HLA配型與無關(guān)供體HSCT

1、HLA配型與無關(guān)供體配型與無關(guān)供體HSCT南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院江 蘇 省 人 民 醫(yī) 院汪承亞 2010年2月前前 言言 1957 年首例人類雙生子之間骨髓移植成功,為治療白血病等惡性血液病開創(chuàng)了新療法。繼使用HLA 匹配的無關(guān)供者造血干細(xì)胞移植成功后,1988年美國率先建立起無關(guān)供者骨髓庫(美國國家骨髓供者計劃,簡稱NMDP),爾后又建立了公共臍帶血庫。根據(jù)世界骨髓供者協(xié)會(WMDA)資料目前已有60個國家或地區(qū)的骨髓庫、37個臍血庫參加WMDA;登記在案的骨髓供者數(shù)超過900萬人;庫存臍帶血達(dá)18萬份;全球每年無關(guān)供者骨髓移植病例超過5000例。與此同時,HLA分型技術(shù)也從簡單的血清學(xué)

2、方法,轉(zhuǎn)變?yōu)楦_的基因分型。 目前中國造血干細(xì)胞捐獻(xiàn)者資料庫管理中心(簡稱中華骨髓庫)的供者數(shù)已超過100萬人,使用無關(guān)供者的造血干細(xì)胞移植也已普遍開展,1997-2007:Worldwide unrelated donorhematopoietic cell transplantation Bone marrow Peripheral blood stem cells Cord blood (approximate)NMDP facilitated transplants (fiscal year 19872008)Cord blood Peripheral blood stem cell

3、sBone marrowNMDP Transplant Recipients by Diagnosis Selected Malignancies NMDP移植治療惡性腫瘤統(tǒng)計 NMDP Transplant Recipients by Age NMDP移植年齡統(tǒng)計 Acute Myeloid Leukemia in Adults成人急性髓性白血病Myelodysplastic Syndrome in Adults Acute Leukemia, CR1 in ChildrenAcute Leukemia, CR2 in Children Severe Aplastic Anemia in A

4、dultsSevere Aplastic Anemia in Children 前前 言言 （續(xù)） 盡管有關(guān)HLA 配合程度對造血干細(xì)胞移植結(jié)果影響的報告數(shù)以百計，但是由于在樣本數(shù)、疾病類型和病情、HLA 分型水平等方面的異質(zhì)性，所得到的結(jié)論不盡相同，此外HLA 基因分型結(jié)果及其生物學(xué)意義的解釋也顯得日趨復(fù)雜。這些情況對于非HLA 專業(yè)人員, 在選擇HLA 最佳配合無關(guān)供者方面產(chǎn)生了一定困擾。為解決此問題，WMDA、美國NMDP以及歐洲免疫遺傳學(xué)聯(lián)盟( EFI)等組織相繼推出與HLA 配型有關(guān)的工作指南。HLA 抗原和基因抗原和基因HLA 抗原：抗原： HLA 抗原是細(xì)胞表面上的一種蛋白質(zhì),它

5、能刺激宿主免疫系統(tǒng)可產(chǎn)生相應(yīng)抗體。因此,最初HLA 抗原是使用血清學(xué)方法檢測出來的(表1)。 使用血清學(xué)鑒定的同一個HLA 抗原,可以是許多等位基因的產(chǎn)物,因此已鑒定出的等位基因數(shù),遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于HLA 抗原數(shù),同時由于HLA 抗體來源以及抗體特異性的限制,并非所有等位基因?qū)?yīng)的HLA 抗原都可以用血清學(xué)方法鑒定。 換言之,在DNA水平上的HLA多態(tài)性,只有其中一部分可以用血清學(xué)方法來識別。 HLA 抗原和基因 （續(xù)）（續(xù)）HLA 抗原交叉反應(yīng)性：HLA 抗原之間存在交叉反應(yīng)性,比如,某個體只受到一個HLA-B7 抗原的免疫刺激,結(jié)果產(chǎn)生抗-B7 和抗-B27 等多種特異性抗體。根據(jù)交叉反應(yīng)性的特點

6、, HLA 抗原可以分成許多交叉反應(yīng)組(表2)。同一個交叉反應(yīng)組中的抗原,共有一些免疫學(xué)決定簇,或稱為抗原表位。表表2 HLA-A , B , DR 抗原交叉反應(yīng)組 A 座位 B 座位 DR 座位A1, 11, 36 B7,42,54(22),55(22),56(22) DR1 , 15(2) , 16(2)A2, 203, 210, 28 B38(16),39(16),8 DR3 , 11(5) , 12(5) , 13(6) , 14(6)A3, 11, 1 B45(12), 50(21),41 DR4 , 7 , 9A23(9), 24(9), 2403 52(5),53 DR11(5)

