、表小檗堿、掌葉防己堿、非洲防己堿、藥根堿等多種生物堿化合物，另外，在黃連中還含有木蘭堿等酚性化合物。甘草為豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis fisch.）脹果甘草 （Glycyrrhiza inflate Bat.）或光果甘草（Glycyrrhiza glabra L.）的干燥根及根莖，又名國(guó)老、甜草、甜根子。甘草氣微，味甜而特殊；有清熱解毒，祛痰止咳、脘腹等功效。甘草的主要成分為甘草甜素，屬三萜皂苷，水解后可生成甘草

8、次酸和葡萄糖醛酸；另外，甘草中還含甘草甘、甘草素、異甘草苷、異甘草素等黃酮類(lèi)化合物。 （三）臨床應(yīng)用現(xiàn)狀 作為中藥中治療急性腹瀉的經(jīng)典方劑，葛根芩連湯在臨床中也得到了極為廣泛的應(yīng)用。本方劑在方劑學(xué)中被列入解表清里之劑，葛根芩連湯有解表清里之功效，主治，主治胸脘煩熱、身熱下利、喘而汗出、口中作渴等病癥。在現(xiàn)代運(yùn)用中主要用于急性腸炎、細(xì)菌性痢疾、胃腸型感冒等證屬陽(yáng)明里熱甚者。在臨床的實(shí)際應(yīng)用中，還可用于經(jīng)前期偏頭痛、高血壓頭痛、額竇炎等多種病例10。二、葛根芩連湯有效成分研究（一）有效成分研究現(xiàn)狀 近幾年，隨著各學(xué)科的綜合發(fā)展，中藥復(fù)方方面的研究越來(lái)越多，其中以經(jīng)典方劑葛根芩連湯的研究更具有代表性

9、。曹佩雪4等對(duì)葛根芩連湯在不同配伍情況下對(duì)葛根素、黃芩苷、小檗堿等有效成分的含量進(jìn)行研究比較，發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方湯劑在煎煮過(guò)程中各個(gè)組分之間會(huì)發(fā)生明顯的相互作用，這也會(huì)對(duì)葛根芩連湯陳芬的提取與研究產(chǎn)生影響；戴開(kāi)金5等采用高效毛細(xì)管電泳法（high performancecapillary electrophoresis, HPCE）建立了葛根芩連湯的指紋圖譜，并分離測(cè)定了其中的有效成分小檗堿、巴馬汀、藥根堿等含量；龔湛文等在前人的中藥復(fù)方有效成分含量測(cè)定的基礎(chǔ)上，建立了葛根芩連湯有效部位中黃芩苷以及葛根素的RP-HPLC 含量測(cè)定方法，方便了對(duì)其有效成分藥代動(dòng)力學(xué)的研究；李哲6等在葛根芩連湯有效成分

10、的鑒定中引入了時(shí)間-吸收波長(zhǎng)-紫外吸收度的三維高效液相譜圖，精確得測(cè)定多種有效成分的含量；而陳麗紅7等則對(duì)葛根芩連配方顆粒中三種主要成分葛根素、黃芩苷及小檗堿的含量采用新型反向高效液相色譜法-二極管陣列檢測(cè)器進(jìn)行了測(cè)定；吳艷萍8等采用HPLC法分別測(cè)定了葛根芩連湯中黃芩苷及小檗堿在犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方配伍能降低受體對(duì)黃芩苷的吸收總量并減緩黃芩苷在體內(nèi)的代謝速率，使其能被受體充分吸收并產(chǎn)生相應(yīng)的作用，對(duì)小檗堿的研究表明，葛根芩連煎劑在配伍后與單方比較，發(fā)現(xiàn)其有效成分小檗堿入血濃度及生物利用度都降低。譚曉梅9等通過(guò)測(cè)定葛根芩連煎劑和葛根單煎劑在兔血中的含量，分析研究了中藥復(fù)方配伍對(duì)

11、其藥代動(dòng)力學(xué)的影響，發(fā)現(xiàn)葛根芩連湯配伍能提高葛根素的濃度及利用度，可在很大程度上促進(jìn)對(duì)于葛根素的吸收作用。（二）研究方法對(duì)于葛根芩連湯有效成分的研究可采用RP-HPLC含量測(cè)定、高效毛細(xì)管電泳法、反相高效液相色譜法二極管陣列檢測(cè)器、三維高效液相譜圖檢測(cè)法、HPLC 法等多種方法11。下文主要介紹的是采用二維液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法分離鑒定葛根芩連湯中的有效成分。多維液相色譜分離技術(shù)（multidimensional liquid chromatography，MDLC）是利用兩根或多根性質(zhì)不同的色譜柱對(duì)復(fù)雜樣品中的待分析組分進(jìn)行分離。并將不同液相色譜模式如親和色譜(AC)、排阻色譜（SEC）、疏水作

