蛋白質(zhì)變性與沉淀

1、 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 蛋白質(zhì)變性與沉淀蛋白質(zhì)變性與沉淀一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?1.1.掌握蛋白質(zhì)變性與沉淀掌握蛋白質(zhì)變性與沉淀的原理及各種沉淀方法；的原理及各種沉淀方法； 2.2.熟悉刻度吸量管的正確熟悉刻度吸量管的正確使用；使用； 3.3.了解蛋白質(zhì)變性與沉淀了解蛋白質(zhì)變性與沉淀兩者的關(guān)系。兩者的關(guān)系。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 （一）（一） 蛋白質(zhì)沉淀原理蛋白質(zhì)沉淀原理 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶于水形成溶于水形成穩(wěn)定穩(wěn)定的膠體溶的膠體溶液，維持液，維持蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素：膠體溶液穩(wěn)定因素： 1.1.蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)顆粒表面的顆粒表面的水化膜；水化膜； 2.2.蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)顆粒表面的顆粒表面的電荷

2、。電荷。 去除上述穩(wěn)定因素可使蛋白質(zhì)沉去除上述穩(wěn)定因素可使蛋白質(zhì)沉淀析出淀析出。 蛋白質(zhì)沉淀析出常用的方法有蛋白質(zhì)沉淀析出常用的方法有等電點(diǎn)法、鹽析法、重金屬離子沉等電點(diǎn)法、鹽析法、重金屬離子沉淀法、有機(jī)酸試劑沉淀法、有機(jī)溶淀法、有機(jī)酸試劑沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法等。劑沉淀法等。（二）蛋白質(zhì)變性原理（二）蛋白質(zhì)變性原理 蛋白質(zhì)受某些物理或化學(xué)因蛋白質(zhì)受某些物理或化學(xué)因素的影響，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，素的影響，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，生物活性喪失。稱為蛋白質(zhì)變性。生物活性喪失。稱為蛋白質(zhì)變性。蛋白質(zhì)變性，分可逆；不可逆。蛋白質(zhì)變性，分可逆；不可逆。三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 1.儀器試管、刻度吸量

3、管、洗耳球等。 2.試劑 5蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液、溶液、 2.5蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液、溶液、10ZnSO4溶液、溶液、 o.1mol/LNaOH、 1三氯醋酸、無水乙醇、NaCl（固體）四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟操作步驟1.1.重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)2.2.乙醇沉淀蛋白質(zhì)乙醇沉淀蛋白質(zhì)（一）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（二）（二）操作步驟操作步驟1.1.重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)1 1）實(shí)驗(yàn)原理）實(shí)驗(yàn)原理COO-NH3+POH-H+重金屬離子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-PpH

4、pIpH pI pI，蛋白，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，與質(zhì)分子帶負(fù)電荷，與ZnZn2+2+結(jié)合生成不溶于結(jié)合生成不溶于水的鹽沉淀。水的鹽沉淀。 試管試管2 2中加入酸，其中加入酸，其pH pIpH pI，蛋白，蛋白質(zhì)分子帶正電荷，與三氯醋酸根質(zhì)分子帶正電荷，與三氯醋酸根結(jié)合生結(jié)合生成不溶于水的鹽沉淀。成不溶于水的鹽沉淀。 試管試管3 3中只加有蛋白液和中只加有蛋白液和ZnSOZnSO4 4 蛋白質(zhì)分子因帶較少的正、負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)分子因帶較少的正、負(fù)電荷，與ZnZn2+2+不反應(yīng)。不反應(yīng)。2. 2. 乙醇沉淀蛋白質(zhì)乙醇沉淀蛋白質(zhì) 1 1）實(shí)驗(yàn)原理）實(shí)驗(yàn)原理 乙醇溶解于水，破壞蛋白乙醇溶解于水，破壞蛋

5、白質(zhì)分子的水化膜，加入少量中質(zhì)分子的水化膜，加入少量中性鹽抑制蛋白質(zhì)的解離，使電性鹽抑制蛋白質(zhì)的解離，使電荷減少，沉淀更完全。荷減少，沉淀更完全。2）操作步驟操作步驟試劑（試劑（mL）試管試管1 1試管試管2 22.5%蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液溶液0.5 mL0.5 mL結(jié)晶結(jié)晶NaCl數(shù)粒（適量）數(shù)粒（適量）無水無水乙醇乙醇1mL1mL現(xiàn)象現(xiàn)象3）觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。結(jié)果記錄結(jié)果記錄試劑試劑試管試管1試管試管22.5%蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)溶液溶液0.5 mL0.5 mL結(jié)晶結(jié)晶NaCl數(shù)粒（適數(shù)粒（適量）量）無水乙醇無水乙醇1mL1mL現(xiàn)象現(xiàn)象 沉淀沉淀沉淀充分沉淀充

6、分實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象分析實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象分析 試管試管1 1中加入無水乙醇，破壞蛋白中加入無水乙醇，破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀。質(zhì)分子表面的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀。 試管試管2 2中加入無水乙醇和少量的氯中加入無水乙醇和少量的氯化鈉，不但破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化鈉，不但破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化膜，同時蛋白質(zhì)分子表面的電荷減化膜，同時蛋白質(zhì)分子表面的電荷減少，沉淀更充分。少，沉淀更充分。 五、注意事項(xiàng)五、注意事項(xiàng) 1.1.試劑瓶滴管不能交叉使用，否則試劑瓶滴管不能交叉使用，否則污染試劑。污染試劑。 2.2.刻度吸量管不能交叉使用，否則刻度吸量管不能交叉使用，否則污染試劑，影響反應(yīng)現(xiàn)象。污染試劑，影響反

7、應(yīng)現(xiàn)象。 3. 3. 做完實(shí)驗(yàn)把把試劑按原樣擺放，做完實(shí)驗(yàn)把把試劑按原樣擺放，試管和試管和刻度吸量管沖刻度吸量管沖洗干凈，桌面擦干洗干凈，桌面擦干凈，登記簽名。凈，登記簽名。 4.4.值日生聽老師安排，認(rèn)真打掃，值日生聽老師安排，認(rèn)真打掃，經(jīng)老師批準(zhǔn)才能離開實(shí)驗(yàn)室。經(jīng)老師批準(zhǔn)才能離開實(shí)驗(yàn)室。 六、思考題六、思考題 1.1.臨床搶救重金屬中毒患者，臨床搶救重金屬中毒患者，為什么用雞蛋清或牛奶？為什么用雞蛋清或牛奶？ 2.2.蛋白液中加入適量乙醇，為蛋白液中加入適量乙醇，為什么會產(chǎn)生沉淀？什么會產(chǎn)生沉淀？ 3.3.蛋白液在堿性條件下加入蛋白液在堿性條件下加入ZnSO4 ，為什么會產(chǎn)生沉淀？，為什么會產(chǎn)生沉淀？ 4.4.蛋白液中加入三氯醋酸蛋白液中加入三氯醋酸 ，為，為什么會產(chǎn)生沉淀？什么會產(chǎn)生沉淀？ 下次實(shí)驗(yàn)：下次實(shí)驗(yàn)： P74頁頁 激活劑及抑制劑對酶活性的影響激活劑及抑制劑對酶活性的影響實(shí)驗(yàn)報告明天交，請組長負(fù)起責(zé)實(shí)驗(yàn)報告明天交，請組