7、, 12(5) , 8A25(10), 32 B44(12),49(21) DR13(6), 14(6), 17(3), 18(3)A26(10), 33, 34, 43, 66 B49(21),44(12),A30, 31 B51(5),52(5), 53A36, 1, 80 B57(17),62(15), 63(15)A68(28), 2, 69(28) B58(17), 22A74, 32 B60(40), 61(40), 48 B62(15),35,70, 75(15) , 76(15) B63(15) , 53 , 57(17) , 58(17) B64(14), 65(14) ,

8、8 B71(70), 35, 62(15), 72(70)* 每一行代表一個交叉反應(yīng)組, 括號中數(shù)字代表對應(yīng)的寬特異性HLA 抗原和基因 （續(xù)）（續(xù)） HLA HLA 基因：基因： HLA 基因位于細(xì)胞核內(nèi),存在于DNA分子中,它編碼細(xì)胞表 面的HLA蛋白分子。在移植免疫反應(yīng)中, HLA基因本身不直 接參與，而是其編碼的HLA抗原在發(fā)揮作用。 HLA基因分型 的基本原理是檢測DNA序列的差異。雖然HLA -類和類 基因都含有多個外顯子，但實際臨床HLA-A, B, C 基因分 型只檢測相應(yīng)基因外顯子2和外顯子3 的DNA序列，DR基 因分型只檢測相應(yīng)外顯子2 。 外顯子外顯子, 核甘核甘, 密

9、碼子密碼子(HLA一類一類)外顯子外顯子核甘位置核甘位置核甘數(shù)量核甘數(shù)量密碼子位置密碼子位置氨基酸數(shù)氨基酸數(shù)外顯子-11-7373-24 to -124外顯子外顯子-274-3432701-9090外顯子外顯子-3344-61927691-18292外顯子-4620-895276183-27492外顯子-5896-1012117275-31339外顯子-61013-104533314-32411外顯子-71046-109348325-34016外顯子-81094-11006341-3422s HLA常見等位基因大都在常見等位基因大都在2，3外顯子的堿基序列差異外顯子的堿基序列差異s 罕見等位基

10、因大都在罕見等位基因大都在2，3外顯子以外區(qū)域的堿基變異外顯子以外區(qū)域的堿基變異 外顯子外顯子, 核甘核甘, 密碼子密碼子(二類二類)外顯子外顯子核甘位置核甘位置核甘數(shù)量核甘數(shù)量密碼子位置密碼子位置氨基酸數(shù)氨基酸數(shù)外顯子-11-100100-21 to 433外顯子外顯子-2101-3702705-9490外顯子-3371-65228295-18894外顯子-4653-763111189-22537外顯子-5764-78724226-2338外顯子-6788-80114234-2385s HLA-DR位點常見等位基因大都在第位點常見等位基因大都在第2外顯子的堿基序列變異外顯子的堿基序列變異s

11、罕見等位基因大都在第罕見等位基因大都在第2外顯子以外區(qū)域的堿基變異外顯子以外區(qū)域的堿基變異 外顯子與核甘序列外顯子與核甘序列(Exon/Nucleotide)102030405060708090100A*01010101ATGGCCGTCATGGCGCCCCGAACCCTCCTCCTGCTACTCTCGGGGGCCCTGGCCCTGACCCAGACCTGGGCGG|GCTCCCACTCCATGAGGTATTTCTTCAA*02010101-G-T-|-T-110120130140150160170180190200A*01010101CATCCGTGTCCCGGCCCGGCCGCGGGGAGC

12、CCCGCTTCATCGCCGTGGGCTACGTGGACGACACGCAGTTCGTGCGGTTCGACAGCGACGCCGCGAGCCAA*02010101-A-210220230240250260270280290300A*01010101GAAGATGGAGCCGCGGGCGCCGTGGATAGAGCAGGAGGGGCCGGAGTATTGGGACCAGGAGACACGGAATATGAAGGCCCACTCACAGACTGACCGAGCGA*02010101-G-T-GG-AG-C-T-310320330340350360370380390400A*01010101AACCTGGGGACC

13、CTGCGCGGCTACTACAACCAGAGCGAGGACG|GTTCTCACACCATCCAGATAATGTATGGCTGCGACGTGGGGCCGGACGGGCGCTTCCA*02010101G-C-|-G-GG-T-T-410420430440450460470480490500A*01010101TCCGCGGGTACCGGCAGGACGCCTACGACGGCAAGGATTACATCGCCCTGAACGAGGACCTGCGCTCTTGGACCGCGGCGGACATGGCAGCTCAGATCACA*02010101-AC-T-A-C-51052053054055056057058059

