CL-BIII四通道殘留農(nóng)藥測(cè)定儀使用說(shuō)明

1、CL-BIII四通道殘留農(nóng)四通道殘留農(nóng)藥測(cè)定儀使用說(shuō)明藥測(cè)定儀使用說(shuō)明上海博納新技術(shù)研究所上海博納新技術(shù)研究所2006年年2月月農(nóng)殘常識(shí)農(nóng)殘常識(shí)1 有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)、殺螨劑的特點(diǎn)。兩類農(nóng)藥的作用機(jī)理均為抑制動(dòng)物體內(nèi)乙酰膽堿酯酶的活性，破壞神經(jīng)傳導(dǎo)，引起一系列的神經(jīng)中毒癥狀，直至死亡。二者的主要區(qū)別在于：有機(jī)磷類殺蟲(chóng)、殺螨劑對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制是不可逆的，而氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)、殺螨劑對(duì)乙酰膽堿酯酶的抑制是可逆的 。農(nóng)殘常識(shí)農(nóng)殘常識(shí)2 酶抑制率法和酶系酶源：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.199-2003蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)推薦的酶抑制率法能方便、快速、準(zhǔn)確、成本低廉檢

2、測(cè)出農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，也同時(shí)肯定了乙酰膽堿酯酶酶系作為快速檢測(cè)推薦試劑的活性量和具體要求。近年來(lái)，我們通過(guò)對(duì)動(dòng)物源和植物源的多種丁酰膽堿酯酶、乙酰膽堿酯酶進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和比較研究，發(fā)現(xiàn)乙酰膽堿酯酶對(duì)農(nóng)藥的檢測(cè)敏感度和綜合指標(biāo)優(yōu)于丁酰膽堿酯酶；確定了有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)乙酰膽堿酸有較專一性的抑制作用；分析出在抑制率70%以下，大多數(shù)農(nóng)藥濃度和乙酰膽堿酯酶抑制率呈較好的線性關(guān)系，并能實(shí)現(xiàn)對(duì)單種農(nóng)藥的定量分析；解決了酶的活性和穩(wěn)定性控制等技術(shù) 農(nóng)殘常識(shí)農(nóng)殘常識(shí)3 什么是間接比色法:由于只有當(dāng)?shù)孜锱c產(chǎn)物之間，在光學(xué)性質(zhì)或其它理化性質(zhì)有顯著差異時(shí)，才可能直接用分光光度計(jì)法測(cè)定，因此對(duì)酶活性濃度的監(jiān)

3、測(cè)大多是采用間接監(jiān)測(cè)法。如對(duì)膽堿酯酶的測(cè)定：底物（硫代乙酰膽堿）及酶水解產(chǎn)物（硫代膽堿和乙酸）并不具有顏色，不能用分光光度計(jì)法測(cè)定。所以必須設(shè)法在原來(lái)反應(yīng)體系中添加一些試劑，這些試劑必須不與酶作用也不影響酶活性，同時(shí)又能與酶反應(yīng)物迅速作用，產(chǎn)生可以被直接測(cè)定的物質(zhì)。這就產(chǎn)生了Ellman的膽堿酯酶測(cè)定法即間接連續(xù)監(jiān)測(cè)法。目前國(guó)內(nèi)大多廠家生產(chǎn)的快速農(nóng)藥測(cè)定儀都采用了 Ellman的膽堿酯酶測(cè)定法即間接比色法。該方法通過(guò)監(jiān)測(cè)底物（硫代乙酰膽堿），酶水解產(chǎn)物硫代膽堿與添加的二硫代硝基苯甲酸（DTNB）作用立刻生成黃色化合物的反應(yīng)速度來(lái)測(cè)定酶活性變化。農(nóng)殘常識(shí)農(nóng)殘常識(shí)4 什么是固定時(shí)間法:早期這類方法

