染色體畸變分析

1、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院衛(wèi)生毒理學(xué)教研室衛(wèi)生毒理學(xué)教研室任銳任銳毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課 當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目當(dāng)某種化學(xué)物質(zhì)作用于染色體并使其固有的數(shù)目和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。具有這種能和形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時，稱為染色體畸變。具有這種能力的化學(xué)物質(zhì)可能對生物體產(chǎn)生潛在性的遠期危害。因力的化學(xué)物質(zhì)可能對生物體產(chǎn)生潛在性的遠期危害。因此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染色體畸變分析實驗可以檢測化此，應(yīng)用小鼠骨髓細胞染

2、色體畸變分析實驗可以檢測化學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變學(xué)物質(zhì)能否引起哺乳動物體細胞染色體畸變，以及畸變的性質(zhì)和強弱。的性質(zhì)和強弱。二、原理二、原理毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課動物選擇動物選擇 選用選用18g18g24g24g雄性健康小鼠，每組雄性健康小鼠，每組6 61010只。只。染毒與取樣時間染毒與取樣時間 一般染毒一次或多次，多次更為合理。末一般染毒一次或多次，多次更為合理。末次染毒后次染毒后24h24h處死動物，收獲細胞。處死動物，收獲細胞。劑量劑量 最高劑量最大耐受劑量或，最高劑量最大耐受劑量或，1/31/31/8LD501/8L

3、D50； 最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的最低劑量應(yīng)為最大給藥量或人使用量的5050100100倍；倍； 陰性對照組給予陰性對照組給予40mg/kg40mg/kg環(huán)磷酰胺（腹腔注射）；環(huán)磷酰胺（腹腔注射）； 陰性對照給予溶劑。陰性對照給予溶劑。4. 4. 給藥途徑給藥途徑 原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。原則上采用與人接觸受試物相同的途徑。四、實驗設(shè)計四、實驗設(shè)計毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課注射秋水仙素注射秋水仙素骨髓細胞制備：骨髓細胞制備：取股骨，取股骨，PBS5ml沖洗骨髓細胞，沖洗骨髓細胞，1500r/min，離心，離心10min，棄去上清。，棄

4、去上清。 低滲：低滲：0.4%氯化鉀水溶液氯化鉀水溶液5ml，37低滲低滲30min，1000r/min，離心，離心10min，棄去上清。棄去上清。固定：固定：加入加入3：1甲醇和冰醋酸溶液甲醇和冰醋酸溶液5ml,再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止再用乳頭吸管反復(fù)吹打，靜止15min后，以后，以1000r/min離心離心10min，棄上清。，棄上清。制片制片：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方：用乳頭吸管吸取混勻的細胞懸液，從玻片上方3cm5cm處滴片，每處滴片，每張片子滴張片子滴23滴細胞懸液，使細胞自然分散。滴細胞懸液，使細胞自然分散。干燥：干燥：將制好的片子置空氣中自然干燥，并做好標(biāo)記將制

5、好的片子置空氣中自然干燥，并做好標(biāo)記染色：染色：Giemsa染色染色15min水沖水沖干燥，閱片干燥，閱片毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課%100%100%分析的染色體總數(shù)畸變?nèi)旧w總數(shù)）染色體畸變率（分析染色體的細胞總數(shù)有染色體畸變的細胞數(shù)）細胞畸變率（毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課八、組織分工八、組織分工毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課八、總八、總 結(jié)結(jié)毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課毒理學(xué)基礎(chǔ)實驗課p 陽性結(jié)果的判定：陽性結(jié)果的判定：每只小鼠分析每只小鼠分析100100個個骨髓細胞。骨髓細胞。實驗組畸變率與陰性對照組比較，并進行統(tǒng)計分析，如果實實驗組畸變率與陰性對照組比較，并進行統(tǒng)計分析，如果實驗組的畸變率驗組的畸變率顯著顯著高于陰性對照組，并有高于陰性對照組，并