14、0600A*01010101CAAGCGCAAGTGGGAGGCGGTCCATGCGGCGGAGCAGCGGAGAGTCTACCTGGAGGGCCGGTGCGTGGACGGGCTCCGCAGATACCTGGAGAACGGGAAGA*02010101-A-C-T-TT-C-AC-GT-610620630640650660670680690700A*01010101GAGACGCTGCAGCGCACGG|ACCCCCCCAAGACACATATGACCCACCACCCCATCTCTGACCATGAGGCCACCCTGAGGTGCTGGGCCCTGGGCTTCTACCA*02010101-|-G-A-

15、G-T-G-TG-A-A-s 每個外顯子包含一定數(shù)量的核甘酸每個外顯子包含一定數(shù)量的核甘酸s 不同的核甘酸序列決定不同的等位基因不同的核甘酸序列決定不同的等位基因外顯子外顯子2的起始位置的起始位置外顯子外顯子3的起始位置的起始位置外顯子外顯子4的起始位置的起始位置外顯子與密碼子外顯子與密碼子(Exon/Codon)-20-15-10-51A*01010101ATGGCCGTCATGGCGCCCCGAACCCTCCTCCTGCTACTCTCGGGGGCCCTGGCCCTGACCCAGACCTGGGCGG|GCA*02010101-G-T-|-510152025A*01010101TCCCACTC

16、CATGAGGTATTTCTTCACATCCGTGTCCCGGCCCGGCCGCGGGGAGCCCCGCTTCATCGCCGTGGGCA*02010101-T-A-3035404550A*01010101TACGTGGACGACACGCAGTTCGTGCGGTTCGACAGCGACGCCGCGAGCCAGAAGATGGAGCCGCGGGCGCCGTGGA*02010101-G-5560657075A*01010101ATAGAGCAGGAGGGGCCGGAGTATTGGGACCAGGAGACACGGAATATGAAGGCCCACTCACAGACTGACCGAGCGA*02010101-T-GG

17、-AG-C-T-80859095100A*01010101AACCTGGGGACCCTGCGCGGCTACTACAACCAGAGCGAGGACG|GTTCTCACACCATCCAGATAATGTATGGCTGCA*02010101G-C-|-G-GG-105110115120125A*01010101GACGTGGGGCCGGACGGGCGCTTCCTCCGCGGGTACCGGCAGGACGCCTACGACGGCAAGGATTACATCGCCCTGA*02010101-T-T-AC-T-130135140145150A*01010101AACGAGGACCTGCGCTCTTGGACCGCGGC

18、GGACATGGCAGCTCAGATCACCAAGCGCAAGTGGGAGGCGGTCCATA*02010101-A-C-A-C-155160165170175A*01010101GCGGCGGAGCAGCGGAGAGTCTACCTGGAGGGCCGGTGCGTGGACGGGCTCCGCAGATACCTGGAGAACGGGAAGA*02010101-T-TT-C-AC-GT-180185190195200A*01010101GAGACGCTGCAGCGCACGG|ACCCCCCCAAGACACATATGACCCACCACCCCATCTCTGACCATGAGGCCACCCTGA*02010101

19、-|-G-A-G-T-G-TG-A-s 每個密碼子對應(yīng)由三個核甘組成的一個氨基酸每個密碼子對應(yīng)由三個核甘組成的一個氨基酸s 第第2外顯子的第一個氨基酸外顯子的第一個氨基酸, 其位置為密碼子其位置為密碼子1外顯子外顯子2的起始位置的起始位置HLA等位基因發(fā)現(xiàn)數(shù)量進(jìn)展等位基因發(fā)現(xiàn)數(shù)量進(jìn)展(2008年年6月月)HLA一類等位基因一類等位基因HLA二類等位基因二類等位基因IMGT/HLA 數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計庫統(tǒng)計版本版本: 2.24 (2009年1月發(fā)表) HLA等位基因總數(shù)為等位基因總數(shù)為3,371個個 其中一類為2,351 A位點: 733 B位點: 1,115 C位點: 392 二類1,020個 DRB

20、1位點: 608其它與其它與HLA相關(guān)等位基因相關(guān)等位基因106個個 (MICA:65個個; MICB: 30個個)HLA Class IGeneABCEFGAlleles767/8531178/1249439/46392143/44Proteins600/652999/1046346/3613414Nulls49/5139/399/10002HLA Class IIHLA Class IIGeneDRADRBDQA1DQB1DPA1DPB1DMADMBDOADOBAlleles3707/7483496/9927133/13547129Proteins2623/5952570/7216116/

21、1184734Nulls0811030010HLA Class II - DRB AllelesHLA Class II - DRB AllelesGeneDRB1DRB2DRB3DRB4DRB5DRB6DRB7DRB8DRB9Alleles618/65915013183211Proteins506/5330407150000Nulls300320000Version Report -2.252(May) VS. 2.26 (July) 2009HLA 抗原和基因（續(xù)）（續(xù)） HLA等位基因的命名：等位基因的命名： HLA 等位基因由世界衛(wèi)生組織(WHO) HLA 命名委員會統(tǒng)一命名,采用數(shù)字