4、常被命名為“終點(diǎn)法”、“二點(diǎn)法”、“固定時(shí)間法”和“取樣法”。該方法先選擇一段固定的時(shí)間（固定為3分鐘），先讓酶與底物在一定溫度下進(jìn)行一段固定的時(shí)間（固定為3分鐘）的化學(xué)反應(yīng)，并根據(jù)呈色測(cè)出底物和產(chǎn)物的變化用比色法對(duì)反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行評(píng)定。由于“二點(diǎn)法”容易受到干擾，并產(chǎn)生誤差，使檢測(cè)穩(wěn)定性較低。 農(nóng)殘常識(shí)農(nóng)殘常識(shí)5 什么是連續(xù)監(jiān)測(cè)法：50年代，Warburg首先用分光光度計(jì)測(cè)定酶的活性。該方法不需停止酶反應(yīng)就可測(cè)定反應(yīng)物的變化，容易觀察到反應(yīng)的整個(gè)過(guò)程和干擾情況（通過(guò)繪制反應(yīng)曲線）。因此逐步取代了固定時(shí)間法成為目前測(cè)酶活性的主要方法。該方法是利用連續(xù)對(duì)反應(yīng)過(guò)程進(jìn)行高靈敏度檢測(cè)，并通過(guò)繪制整個(gè)酶反應(yīng)

5、曲線避開(kāi)延滯期和非線性反應(yīng)期，只在線性反應(yīng)期測(cè)定最大反應(yīng)初速度。由于儀器的高精密度，連續(xù)監(jiān)測(cè)法能在很短時(shí)間，甚至在1分鐘反應(yīng)時(shí)間內(nèi)就能準(zhǔn)確測(cè)定出活性的抑制率。 技技 術(shù)術(shù) 指指 標(biāo)標(biāo)CL-BIII四通道殘留農(nóng)藥測(cè)定儀的技術(shù)指標(biāo)：四通道殘留農(nóng)藥測(cè)定儀的技術(shù)指標(biāo)： 測(cè)量波長(zhǎng)：410nm 通道數(shù)：4 檢測(cè)用樣品器皿：10mm比色皿 光電流漂移：1% (3min) 暗電流漂移：1% (3min) 抑制率顯示范圍：0-100% 抑制率測(cè)量范圍：10-100% 農(nóng)藥檢測(cè)：（用甲胺磷農(nóng)藥標(biāo)樣測(cè)試） 抑制率示值誤差：10 % 抑制率重復(fù)性誤差： 5 % 第一部分第一部分 試劑配制試劑配制第二部分第二部分 聯(lián)機(jī)

6、使用聯(lián)機(jī)使用第三部分第三部分 單機(jī)使用單機(jī)使用第四部分第四部分 相關(guān)技巧與常識(shí)相關(guān)技巧與常識(shí)目目 錄錄第一部分第一部分試劑配制試劑配制 1、試劑的配制、試劑的配制提取液提取液：把提取液甲乙粉末倒入大玻璃瓶中，并加 510ml蒸餾水溶解。酶試劑酶試劑：用移液槍取3.1ml提取液，加入酶試劑瓶中。顯色劑顯色劑：用移液槍取20ml提取液，加入顯色劑瓶，溶 解后倒入棕色瓶中。底底 物物：用移液槍取3.1ml蒸餾水，加入底物瓶中。2、試劑的保存及注意事項(xiàng)、試劑的保存及注意事項(xiàng)返回目錄1、本試劑適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為：、本試劑適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為：GB/T5009.199-2003。2、未配制的試劑，要保存在、未配

7、制的試劑，要保存在0以下的冷凍箱里。以下的冷凍箱里。 （保質(zhì)期可達(dá)（保質(zhì)期可達(dá)1年）年）3、配制好的酶和底物試劑，要保存在、配制好的酶和底物試劑，要保存在4的冷藏箱內(nèi)。的冷藏箱內(nèi)。 （保質(zhì)期為一周）（保質(zhì)期為一周）4、配制好的提取液常溫下可以長(zhǎng)期保存。、配制好的提取液常溫下可以長(zhǎng)期保存。5、配制好的顯色劑需避光保存；常溫或冷藏，可以、配制好的顯色劑需避光保存；常溫或冷藏，可以 保存保存1年。年。第二部分第二部分聯(lián)機(jī)使用聯(lián)機(jī)使用第一步第一步 儀器連接儀器連接1、連接電源將儀器的電源接頭和數(shù)據(jù)信號(hào)線接好。 如圖：2、連接電腦 把RS232/RS485的轉(zhuǎn)換器接入電腦主機(jī)背后的COM口（串口）上，然

