高效液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)操作程序

1、高效液相色譜柱標(biāo)準(zhǔn)操作程序1目的規(guī)定高效液相色譜柱使用時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。2適用范圍適用于化驗(yàn)室所使用的高效液相色譜柱。3職責(zé)3.1化驗(yàn)室負(fù)責(zé)制定本SOP。3.2經(jīng)過(guò)相應(yīng)培訓(xùn)的檢驗(yàn)員方可使用高效液相色譜柱。 4文件內(nèi)容4.1購(gòu)買 (1) 化驗(yàn)室提出購(gòu)買申請(qǐng)。 (2) 供應(yīng)部負(fù)責(zé)購(gòu)買。4.2驗(yàn)收 (1) 高效液相色譜柱購(gòu)入后，保管員應(yīng)檢查其外觀、標(biāo)簽是否完好無(wú)損，印刷是否清晰；測(cè)試報(bào)告中所提到的柱效是否符合需要，保存廠家色譜柱評(píng)價(jià)報(bào)告。（2）對(duì)新購(gòu)入色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試，并填寫高效液相色譜柱柱效測(cè)試記錄。 (3) 在每根色譜柱進(jìn)行唯一性編號(hào)（即柱子編號(hào)），分別標(biāo)記在柱盒和柱子上，編號(hào)由7位阿拉伯?dāng)?shù)字

2、和連字符“-”組成，首4位數(shù)字代表購(gòu)買的年份，后三位數(shù)字代表流水號(hào)，年份和流水號(hào)之間用連字符“-”連接，例如2010-001代表2010年購(gòu)買的第一根。 (4) 確認(rèn)無(wú)誤后，應(yīng)填寫高效液相色譜柱臺(tái)帳上相關(guān)內(nèi)容。4.3 使用 (1) 實(shí)驗(yàn)前，選擇所要使用的色譜柱，填寫高效液相色譜柱使用記錄。一般一個(gè)品種一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目固定一根色譜柱。實(shí)驗(yàn)前先將反相色譜柱用純化水：有機(jī)相（甲醇或乙腈）為9：1沖洗2030分鐘后換上流動(dòng)相 ；正相色譜柱用異丙醇沖洗2030分鐘，換上純化水：有機(jī)相（甲醇或乙腈）為9：1沖洗2030分鐘后換上流動(dòng)相。 (2) 實(shí)驗(yàn)開始前先進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，確定色譜柱的峰形、重復(fù)性、理論板

3、數(shù)、分離度、拖尾因子等參數(shù)是否符合實(shí)驗(yàn)要求。如因色譜柱原因無(wú)法達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，可更換合適色譜柱,。更換的色譜柱必須要通過(guò)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求才能用于實(shí)驗(yàn)。原色譜柱需進(jìn)行柱效測(cè)試，評(píng)估可用性，并填寫高效液相色譜柱柱效測(cè)試報(bào)告。4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后沖洗色譜系統(tǒng)。 (1) 反相色譜柱：如流動(dòng)相含磷酸鹽緩沖液，先用流速為1.0ml/min的純化水沖洗色譜系統(tǒng)10分鐘后再用流速為1.0ml/min的純化水：有機(jī)相（甲醇或乙腈）為9：1沖洗60分鐘后再用流速為1.0ml/min的有機(jī)相（甲醇或乙腈）沖洗30分鐘；如流動(dòng)相不含磷酸鹽緩沖液，色譜系統(tǒng)先用流速為1.0ml/min的純化水-有機(jī)相（甲醇或乙腈

4、）為9：1沖洗60分鐘后再用流速為1.0ml/min的有機(jī)相（甲醇或乙腈）沖洗30分鐘。 (2) 正相色譜柱：如流動(dòng)相含磷酸鹽緩沖液，先用流速為1.0ml/min的純化水沖洗色譜系統(tǒng)10分鐘后再用流速為1.0ml/min的純化水：有機(jī)相（甲醇或乙腈）為9：1沖洗30分鐘后，再用流速為0.5ml/min的異丙醇（色譜級(jí)）沖洗30分鐘，再用流速為0.5ml/min的正己烷（色譜級(jí)）沖洗30分鐘；如流動(dòng)相不含磷酸鹽緩沖液，色譜系統(tǒng)先用流速為1.0ml/min的純化水-有機(jī)相（甲醇或乙腈）為9：1沖洗60分鐘后，再用流速為0.5ml/min的異丙醇（色譜級(jí)）沖洗30分鐘，再用流速為0.5ml/min的

5、正己烷（色譜級(jí)）沖洗30分鐘。 (3) 拆下色譜柱，兩端用柱螺帽擰緊后存放于色譜柱盒中。填寫高效液相色譜柱使用記錄及高效液相色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)臺(tái)賬。 (4) 每一色譜柱使用后均應(yīng)填寫高效液相色譜柱使用記錄及高效液相色譜柱系統(tǒng)適用性試驗(yàn)臺(tái)賬。高效液相色譜柱使用記錄內(nèi)容包括使用日期、使用者、樣品名稱、設(shè)備編號(hào)、流動(dòng)相比例、柱溫、流速、出峰時(shí)間、壓力、流動(dòng)相pH、實(shí)驗(yàn)情況、分析類型、進(jìn)樣次數(shù)、累計(jì)進(jìn)樣次數(shù)、沖洗溶劑及沖洗時(shí)間、貯存液及沖洗時(shí)間、歸還者、歸還日期。高效液相色譜柱系統(tǒng)適用性試驗(yàn)臺(tái)賬內(nèi)容包括使用日期、樣品名稱、分析類型、設(shè)備編號(hào)、理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子，信噪比。4.5 色譜柱的保養(yǎng)色

6、譜柱的長(zhǎng)期保存 反相柱可以儲(chǔ)存于甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于經(jīng)脫水處理后的正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于含5%甲醇或含0.05%疊氮化鈉的水中，并將色譜柱兩端的堵頭堵上，以免干枯，室溫保存；如有廠家規(guī)定儲(chǔ)存條件，按廠家規(guī)定執(zhí)行。4.6 色譜柱可用性評(píng)估（1）根據(jù)高效液相色譜柱柱效測(cè)試記錄評(píng)估色譜柱是否需要報(bào)廢。（2）根據(jù)高效液相色譜柱系統(tǒng)適用性試驗(yàn)臺(tái)賬評(píng)估色譜柱是否需要更換。（3）根據(jù)高效液相色譜柱使用記錄色譜柱的使用情況來(lái)評(píng)估色譜柱的使用壽命。4.7 報(bào)廢 有以下情形之一，對(duì)色譜柱進(jìn)行報(bào)廢，并填寫高效液相色譜柱臺(tái)帳。 (1) 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)峰形變壞（如出現(xiàn)肩峰或雙峰），表明柱入口柱床塌陷； (2) 實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)峰形變寬，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)不符合相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目要求，改變流動(dòng)相也無(wú)法改善； (3) 柱壓超出儀器可承受壓力； (4) 其他不符合系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)要求的情況。4.8注意事項(xiàng) (1) 安裝色譜柱時(shí)應(yīng)使流動(dòng)相流路的方向與色譜柱標(biāo)簽上箭頭所示方向一致。 (2) 以硅膠為基質(zhì)的各種鍵合相對(duì)酸和堿都敏感，一般pH使用范圍為28。當(dāng)流動(dòng)相pH大于8時(shí)，應(yīng)選用耐堿的填充劑；當(dāng)流動(dòng)相pH