22、命名方法。一個完整的HLA 等位基因最多需要用9 個數(shù)字表示。HLA 座位用大寫字母右上角加星號表示。星號后第1 、2 位數(shù)字代表相應(yīng)血清學(xué)特異性;第3 、4 位代表等位基因,即編碼的氨基酸序列有所改變;第5 、6 位表示外顯子中的非編碼取代,該核苷酸堿基取代不改變所編碼的氨基酸,因此,對應(yīng)的HLA 抗原的分子結(jié)構(gòu)未改變;第7 、8 位代表內(nèi)含子區(qū)域中的堿基取代。第9 位后綴字母S 代表該等位基因的產(chǎn)物是可溶性HLA 分子,不存在于細(xì)胞表面;L 代表編碼低表達(dá)抗原;N代表無效基因,該基因不產(chǎn)生相應(yīng)的HLA 抗原分子。HLA 抗原和基因抗原和基因 （續(xù)）（續(xù)）HLA 等位基因數(shù)字命名原則示例等位

23、基因數(shù)字命名原則示例HLA檢測分辨率檢測分辨率: (Level of resolution): 低分辨率低分辨率 (Low level): A*02 中分辨率中分辨率 (Medium level): A*0201/0205/0209/0240/0266N 高分辨率高分辨率 (High level): A*020101/0209 等位基因水平等位基因水平 (Allele level): A*02010101模棱兩可模棱兩可 (Ambiguity): Using medium level resolution typing it is possible to exclude some but no

24、t all alleles from a group, hence the NMDP codes. B*1501 or B*1502 = B*15AB B*1501/1502/1505/1515/1521/1545/1556/1570 = B*15FGRHLA 命名委員會命名委員會Steven Marsh, PhD. March 13, 2009 Allele Group Alleles F Allele Group Alleles F（% %） Allele Group Alleles FAllele Group Alleles F（% %） A*01 A*0101 1.7422 A A*

25、*2424（16.7916.79） A A* *2402 17.24562402 17.2456 A*0102 0.1742 A*2407 0.5226 A*0103 0.1742 A A* *2626 （2.812.81） A A* *2601 2.17762601 2.1776 A A* *0202（29.5529.55） A A* *0201 12.76490201 12.7649 A*29 A*2901 1.2195 A*0202 0.1742 A*2902 0.1742 A A* *0203 2.78750203 2.7875 A A* *3030 （9.139.13） A A* *

26、3001 9.97963001 9.9796 A*0205 0.3484 A A* *3131 （3.743.74） A A* *3101 3.59273101 3.5927 A A* *0206 4.29670206 4.2967 A*32 A*3201 1.6428 A A* *0207 6.05140207 6.0514 A A* *3333（10.0210.02） A A* *3303 10.36213303 10.3621 A*03（2.432.43） A A* *0301 2.96170301 2.9617 A*66 A*6601 0.1742 A A* *1111（18.5618

27、.56） A A* *1101 17.65511101 17.6551 A*68 A*6801 0.5226 A*1102 0.5226 A*6802 0.1742 A*23 A*2301 0.8711 A*69 A*6901 0.6969 HLA-A位點常見等位基因頻率表位點常見等位基因頻率表 （高分N=287） HLA-B位點常見等位基因頻率表位點常見等位基因頻率表 （高分N=287） Allele Group Alleles FAllele Group Alleles F（% %） Allele Group Alleles FAllele Group Alleles F（% %） All

28、ele Group Alleles FAllele Group Alleles F（% %） B B* *07 07 B*0701 0.1742 B*27 B*2705 0.3484 B B* *4646（9.419.41） B B* *4601 7.62224601 7.6222（2.462.46） B B* *0702 0702 1.91641.9164 B*2707 0.3484 B*48 B*4801 1.5679 B*0705 0.8711 B B* *35 35 B B* *3501 2.61323501 2.6132 B*49 B*4901 0.3484 B*0723 0.174

29、2 （4.644.64） B*3502 0.1742 B*50 B*5001 0.5226 B*08 B*0801 0.3484 B*3503 1.3937 B B* *5151（6.676.67） B B* *5101 4.67115101 4.6711 B B* *13 13 B B* *1301 4.0071301 4.007 B*3505 0.5226 B*5102 0.3484（13.1713.17） B B* *1302 10.03671302 10.0367 B*37 B*3701 1.1344 B B* *5252（3.073.07） B B* *5201 4.18125201

