三聚氰胺的檢測方法（課堂PPT）

1、1牛奶中三聚氰胺牛奶中三聚氰胺(Melamine)ELISA檢測檢測以勤邦以勤邦CA301試劑盒為例試劑盒為例農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（呼和浩特）農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（呼和浩特）狄彩霞（狄彩霞0471-59045592 內(nèi)內(nèi) 容容一、概要一、概要二、原理二、原理三、檢測步驟三、檢測步驟四、注意事項(xiàng)四、注意事項(xiàng)3一、一、概要概要三聚氰胺（三聚氰胺（Melamine）簡稱三胺，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合）簡稱三胺，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機(jī)化合物，被用作化工原料。它是白色單斜晶體，幾乎無味，微溶于水、對物，被用作化工原料。它是白色單斜晶體，幾乎

2、無味，微溶于水、對身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。長期或反復(fù)大量攝入對身體有害，不可用于食品加工或食品添加物。長期或反復(fù)大量攝入對腎與膀胱產(chǎn)生影響，導(dǎo)致產(chǎn)生結(jié)石。腎與膀胱產(chǎn)生影響，導(dǎo)致產(chǎn)生結(jié)石。檢測方法：檢測方法：氣相色譜質(zhì)譜法（氣相色譜質(zhì)譜法（GC-MS） 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS-MS） 高效液相色譜法高效液相色譜法(HPLC) 準(zhǔn)確；成本高、操作復(fù)雜準(zhǔn)確；成本高、操作復(fù)雜 ELISA試劑盒檢測，快速、簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高試劑盒檢測，快速、簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高4二、原二、原 理理采用間接競爭采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被三聚氰胺方法，在

3、酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被三聚氰胺抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭三聚抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔條上預(yù)包被的抗原競爭三聚氰胺抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用氰胺抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成其殘留物三聚氰胺成負(fù)相關(guān)負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，再乘以其對應(yīng)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。 5三、檢測步驟三、檢測步驟1. 準(zhǔn)備：試劑盒準(zhǔn)備：試劑盒20回至室溫，回至室溫，搖勻搖勻；配洗滌工作液；配洗滌工作液20倍濃縮倍濃縮（1份濃縮洗滌液份濃縮洗滌液+1

4、9份去離子水），份去離子水），4下保存下保存1個月。個月。2. 編號：取需要數(shù)量微孔板，將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔編號；編號：取需要數(shù)量微孔板，將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔編號；3. 加液：加標(biāo)準(zhǔn)品、樣本加液：加標(biāo)準(zhǔn)品、樣本20l；加酶標(biāo)二抗加酶標(biāo)二抗50l；再加抗體工作；再加抗體工作液液80l；振蕩混勻，蓋板避光反應(yīng)；振蕩混勻，蓋板避光反應(yīng)20min;64. 洗板：孔內(nèi)液體甩干，每孔加洗滌液洗板：孔內(nèi)液體甩干，每孔加洗滌液250l，洗滌，洗滌4-5次，次， 最后用吸水紙拍干；最后用吸水紙拍干；5. 顯色：加顯色液顯色：加顯色液A、B各各50l，混勻，蓋板避光反應(yīng)，混勻，蓋板避光反應(yīng)10min;6. 測

5、定：加終止液測定：加終止液50l，混勻，在酶標(biāo)儀，混勻，在酶標(biāo)儀450nm讀讀OD值。值。7. 結(jié)果判定：標(biāo)準(zhǔn)品、樣品輸入軟件計(jì)算結(jié)果判定：標(biāo)準(zhǔn)品、樣品輸入軟件計(jì)算7四、注意事項(xiàng)四、注意事項(xiàng)1. 試劑試劑盒選用不同，操作過程不同，請按購買試劑盒盒選用不同，操作過程不同，請按購買試劑盒說明操作；說明操作；2. 室溫低于室溫低于20或試劑及樣本未回到室溫或試劑及樣本未回到室溫20-25，會導(dǎo)致會導(dǎo)致OD偏低；偏低；3. 每加一種試劑前要將其搖勻；每加一種試劑前要將其搖勻；4. 不同批號試劑盒不要混用；不同批號試劑盒不要混用；85. 試劑盒試劑盒2-8保存；保存；6. 0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5時，表示試劑可能變質(zhì)；時，表示試劑可能變質(zhì)；7. 加入底物液加入底物液A、B后，一般顯色后，一般顯色10min，若顏色較淺，若顏色較淺可延長反應(yīng)時間到可延長反應(yīng)時間到15min，但不可超過，但不可超過20min，反，反之則減短反應(yīng)時間；之則減短反應(yīng)時間；8.每種液體加入速度盡量一致、快。每種液體加入速度盡量一致、快。91pp