12、用色譜（HIC）等通過(guò)組構(gòu)建多維液相色譜12。多維色譜分離系統(tǒng)比一維色譜可提供更多的波峰容量，因此適合用于分離復(fù)雜體系。葛根芩連湯組成成分復(fù)雜，將二維液相色譜與質(zhì)譜檢測(cè)相結(jié)合能夠?qū)?fù)雜的中藥組分進(jìn)行分離鑒定，為中藥復(fù)方的成分鑒定提供了一個(gè)很好的分析研究方法。三、葛根芩連湯有效成分的藥代動(dòng)力學(xué)研究 中草藥復(fù)方藥物動(dòng)力學(xué)，是指在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，利用藥物動(dòng)力學(xué)原理及數(shù)學(xué)處理方法，定量地描述中草藥的有效成分及其復(fù)方通過(guò)各種給藥途徑進(jìn)入機(jī)體后的吸收、分布、代謝和排泄等過(guò)程的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，并提出解釋這些數(shù)據(jù)所需的數(shù)學(xué)關(guān)系式的科學(xué)13。中藥復(fù)方藥代動(dòng)力學(xué)研究可以科學(xué)地闡述中藥復(fù)方原理及作用機(jī)制，用以促進(jìn)

13、中藥臨床的科學(xué)、合理用藥，還未設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)新藥提供了重要的理論基礎(chǔ)。中藥復(fù)方藥代動(dòng)力學(xué)研究方法主要包括生物效應(yīng)法和血液濃度測(cè)定法兩類(lèi)。目前常用的測(cè)定方法包括熒光分光光度法、原子吸收分光光度法、紫外分光光度法、薄層色譜法、氣象色譜法以及高效液相色譜法等。中藥復(fù)方的藥代動(dòng)力學(xué)研究較為復(fù)雜，當(dāng)前主要的研究方法是通過(guò)測(cè)定中藥復(fù)方中一種或多種已知成分的動(dòng)力學(xué)來(lái)反映該復(fù)方在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)14。下文介紹的實(shí)驗(yàn)研究是以SD雄性大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用HPLC在雙波長(zhǎng)下同時(shí)測(cè)定血漿中小檗堿和黃芩苷的含量并對(duì)其動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究，以綜合分析葛根芩連湯的藥代動(dòng)力學(xué)。（一）儀器與材料 主要實(shí)驗(yàn)儀器包括：LC-20AB 高效液相

14、色譜儀， 5417R 超速低溫離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司），TGL-16G 低速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），PB-10 型pH 計(jì)（德國(guó)Sartorious 股份公司），XW-80A 旋渦混合器（上海青浦滬西儀器廠），移液槍20L，200L，1000L（法國(guó)Gilson 公司）。實(shí)驗(yàn)主要試劑包括:葛根、黃芩、黃連、甘草,鹽酸小檗堿、黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品,甲醇（色譜純）,色譜用水,三乙胺、磷酸。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SD雄性大鼠16只，體重（240±15）g，由常州卡爾斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。（二）實(shí)驗(yàn)方法1、灌胃液制備根據(jù)傷寒論處方各味藥比例，稱(chēng)取葛根5 g、黃芩3 g、黃連3 g、甘草2 g

15、置于燒杯中，加水浸泡20分鐘。先煎葛根，加熱回流20分鐘后加入剩余藥物，加熱回流30分鐘后將藥液倒出并加入水二次回流30分鐘，合并兩次藥液；用紗布粗濾，濃縮濾液，制成1gml灌胃液。2、動(dòng)物處理將SD雄性大鼠隨機(jī)分為8組，每組2 只，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，自由飲水。葛根芩連灌胃液2 mL/只灌胃處理。在灌胃后分別在0.16，0.5，1，2，4，6，8，12，16，24小時(shí)取血，置有肝素鈉抗凝劑的離心管中，離心10分鐘（7000rpm），選取上層血漿。3、色譜條件色譜柱：Daiso C18（250 mm×4.6 mm I.D.，5 m，Unimicro Technologies. Inc