30、 4.1812 B B* *15 15 B B* *1501 4.84621501 4.8462 B B* *38 38 B B* *3802 1.91643802 1.9164 B*53 B*5301 0.1742 （14.4014.40） B B* *1502 1.91641502 1.9164 （2.412.41） B*39 B*3901 1.3937 B B* *5454（3.733.73） B B* *5401 4.84625401 4.8462 B*1507 0.3484 B*3905 0.1742 B B* *5555（2.482.48） B B* *5502 2.2648550

31、2 2.2648 B*1511 1.2195 B B* *40 40 B B* *4001 10.05294001 10.0529 B*5504 0.3950 B*1517 0.1742 （13.5813.58） B B* *4002 2.61324002 2.6132 B*5507 0.1742 B B* *1518 1.91641518 1.9164 B*4003 0.1742 B*56 B*5601 0.5226 B*1525 0.3484 B B* *4006 3.48434006 3.4843 B*57 B*5701 1.0453 B*1527 0.6969 B*4040 0.174

32、2 B B* *5858（6.606.60） B B* *5801 7.07355801 7.0735 B*1558 0.1742 B*41 B*4101 0.6969 B*67 B*6701 0.5226 B*18 B*1801 0.3484 B B* *44 44 B*4402 1.0453 B*81 B*8101 0.1742 B*27 B*2703 0.1742 （3.753.75） B B* *4403 3.48434403 3.4843 B*2704 1.2195 B*45 B*4501 0.3484Allele Group Alleles F (%) Allele Group A

33、llele F (%) Allele Group Alleles F (%) Allele Group Allele F (%) DRB1*01 DRB1DRB1* *0101 2.61320101 2.6132 DRB1DRB1* *1111(5.275.27) DRB1DRB1* *1101 4.40621101 4.4062 DRB1*0102 0.1742 DRB1*1104 0.3484DRB1DRB1* *0303(4.764.76) DRB1DRB1* *0301 4.93780301 4.9378 DRB1*1105 0.1742DRB1DRB1* *0404(12.4112.

34、41)DRB1*0401 1.2195 DRB1DRB1* *1212(12.2212.22) DRB1DRB1* *1201 2.61321201 2.6132 DRB1*0403 1.7422 DRB1DRB1* *1202 9.02241202 9.0224 DRB1*0404 0.1742 DRB1DRB1* *1313(6.576.57) DRB1DRB1* *1301 2.17311301 2.1731 DRB1DRB1* *0405 4.70380405 4.7038 DRB1DRB1* *1302 5.34651302 5.3465 DRB1DRB1* *0406 2.2648

35、0406 2.2648 DRB1*1307 0.1742 DRB1*0408 0.1742 DRB1*1312 0.6969 DRB1*0410 0.1742 DRB1DRB1* *1414(4.804.80) DRB1*1402 0.3484 DRB1DRB1* *0707(12.5112.51)DRB1DRB1* *0701 13.10480701 13.1048 DRB1*1403 0.1742DRB1DRB1* *0808(7.367.36) DRB1*0801 0.1742 DRB1*1404 0.3484 DRB1*0802 0.1742 DRB1DRB1* *1405 2.439

36、01405 2.4390 DRB1DRB1* *0803 7.75700803 7.7570 DRB1DRB1* *1454 1.91641454 1.9164 DRB1*0804 0.1742 DRB1DRB1* *1515(13.0913.09) DRB1DRB1* *1501 8.55741501 8.5574DRB1DRB1* *0909(16.1516.15)DRB1DRB1* *0901 15.56240901 15.5624 DRB1DRB1* *1502 2.26481502 2.2648DRB1*10 DRB1*1001 1.5288 DRB1*16 DRB1*1602 1.

37、2195HLA-DRB1位點常見等位基因頻率表位點常見等位基因頻率表 （高分N=287）由于新的等位基因不斷地被發(fā)現(xiàn), 且越發(fā)現(xiàn)越多, 很多等位基因其核苷序列的不同已經(jīng)超過了100種, 兩位數(shù)字已經(jīng)無法涵蓋。為了解決這問題以往是一組等位基因排位99后的另列命名，如A*9240（A*02140），B*9503（B*15103）。現(xiàn)在的新命名將以往前四位數(shù)字的內(nèi)容擴大到了五位數(shù)字, 如A*02:140, B*15:103. 隨著新的等位基因不斷地上報, 可以想象, 僅A2家族, 就會不斷延伸, 如A*02:150, A*02:151。HLA等位基因的新命名HLA等位基因的新命名A*01010101

38、 becomes A*01:01:01:01A*02010102L becomes A*02:01:01:02LA*260101 becomes A*26:01:01A*3301 becomes A*33:01B*0808N becomes B*08:08NDRB1*01010101 becomes DRB1*01:01:01:01HLA等位基因的新命名For allele families that have more than 100 alleles such as the A*02 and B*15 groups it will be possible to encode these i