8、后把數(shù)據(jù)信號(hào)線與轉(zhuǎn)換器連接上，這樣就完成了儀器與電腦的硬件連接。第二步第二步 檢測(cè)操作檢測(cè)操作安裝安裝“農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)軟件農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)軟件” 把“農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)軟件”光盤放入電腦光驅(qū)中，等自動(dòng)讀取或在光盤目錄下找到并雙擊“setup”后，按提示點(diǎn)擊“下一步”安裝。安裝完成以后，桌面上會(huì)出現(xiàn)“食品質(zhì)量安全檢測(cè)平臺(tái)”的圖標(biāo)。安裝完成桌面上出現(xiàn)的圖標(biāo)儀器設(shè)置儀器設(shè)置首先按儀器“設(shè)置”鍵，選擇為“受控”。然后再打開(kāi)檢測(cè)軟件，檢測(cè)軟件的用戶名默認(rèn)為“管理員”，密碼是“111111”。這樣檢測(cè)軟件對(duì)檢測(cè)儀器進(jìn)行控制了。檢測(cè)軟件登陸操作步驟操作步驟整個(gè)的實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程可以分為三個(gè)大部分：調(diào)0、調(diào)

9、100空白對(duì)照樣品分析調(diào)調(diào)0/100注：以上是一個(gè)檢測(cè)窗口注：以上是一個(gè)檢測(cè)窗口的步驟，其他三個(gè)窗口都的步驟，其他三個(gè)窗口都是如此。是如此。 等待10-15秒 按“確定” 放入黑塊 等待10-15秒 按“確定” 拿出黑塊 按“ ”鍵按“ ”鍵按“ ”鍵 按“ ”鍵空白對(duì)照空白對(duì)照 用小移液槍取用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中酶試劑加入試管中 用小移液槍取用小移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中顯色劑加入試管中 用小移液槍取用小移液槍取0.1ml底物加入試管中底物加入試管中 迅速搖勻并倒入比色皿迅速搖勻并倒入比色皿 放入比色池放入比色池 按按“開(kāi)始對(duì)照分析開(kāi)始對(duì)照分析”鍵鍵 等待對(duì)照結(jié)束等待

10、對(duì)照結(jié)束 用大移液槍抽取用大移液槍抽取2.5ml提取液放入試管中提取液放入試管中裝入對(duì)照裝入對(duì)照 按“裝入對(duì)照分析”鍵選擇所需對(duì)照選擇需要裝入對(duì)照的通道號(hào)（在通道號(hào)碼前） 按“讀取”鍵完成裝入工作 注：對(duì)照結(jié)束后，對(duì)照曲線會(huì)自動(dòng)注：對(duì)照結(jié)束后，對(duì)照曲線會(huì)自動(dòng)保存保存. . （標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照庫(kù)中已有（標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照庫(kù)中已有3030種蔬種蔬菜的對(duì)照，在做這菜的對(duì)照，在做這3030種蔬菜時(shí)，請(qǐng)種蔬菜時(shí)，請(qǐng)參照這些對(duì)照。）參照這些對(duì)照。） 裝入標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照庫(kù)裝入標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照庫(kù) 按“裝入對(duì)照分析”鍵選擇所需的空白對(duì)照和相應(yīng)的樣品修正值選擇需要裝入對(duì)照的通道號(hào)（在通道號(hào)碼前） 按“讀取”鍵完成裝入工作 用天平稱取1克果蔬剪成

11、2cm見(jiàn)方 放入燒杯中，用大移液槍抽取5ml提取液加入到燒杯中 靜置15分鐘（或震蕩1分鐘） 用大移液槍從燒杯中抽取2.5ml浸泡液移至空試管中 用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中 用小移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中靜置15分鐘 用小移液槍取0.1ml底物加入試管中 迅速搖勻并倒入比色皿 放入比色池 按“開(kāi)始樣品分析”鍵 等待檢測(cè)結(jié)果 第三步第三步 保存檢測(cè)結(jié)果保存檢測(cè)結(jié)果保存檢測(cè)結(jié)果保存檢測(cè)結(jié)果樣品結(jié)束后，系統(tǒng)自動(dòng)彈出“檢測(cè)結(jié)果”對(duì)話框 選擇該通道所測(cè)蔬菜名 填寫(xiě)（選擇）檢測(cè)單位 按“退出”鍵 填寫(xiě)（選擇）被檢單位和生產(chǎn)單位 按“保存”鍵，保存檢測(cè)結(jié)果 備備 注注“統(tǒng)計(jì)分析統(tǒng)計(jì)分析”

