動物細(xì)胞融合和單克隆抗體(mmr)

1、1 1、定義：、定義：指用指用自然自然或或人工人工方方法使兩個或多個不同的細(xì)胞法使兩個或多個不同的細(xì)胞融合成一個細(xì)胞的過程。融合成一個細(xì)胞的過程。一、動物細(xì)胞融合一、動物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交）（也稱細(xì)胞雜交）3.原理：原理：兩個細(xì)胞正在融合兩個細(xì)胞正在融合受精作用受精作用細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性2.2.結(jié)果：結(jié)果： 形成形成具有原來兩個具有原來兩個或或多個細(xì)胞遺傳信息多個細(xì)胞遺傳信息單核的單核的雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞4.4.誘導(dǎo)方式：誘導(dǎo)方式：物理法：物理法：離心、振動、電激離心、振動、電激化學(xué)法：化學(xué)法：聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)PEG)生物法：生物法：滅活的滅活的病毒病毒5.5.意義：意

2、義：突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、突破了有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）屬間、科間、動植物之間）成為可能成為可能。6. 6. 應(yīng)用：應(yīng)用：成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段生物新品種培育等的重要手段主要用途：主要用途：制備單克隆抗體制備單克隆抗體植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交和和動物細(xì)胞融合的比較動物細(xì)胞融合的比較例1下列關(guān)于動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，敘述正確的是()A誘導(dǎo)融合的方法完全相同B所用的技術(shù)手段完全相同C所采用的原理完全相同D都能形成雜種細(xì)胞D1.1.什么是抗體？什么是

3、抗體？2.2.抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的，如何產(chǎn)生？抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的，如何產(chǎn)生？抗體是指能與抗原發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的蛋白質(zhì)?？贵w是指能與抗原發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的蛋白質(zhì)。漿細(xì)胞（效應(yīng)漿細(xì)胞（效應(yīng)B B細(xì)胞）細(xì)胞） 要受到抗原刺激要受到抗原刺激3.3.傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么？如何解決？傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么？如何解決？每種免疫的每種免疫的B B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。特異性強(qiáng)的抗體。從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點(diǎn)：該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低產(chǎn)量低、純度低，且抗、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、

4、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動動物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 怎樣獲得產(chǎn)量高、單一類型的抗體？怎樣獲得產(chǎn)量高、單一類型的抗體？一個一個B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆單克隆 抗體抗體 要獲得要獲得既能產(chǎn)生特異性抗既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖的細(xì)胞體，又能大量繁殖的細(xì)胞單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備米爾斯坦和科勒的設(shè)想與行動米爾斯坦和科勒的設(shè)想與行動 （見書（見書P54)P54) 由由單個單個B

5、 B淋巴細(xì)胞經(jīng)過淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖無性繁殖（克（克?。┞。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的的抗體稱為單克隆抗體?？贵w稱為單克隆抗體。 單克隆抗體單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備特異性強(qiáng)、靈敏度高，可大量制備 特點(diǎn)：特點(diǎn)：米爾斯坦和科勒因此在米爾斯坦和科勒因此在19841984年獲諾貝爾獎。年獲諾貝爾獎。 單克隆抗體制備過程：單克隆抗體制備過程：篩選篩選雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞培養(yǎng)、培養(yǎng)、 專一抗體檢測、篩選專一抗體檢測、篩選足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群抗體的細(xì)胞群

6、選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞注射抗原注射抗原骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞單克隆抗體制備小結(jié)單克隆抗體制備小結(jié)1 1、兩種細(xì)胞的獲得：、兩種細(xì)胞的獲得： 骨髓瘤細(xì)胞：骨髓瘤細(xì)胞： B B淋巴細(xì)胞：淋巴細(xì)胞：2 2、雜交細(xì)胞具有的特點(diǎn)：、雜交細(xì)胞具有的特點(diǎn)： 3 3、單克隆制備過程有兩次篩選目的：、單克隆制備過程有兩次篩選目的： 4 4、單克隆抗體優(yōu)點(diǎn)：、單克隆抗體優(yōu)點(diǎn)：從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)獲得從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)獲得注射特定的抗原蛋白所獲得的相應(yīng)注射特定的抗原蛋白所獲得的相應(yīng)B B淋淋巴細(xì)胞，是已免疫的巴細(xì)胞，是已免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞無限增殖，產(chǎn)生特異性抗體無限

7、增殖，產(chǎn)生特異性抗體第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞第二次篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞第二次篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用主要有：主要有：1、臨床診斷、臨床診斷2、治療疾病和運(yùn)載藥物、治療疾病和運(yùn)載藥物單克隆抗體純度高、特異性強(qiáng)，所以能準(zhǔn)確識別各單克隆抗體純度高、特異性強(qiáng)，所以能準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定的抗原發(fā)生特異性結(jié)種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定的抗原發(fā)生特異性結(jié)合。因此，單克隆抗體在怎短的應(yīng)用上，具有合。因此，單克隆抗體在怎短的應(yīng)用上，具有準(zhǔn)確、高準(zhǔn)確、高效、簡易和快

8、速效、簡易和快速的優(yōu)點(diǎn)。的優(yōu)點(diǎn)。主要用于癌癥治療主要用于癌癥治療作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成作為載體，運(yùn)載抗癌藥物，形成“生物生物導(dǎo)導(dǎo)彈彈”治療腫瘤治療腫瘤單克隆抗體+抗癌藥物 例例2、下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)、下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案破傷風(fēng)桿菌的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常過程，常用用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能_,又能又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段。培養(yǎng)兩個階段。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細(xì)胞細(xì)胞抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒分泌抗體分泌抗體在體外培養(yǎng)條件下無限增殖在體外培養(yǎng)條件下無限增殖原代原代傳代傳代B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