39、n a single series. Thus the A*92 and B*95 alleles will now be renamed in to the A*02 and B*15 allele series. For example: A*9201 becomes A*02:101A*9202 becomes A*02:102A*9203 becomes A*02:103 etcB*9501 becomes B*15:101B*9502 becomes B*15:102B*9503 becomes B*15:103 etcHLA等位基因的新命名The w will be removed

40、 from the HLA-C allele names, but will be retained in the HLA-C antigens names, to avoid confusion with the factors of the complement system and epitopes on the HLA-C molecule often termed C1 and C2 that act as ligands for the Killer-cell Immunoglobulin-like Receptors.Cw*0103 becomes C*01:03Cw*02020

41、1 becomes C*02:02:01Cw*07020101 becomes C*07:02:01:01 etcHLA等位基因的新命名The DPB1 allele names that have been previously assigned names within the existing system will also be renamed,for example:DPB1*0102 becomes DPB1*100:01DPB1*0203 becomes DPB1*101:01DPB1*0302 becomes DPB1*102:01DPB1*0403 becomes DPB1

42、*103:01DPB1*0502 becomes DPB1*104:01 etcLists of old and new allele names will be made available through the IMGT/HLA Database (www.ebi.ac.uk/imgt/hla )WHO命名委員會還定義了某些等位基因串(String of Alleles)的代碼. 2，3外顯子多肽序列相同的等位基因串將以大寫的P注明，如A*02:01P (包括02:01/02:09/02:66/02:75/02:89/02:97 /02:132/ 02:134/ 02:140)。其臨床意

43、義在于P組里的等位基因可轉(zhuǎn)成同一多肽. 因此, 抗體不能區(qū)分P組里的等位基因. 2，3外顯子核苷序列相同的等位基因串將以大寫的G 注明, 如A*02:01:01G (包括A*02:01/02:09/02:43N/02:66/02:75/02:83N/02:89/02:97/02:132/02:134/02:140).國際影響 2005年9月， 北愛爾蘭國家組織免疫相容性實驗室主任Prof Derek Middleton了解到我室發(fā)現(xiàn)新等位基因，表示希望能參與合作，共享等位基因頻率等遺傳資料。 同年9月，國際組織相容性協(xié)作組（International Histocompatibility wo

44、rk group, IHWG負(fù)責(zé)人Brian.D.Tait教授邀請我實驗室參加第14屆國際組織相容性協(xié)作會議，共同討論HLA領(lǐng)域相關(guān)問題。 表表1 HLA 血清學(xué)分型和DNA 分型比較分型方法 檢 材 檢測對象A ,B ,C 血清學(xué)分型 單個核細(xì)胞 細(xì)胞表面抗原DR 血清學(xué)分型 B 淋巴細(xì)胞 細(xì)胞表面抗原A ,B ,C 基因分型 基因組DNA 外顯子2 , 3DRB1 基因分型 基因組DNA 外顯子2 基因分型技術(shù)： SSP SSOP（酶標(biāo)，LUMINEX，芯片） SBT方法和水平 HLA-A HLA-B HLA-DR血清學(xué)分型寬特異性水平 A9 , - B15 ,B40 DR2 ,DR6窄特

45、異性水平 A24 , - B62 ,B60 DR15 ,DR13DNA 基因分型低分辨 A*24XX ,68XX B*15XX(B62) ,40XX(B60) DRB1*15XX ,13XX中分辨 A*2402/ 2404 B*1501/1504/1505/1507 DRB1*1501/1503/1505 A*6801/ 6802/ 6811N B*4001/ 4007/ 4010 DRB1*1301/1305/1306高分辨 A*2404 ,6811N B*15010101 ,400103 DRB1*150101 ,1306HLA 分型水平比較和報告形式中華骨髓庫要求在括號中注明對應(yīng)的抗原特

46、異性 HLA 基因分型結(jié)果轉(zhuǎn)換成HLA 抗原特異性 移植排斥反應(yīng)是免疫活性細(xì)胞間的相互作用。在移植免疫反應(yīng)中,宿主細(xì)胞識別的是外來HLA 抗原表位,而不是HLA 基因。雖然HLA 基因分型比經(jīng)典的血清學(xué)分型準(zhǔn)確,而且可以檢測出血清學(xué)難以鑒定的HLA 基因產(chǎn)物,但是分型結(jié)果只是提供受檢者帶有哪些HLA 基因的信息,不能直接反映出該基因編碼的HLA 抗原在細(xì)胞表面的表達(dá)情況以及免疫原性。因此臨床造血干細(xì)胞移植配型角度要求HLA 基因分型結(jié)果必需“翻譯”成HLA 抗原特異性。在此背景下國際通用的HLA 字典應(yīng)運而生,而美國NMDP 進(jìn)一步建立起以血清學(xué)代碼為基礎(chǔ)的SD ( search determ

