T細胞斑點試驗

1、T-SPOT.TB楊中平結核感染結核感染T細胞斑點檢測細胞斑點檢測vT細胞斑點試驗（T-SPOT），又叫作結核感染干擾素釋放試驗（Interferon Gamma Release Assays，IGRAs 結核的現狀結核的現狀 結核病是全球嚴重的公共衛(wèi)生問題之一。據結核病是全球嚴重的公共衛(wèi)生問題之一。據WHO統(tǒng)計，全球約有統(tǒng)計，全球約有20億人感染結核分枝桿菌，每年有約億人感染結核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結核。萬人死于結核。 我國是世界上我國是世界上22個結核病高負擔國家之一，結核個結核病高負擔國家之一，結核感染導致的死亡人數是其他傳染性疾病總死亡人數的感染導致的死亡人數是其他傳染性疾

2、病總死亡人數的2倍以上。倍以上。基于基于T淋巴細胞檢測淋巴細胞檢測結核感染的原理結核感染的原理vT-SPOT.TB在診斷結核感染方面具有良好的敏在診斷結核感染方面具有良好的敏感性和特異性，在現有結核診斷方法存在缺陷感性和特異性，在現有結核診斷方法存在缺陷的今天，的今天， T-SPOT.TB 可以給臨床診斷提供參可以給臨床診斷提供參考?？?。v基于結核抗原特異性基于結核抗原特異性T細胞向病變部位集中的細胞向病變部位集中的特點，特點， T-SPOT.TB的檢測物已不局限于靜脈血，的檢測物已不局限于靜脈血，支氣管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、腦脊液等支氣管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、腦脊液等也可用于對肺內及

3、肺外結核的診斷。也可用于對肺內及肺外結核的診斷。T-SPOT的意義v1:菌陰，結核病患者的輔助診斷v2：肺外結合的鑒別診斷v3：免疫力低下/受抑制患者的結核診斷/感染篩查v4：兒童結核病的輔助診斷T-SPOT注意事項v1:肝素抗凝全血，常溫保存,不得冷凍或冷藏。v2:采血量：三歲以下2ML，3-9歲4ML，9歲以上6ML，免疫力低下或白細胞低下采6ML（本公司一律兩管）v3:樣本必須4小時內送達。v4：輸血受試者或PET-CT受試者，兩周后檢測。v5：受試者需閱讀知情同意書并填寫申請單。基于基于T淋巴細胞檢測淋巴細胞檢測結核感染的原理結核感染的原理結核的傳統(tǒng)診斷手段結核的傳統(tǒng)診斷手段結核菌素皮

4、試：結核菌素皮試：低敏感性：低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。低特異性：低特異性：與卡介苗接種和其他環(huán)境分枝桿菌有交叉，易造成“假陽性”結果。細菌學檢查：細菌學檢查：常規(guī)培養(yǎng)：2月；快速培養(yǎng)：1周； 陽性率取決于采集標本中細菌數量，不利于早期診斷。病理學檢查：病理學檢查：陽性率低，對取材標本有較高要求，有創(chuàng)傷，對肉芽腫性病變需進一步鑒別。基于基于T淋巴細胞檢測淋巴細胞檢測結核感染的原理結核感染的原理v結核感染的免疫應答反應以結核感染的免疫應答反應以細胞免疫細胞免疫為主，結為主，結核感染后體內長期存在核感染后體內長期存在抗原特異性的記憶性抗原特異性的記憶性T細胞細胞v當再次遇到抗原刺激

5、時，能迅速活化增殖，釋當再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放放r r干擾素干擾素vr r干擾素干擾素是結核分枝桿菌感染后機體免疫應答是結核分枝桿菌感染后機體免疫應答中最重要的細胞因子中最重要的細胞因子基于基于T淋巴細胞檢淋巴細胞檢測結核感染的原理測結核感染的原理T-SPOT.TB技術：技術：v利用結核桿菌感染者利用結核桿菌感染者外周血單個核細胞（外周血單個核細胞（PBMC）中中存在存在結核特異性結核特異性T T細胞細胞，這些淋巴細胞在受到，這些淋巴細胞在受到結核特異結核特異 抗原刺激抗原刺激后后分泌分泌r r干擾素干擾素而設計的而設計的T T細胞免疫斑點試驗。細胞免疫斑點試驗。v檢測外周血

6、中受檢測外周血中受結核特異抗原刺激結核特異抗原刺激釋放釋放r r干擾素干擾素的的T T淋淋巴細胞巴細胞，經酶聯免疫顯色后，通過，經酶聯免疫顯色后，通過ELISPOTELISPOT分析系統(tǒng)分析系統(tǒng) 對斑點進行計數，對斑點進行計數，1 1個斑點代表一個細胞，計算出抗原個斑點代表一個細胞，計算出抗原特異性細胞的頻率。特異性細胞的頻率?；诨赥淋巴細胞檢測淋巴細胞檢測結核感染的原理結核感染的原理v空白對照孔內斑點數小于空白對照孔內斑點數小于10且陽性對照孔內斑且陽性對照孔內斑點數大于點數大于20時視為試驗有效時視為試驗有效vT-SPOT.TB試驗結果用每試驗結果用每106 PBMCs中斑點形中斑點形成細胞（成細胞（SFCs）的數目來描述，即）的數目來描述，即SFCs/106 PBMCs基于基于T淋巴細胞檢淋巴細胞檢測結核感染的原理測結核感染的原理包包基于基于T淋巴細胞檢淋巴細胞檢測結核感染的原理測結核感染的原理T-SPOT.TB的臨床意義的臨床意義vT-SPO