12、 中的中的“農(nóng)殘檢測(cè)數(shù)據(jù)查詢統(tǒng)計(jì)農(nóng)殘檢測(cè)數(shù)據(jù)查詢統(tǒng)計(jì)”對(duì)話框?qū)υ捒蛴兴斜４孢^(guò)的檢測(cè)數(shù)據(jù)，在該對(duì)話框中有有所有保存過(guò)的檢測(cè)數(shù)據(jù)，在該對(duì)話框中有“開(kāi)始日期開(kāi)始日期“、“結(jié)束日期結(jié)束日期”、“果蔬品種果蔬品種”、“被檢單位被檢單位”等九等九項(xiàng)選項(xiàng)，對(duì)這些選項(xiàng)進(jìn)行組合選擇后，再按項(xiàng)選項(xiàng)，對(duì)這些選項(xiàng)進(jìn)行組合選擇后，再按“查詢查詢”鍵，鍵，就可以將您需要的信息從所有的數(shù)據(jù)中篩選出來(lái)。就可以將您需要的信息從所有的數(shù)據(jù)中篩選出來(lái)。另外，另外，“農(nóng)殘檢測(cè)數(shù)據(jù)查詢統(tǒng)計(jì)農(nóng)殘檢測(cè)數(shù)據(jù)查詢統(tǒng)計(jì)”對(duì)話框中還有對(duì)話框中還有“統(tǒng)統(tǒng)計(jì)分析計(jì)分析”和和“轉(zhuǎn)存轉(zhuǎn)存”等功能，當(dāng)選擇出需要的檢測(cè)數(shù)據(jù)等功能，當(dāng)選擇出需要的檢測(cè)數(shù)據(jù)后，

13、就可以按后，就可以按“統(tǒng)計(jì)分析統(tǒng)計(jì)分析”鍵或者鍵或者“轉(zhuǎn)存轉(zhuǎn)存”鍵，對(duì)數(shù)據(jù)鍵，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析或制成相應(yīng)報(bào)表。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析或制成相應(yīng)報(bào)表。如果需要打印單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果，則點(diǎn)選該結(jié)果后，按如果需要打印單項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果，則點(diǎn)選該結(jié)果后，按“打印當(dāng)前記錄打印當(dāng)前記錄”鍵，瀏覽打印效果，再按打印鍵后打鍵，瀏覽打印效果，再按打印鍵后打印。印。返回目錄第三部分第三部分單機(jī)使用單機(jī)使用第一步第一步 設(shè)置儀器設(shè)置儀器1、連接電源、連接電源將儀器電源連接好，（如需打印，則要將專用打印機(jī)連接到儀器的打印接口上。）如圖： 2、儀器設(shè)置儀器設(shè)置 打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)后，按提示進(jìn)入儀器操作主界面。按“設(shè)置”鍵進(jìn)入儀器設(shè)置功能，在“設(shè)

14、置”里可以對(duì)“通道選擇”、“日期”、“打印方式”、“對(duì)照查詢”等進(jìn)行設(shè)置。設(shè)置完成后再按“設(shè)置”鍵退回到主界面。 通道選擇日期設(shè)置第二步第二步 檢測(cè)操作檢測(cè)操作操作步驟操作步驟整個(gè)的操作步驟分為三個(gè)大步驟：調(diào)0、調(diào)100空白對(duì)照樣品分析調(diào)調(diào)0/100 在主界面狀態(tài)下，按0/100鍵，根據(jù)屏幕提示逐一調(diào)1-4通道的0值，再調(diào)1-4通道的100值，最后按“確定”鍵結(jié)束?？瞻讓?duì)照空白對(duì)照注：對(duì)照的時(shí)注：對(duì)照的時(shí)間默認(rèn)為間默認(rèn)為3 3分鐘，分鐘，如需修改，則先要如需修改，則先要在在“設(shè)置設(shè)置”中進(jìn)行中進(jìn)行設(shè)置。設(shè)置。 用小移液槍取用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中酶試劑加入試管中 用小移液槍取用小

15、移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中顯色劑加入試管中 用小移液槍取用小移液槍取0.1ml底物加入試管中底物加入試管中 迅速搖勻并倒入比色皿迅速搖勻并倒入比色皿 放入第一通道的比色池放入第一通道的比色池 按按“對(duì)照對(duì)照”鍵，并選擇鍵，并選擇“新新建建” 等待對(duì)照結(jié)束等待對(duì)照結(jié)束 用大移液槍抽取用大移液槍抽取2.5ml提取液放入試管中提取液放入試管中用天平稱取1克果蔬剪成2cm見(jiàn)方 放入燒杯中，用大移液槍抽取5ml提取液加入到燒杯中 靜置15分鐘 用大移液槍從燒杯中抽取2.5ml浸泡液移至空試管中 用小移液槍取0.1ml酶試劑加入試管中 用小移液槍取0.1ml顯色劑加入試管中靜置15分鐘 用小移液槍