47、inants) 檢索系統(tǒng)。表表 HLA 等位基因?qū)?yīng)的血清學(xué)特異性以及編碼系統(tǒng)示例等位基因 HLA 字典 美國NMDP 中華骨髓庫 特異性 SD 系統(tǒng) 指定特異性B * 1501 B62 62 B62B * 1502, 1511 B75 75 B75B * 1503 B72 70 B72B * 1509 B70 70 B70 B * 1510, 1518 B71 70 B71 B * 1512 B76 62/76 B76 B * 1513 B77 77 B77 B * 1516 B63 63 B63B * 1523 - 70 B15B * 1526N 無效 空白 無效 B * 1529 B15

48、 70 B15B * 1538 - 62 B15B * 1544 - 75 B15 B * 1547 - 70 B15B * 1555 B15 75 B15 B * 1558 B15 62 B15 常見常見容易混淆容易混淆的高分結(jié)果的高分結(jié)果 (高分前兩位數(shù)字與血清學(xué)結(jié)果數(shù)字不同高分前兩位數(shù)字與血清學(xué)結(jié)果數(shù)字不同)寬抗原寬抗原窄抗原窄抗原分子生物學(xué)高分結(jié)果分子生物學(xué)高分結(jié)果備注備注B15B62B*1501/1504/1505/1507/1515/1520/1524/1525/1527/1528/1530/1532/B15系列系列. 1534/1535/1539/1545/1548/1558/1

49、570/1571/1573/1582/1584/1596/9502.B15B63B*1517.B15B70B*1537/1551/1580/9503/9514.B15B71B*1510/1518/1593/9508.B15B72B*1546.B15B75B*1502/1508/1511/1521/1531.B15B76B*1512/1514/1519.B40B60B*4001/4007/4010/4014/4031/4034/4048/4052/4054B40系列系列B40B61B*4002/4003/4004/4006/4009/4016/4020/4027/4029/4035/4050/4

50、053/4056/. 4070/4071/4072/4073/4074/4075/4076/4077/4078/4079/4080/4081/4082/. 4083/4084/4085/4086/4087/4088.B12B44B*5142B12系列系列B12B45B*5002.B21B49/50B*4026B21系列系列B21B49/50B*4442.B41B*4039 .B47B*4416 B22B54B*5507B22系列系列B22B56B*5508.B78B*5606 中華骨髓庫的特異性指定系統(tǒng)基本上以HLA 字典為標(biāo)準(zhǔn)指定HLA 特異性。對于血清學(xué)特異性未知的等位基因,采用以血清學(xué)寬

51、特異性表示的方法處理。比如B* 1523 , B * 1538 , B *1544 和B *1547等位基因,都被指定為B15 。按此方法指定的特異性范圍一般比SD 系統(tǒng)為寬,但以后可以按照HLA 字典提供的新信息而更新。HLA 單體型，純合子，雜合子 HLA 不同座位上的基因,緊密連鎖組合成HLA 單體型,在家庭中以共顯性等位基因的遺傳方式傳遞。因此,每個人都帶有2條分別來自父母的HLA 單體型。父母和孩子之間總是共有一條HLA 單體型。同胞之間,有1/ 4 的機會得到2 條相同的單體型;有1/ 4 的機會得到2 條不相同的單體型;還有1/ 2 的機會得到一條相同的HLA 單體型。 如果一個

52、體的某座位上帶有2 個相同的等位基因,被稱為純合子;如帶有2 個不相同的等位基因即為雜合子。只有通過家系調(diào)查才能確定是否為純合個體 。HLA 等位基因連鎖不平衡 HLA 不同座位上的等位基因之間存在連鎖不平衡即實際觀察到的某些等位基因出現(xiàn)在同一條單體型上的頻率顯著高于或低于預(yù)期值,提示這些等位基因傾向于組合在一起。不同種族中的連鎖不平衡格局不盡相同。 比如,HLA-A2 , B46 ,DR9 和HLA-A30 , B13 , DR7是中國人中最常見的存在連鎖不平衡的單體型。HLA-A1 , B73 , DR10 是中國人中發(fā)現(xiàn)的罕見連鎖不平衡HLA 單體型。HYPLOTYES eHF (%)

53、aHF(%) A*30- B*13- DRB1*07 6.92 9.01A*02- B*46- DRB1*09 3.53 3.73A*33- B*58- DRB1*03 2.54 2.46A*33- B*58- DRB1*13 1.89 1.62A*11- B*15- DRB1*12 1.46 1.76A*33- B*44- DRB1*13 1.41 1.06A*11- B*15- DRB1*04 1.34 0.77A*02- B*40- DRB1*09 1.31 1.76A*02- B*46- DRB1*08 1.30 1.34A*24- B*40- DRB1*09 1.19 0.99A*0