16、.USA），柱前加保護(hù)柱Agilent C18（8.0 mm×4.0 mm）；流動(dòng)相：甲醇0.5三乙胺（磷酸調(diào) pH 3.0）（5545）；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm（黃芩苷最大檢測(cè)波長(zhǎng)），346 nm（鹽酸小檗堿最大檢測(cè)波長(zhǎng)）；進(jìn)樣量：20 L。 4、血漿預(yù)處理及測(cè)定在測(cè)定生物樣品時(shí)，樣品的預(yù)處理對(duì)于檢測(cè)尤為重要。在測(cè)定前，對(duì)血漿樣品采取除蛋白法、提取法、化學(xué)衍生化以及綴合物水解法等方法的預(yù)處理，以保護(hù)實(shí)驗(yàn)儀器，提高測(cè)定的靈敏度15。本實(shí)驗(yàn)主要采用了提取法及除蛋白法進(jìn)行血漿預(yù)處理。對(duì)血漿進(jìn)行預(yù)處理后，取20L注入高效液相色譜儀，采用

17、相同方法處理空白血漿樣品及血漿對(duì)照品。（三）討論本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)葛根芩連的主要活性成分小檗堿和黃芩苷的藥代動(dòng)力學(xué)分析來(lái)反映該復(fù)方湯藥在體內(nèi)的代謝規(guī)律，以對(duì)葛根芩連湯的藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究。采用高效液相色譜法，甲醇0.5三乙胺（磷酸調(diào) pH 3.0，5545）做流動(dòng)相，利用島津紫外雙波長(zhǎng)檢測(cè)器，在黃芩苷和小檗堿的紫外最大吸收波長(zhǎng)（280 nm，346 nm）處同時(shí)測(cè)定其在大鼠血漿中的濃度。通過(guò)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)SD雄性大鼠在灌胃葛根芩連湯后，體內(nèi)小檗堿的達(dá)峰時(shí)間為3 小時(shí)，黃芩苷的達(dá)峰時(shí)間為4 小時(shí)，且對(duì)于黃芩苷吸收呈現(xiàn)不規(guī)則峰值，并出現(xiàn)多峰現(xiàn)象，有待于對(duì)葛根芩連湯藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)一步的深入研究。四、總結(jié)與

18、展望 葛根芩連湯是葛根芩連湯是中藥中治療急性腹瀉的經(jīng)典方劑，在當(dāng)今的臨床治療也得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。該方有堅(jiān)陰止利、兼透表邪、清熱解陰的功效，除了治療急性腸炎、細(xì)菌性痢疾、腸傷寒、胃腸型感冒等證屬陽(yáng)明里熱病癥，還可用于經(jīng)前期偏頭痛、高血壓頭痛、額竇炎的治療。 近幾年，隨著對(duì)葛根芩連湯的研究報(bào)告不斷增加，其研究范圍不斷擴(kuò)大，研究技術(shù)也不斷提高，對(duì)于葛根芩連湯的有效成分及其藥代動(dòng)力學(xué)的研究也不斷增加，研究者也采用了RP-HPLC含量測(cè)定、高效毛細(xì)管電泳法、反相高效液相色譜法二極管陣列檢測(cè)器、三維高效液相譜圖檢測(cè)法、二維液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等多種新的研究方法，取得了很大的突破。但是相對(duì)而言，由于葛根

19、芩連湯中有效成分復(fù)雜，對(duì)其藥代動(dòng)力學(xué)的研究仍顯滯后，今后需在此方面加大研究力度，以對(duì)葛根芩連湯的藥代動(dòng)力學(xué)有一個(gè)完整準(zhǔn)確的認(rèn)識(shí)，也為闡明中醫(yī)藥理論提供完整的理論基礎(chǔ)。五、參考文獻(xiàn) 1徐勁松,徐文沖,霍志毅.加味葛根芩連湯治療濕熱型急性腹瀉療效觀察J.黑龍江中醫(yī)藥,2009,2:14-15.2曾藝鵬，李劍鋒.葛根芩連湯臨床應(yīng)用再認(rèn)識(shí)J.中醫(yī)研究,2005,l8(4): 60-62.3錢(qián)金粉,張霄翔,姚日生,等.葛根芩連滴丸制備工藝研究J.安徽醫(yī)藥,2005, 19(7):494- 495.4曹佩雪,梁光義,李 霞,等.葛根芩連湯不同配伍情況下葛根素、黃芩苷、小檗堿的含量比較J.中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào),2003,18(3):459-462.5戴開(kāi)金,羅奇志,羅佳波,等.葛根芩連湯的HPCE 指紋圖譜研究J.中草藥, 2004,35(7):749-7511.6李哲,李輝,陳發(fā)奎,等.葛根芩連制劑的三維高效液相譜鑒定J.中成藥, 2003,25(1):27-29.7陳麗紅,王 強(qiáng).葛根芩連配方顆粒主要標(biāo)志性成分含量分析