16、取0.1ml底物加入試管中 迅速搖勻并倒入比色皿 放入比色池 按“樣品”鍵 等待檢測(cè)結(jié)果 注：按“樣品”鍵后，四個(gè)通道同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。 第三步第三步 數(shù)據(jù)打印及退出數(shù)據(jù)打印及退出 數(shù)據(jù)打印及退出數(shù)據(jù)打印及退出返回目錄按按“打印打印”鍵鍵 按按“確定確定”鍵鍵 用用/鍵選擇檢鍵選擇檢測(cè)數(shù)據(jù)的編號(hào)測(cè)數(shù)據(jù)的編號(hào) 按按“打印打印”鍵進(jìn)行打印鍵進(jìn)行打印 按按“確定確定”鍵鍵退出打印狀態(tài)退出打印狀態(tài) 第四部分第四部分相關(guān)技巧與常識(shí)相關(guān)技巧與常識(shí)常見(jiàn)問(wèn)題及相關(guān)技巧常見(jiàn)問(wèn)題及相關(guān)技巧1 11.儀器聯(lián)機(jī)操作的情況下，在檢測(cè)過(guò)程中或者開(kāi)始檢測(cè)時(shí)，電腦出現(xiàn)“沒(méi)有檢測(cè)到指定的設(shè)備”，是怎么回事？ 一般來(lái)說(shuō)出現(xiàn)這種提示說(shuō)

17、明您的檢測(cè)儀與電腦硬件連接出現(xiàn)問(wèn)題，檢查的步驟如下： 第一步、確定檢測(cè)軟件的設(shè)備設(shè)置中相關(guān)設(shè)置與硬件連接相匹配； 第二步、電腦串口通訊故障，檢測(cè)方法：重新啟動(dòng)電腦，確認(rèn)是否故障依然存在，如果故障依然存在，檢查下一步； 第三步、更換一下電腦串口，并在檢測(cè)軟件的設(shè)備設(shè)置中進(jìn)行相應(yīng)的改動(dòng)，或者換一臺(tái)電腦，確認(rèn)故障是否存在，如果故障解決，則表明是電腦本身的問(wèn)題，否則可進(jìn)行下一步檢查； 第四步、更換RS232485轉(zhuǎn)換器，確認(rèn)問(wèn)題是否存在,如果故障解決，則表明為RS232485轉(zhuǎn)換器連接不通。常見(jiàn)問(wèn)題及相關(guān)技巧常見(jiàn)問(wèn)題及相關(guān)技巧2 22.儀器聯(lián)機(jī)操作的情況下，調(diào)100時(shí)看不到紅線是怎么回事？ 首先我們要

18、學(xué)會(huì)看圖譜，圖譜的橫坐標(biāo)為時(shí)間，縱坐標(biāo)為投射比，我們所所的調(diào)100準(zhǔn)確的所是指將投射比值調(diào)整為100。 圖譜在沒(méi)有拖拉的情況下，最高只能顯示到100，如果在調(diào)100的過(guò)程中，其投射比值大于100，那樣就看不到紅線了，但圖譜右邊的小白框中有數(shù)字顯示，你只要正常的調(diào)0/100就可以了。 另外，對(duì)于小白框內(nèi)數(shù)字，顯示的是當(dāng)前的投射比值。在做對(duì)照或調(diào)0/100時(shí)，小白框內(nèi)的數(shù)字前有一短紅線，在做樣品時(shí)則為短綠線。大家不要把這個(gè)短線認(rèn)為是負(fù)號(hào)大家不要把這個(gè)短線認(rèn)為是負(fù)號(hào)。常見(jiàn)問(wèn)題及相關(guān)技巧常見(jiàn)問(wèn)題及相關(guān)技巧3 33.如何檢測(cè)儀器的重現(xiàn)性？ 做一空白對(duì)照后，做一個(gè)雙倍量的樣品，然后一分為二做一個(gè)雙倍量的樣品，然后一分為二，先后或同時(shí)做檢測(cè)，即：取2克樣品，加10ml提取液浸泡，然后取5ml檢液，分別加0.2ml的酶、顯色劑，15分鐘后，如果直接加0.2ml底物，然后一分為二在兩個(gè)通道中同時(shí)做檢測(cè)，則是檢查不同通道的重現(xiàn)性；如果15分鐘后先將溶液一分為二，先后加入0.1ml底物做檢測(cè)