54、2- B*15- DRB1*09 1.17 0.63A*02- B*15- DRB1*15 1.14 0.70A*24- B*15- DRB1*04 1.02 0.56常見單體型頻率舉例常見單體型頻率舉例 HLA-A HLA-A* * B B* * DRB1 DRB1* * 頻率頻率(%) HLA-A(%) HLA-A* * B B* * DRB1 DRB1* * 頻率頻率(%)(%) 3001 1302 0701 8.5 1101 4006 0901 0.7 3001 1302 0701 8.5 1101 4006 0901 0.7 3303 5801 0301 2.8 1101 1301

55、1501 0.7 3303 5801 0301 2.8 1101 1301 1501 0.7 0207 4601 0901 1.9 1101 4601 0901 0.7 0207 4601 0901 1.9 1101 4601 0901 0.7 3303 5801 1302 1.7 1101 5401 0405 0.7 3303 5801 1302 1.7 1101 5401 0405 0.7 3303 4403 1302 1.7 2402 4001 0803 0.7 3303 4403 1302 1.7 2402 4001 0803 0.7 2402 4001 0405 0.9 3201 5

56、201 0101 0.7 2402 4001 0405 0.9 3201 5201 0101 0.7 0207 4601 0803 0.9 3303 5801 0101 0.7 0207 4601 0803 0.9 3303 5801 0101 0.7 1101 1502 1202 0.9 1101 1502 1202 0.9 其他其他357357種單倍型種單倍型 0.5 0.5 167167個家系等位基因水平個家系等位基因水平1515種常見單倍型種常見單倍型子女與其父或母HLA單體型出現(xiàn)完全相同的家系 P793 M FHLA- A -B -DRB1 30 13 07 30 13 07 30

57、13 07 33 58 03 33 58 03 24 40 08 P1772 M FHLA- A -B -DRB1 24 40 08 24 40 08 24 40 08 11 40 15 11 40 15 02 15 12 Guidelines for Unrelated Bone Marrow Transplants1 Commen well-documented (CWD) alleles 2 NMDP HLA-Matching Guidelines for Unrelated Marrow Transplants3 permissive un-matching in allo-HSCT關(guān)

58、于關(guān)于CWD (常見等位基因常見等位基因+少見等位基因少見等位基因)ASHI-HLA專家委員會對專家委員會對HLA基因分類的定義基因分類的定義:1)常見等位基因常見等位基因(Common alleles): 在任何參照人群中在任何參照人群中, 該等位基因頻率均大于該等位基因頻率均大于0.0012) 少見等位基因少見等位基因(Well-documented alleles): 無關(guān)個體中至少被獨立觀察到三次的等位基因，但它們的頻率未能被無關(guān)個體中至少被獨立觀察到三次的等位基因，但它們的頻率未能被準(zhǔn)確地評估，某一特定人群中發(fā)現(xiàn)的等位基因可能在另外一人群中頻準(zhǔn)確地評估，某一特定人群中發(fā)現(xiàn)的等位基因可

59、能在另外一人群中頻率極低。總體上率極低。總體上, 這類等位基因的頻率明顯低于常見等位基因這類等位基因的頻率明顯低于常見等位基因3) 罕見等位基因罕見等位基因(Rare alleles): 余下的等位基因被歸類于罕見基因余下的等位基因被歸類于罕見基因 這類等位基因的頻率非常低這類等位基因的頻率非常低 其最高頻率可通過出現(xiàn)在被檢測人群的規(guī)其最高頻率可通過出現(xiàn)在被檢測人群的規(guī) 模而估算出來例如，被檢測的總標(biāo)本量為萬人，該基因被檢測出模而估算出來例如，被檢測的總標(biāo)本量為萬人，該基因被檢測出 一次因此，該基因的最高頻率為一次因此，該基因的最高頻率為1/20,000。除了與被檢測出的個體。除了與被檢測出的

60、個體 具有血緣關(guān)系外具有血緣關(guān)系外, 很難從其他個體再被發(fā)現(xiàn)。很難從其他個體再被發(fā)現(xiàn)。關(guān)于關(guān)于CWD (常見等位基因常見等位基因+少見等位基因少見等位基因)s由于研究方面的限制，由于研究方面的限制，ASHI-HLA專家委員會建議專家委員會建議將常見等將常見等位基因和少見等位基因歸于一類位基因和少見等位基因歸于一類, 即即CWD等位基因等位基因, 以便明確以便明確區(qū)分罕見基因區(qū)分罕見基因. 這樣有利于實驗室和臨床實踐這樣有利于實驗室和臨床實踐. 此外此外, 對等位基對等位基因的分類應(yīng)定期加以審查因的分類應(yīng)定期加以審查sCWD的確定基于在任何參照人群中的確定基于在任何參照人群中, 其精確的基因頻率