醫(yī)院消毒滅菌的效果監(jiān)測07-06-13

1、l 一、前言一、前言：l 1.醫(yī)院消毒是預(yù)防醫(yī)院內(nèi)感染的醫(yī)院消毒是預(yù)防醫(yī)院內(nèi)感染的重要措施之一重要措施之一l 2. 消毒效果的監(jiān)測是評價消毒效果的監(jiān)測是評價l 3.消毒設(shè)備運轉(zhuǎn)是否正常消毒設(shè)備運轉(zhuǎn)是否正常l 4.消毒藥劑是否有效消毒藥劑是否有效l 5.消毒方法是否合理消毒方法是否合理l 6.消毒效果是否達標的唯一手段消毒效果是否達標的唯一手段l 監(jiān)測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，監(jiān)測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，掌握一定的消毒知識；掌握一定的消毒知識；l 熟悉消毒設(shè)備和藥劑性能熟悉消毒設(shè)備和藥劑性能;l 具備熟練的檢驗技能具備熟練的檢驗技能;l 選擇合理的采樣時間選擇合理的采樣時間(消毒后、消毒后、使用前使用前)

2、;l 遵循嚴格的無菌操作。遵循嚴格的無菌操作。l（一（一）壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法l 1 1、化學(xué)監(jiān)測法、化學(xué)監(jiān)測法: :l 化學(xué)指示卡化學(xué)指示卡(管管)監(jiān)測方法監(jiān)測方法l 既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持續(xù)時間續(xù)時間l 化學(xué)指示管化學(xué)指示管(卡卡)放入放入大包和難以消毒大包和難以消毒部位部位的的物品包中央物品包中央l （舊版消毒技術(shù)規(guī)范是放入每一待滅（舊版消毒技術(shù)規(guī)范是放入每一待滅菌的物品包中央）菌的物品包中央）l 化學(xué)指示膠帶監(jiān)測法：化學(xué)指示膠帶監(jiān)測法：l 將化學(xué)指示膠帶粘貼于每將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外一待滅菌物品包外l

3、 對預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅對預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌，每日進行一次菌，每日進行一次B-D試驗。試驗。l 設(shè)計原理設(shè)計原理l a. 使實驗包成為滅菌器內(nèi)殘留空氣使實驗包成為滅菌器內(nèi)殘留空氣的聚焦點，它相對較大的面積和可透氣的聚焦點，它相對較大的面積和可透氣布料易吸附、布料易吸附、“捕捉捕捉”殘留空氣。殘留空氣。l b.真空測試圖上的化學(xué)試劑對殘留真空測試圖上的化學(xué)試劑對殘留空氣具有敏感性。空氣具有敏感性。l 將測試圖置于實驗包中間位將測試圖置于實驗包中間位置；置；l 然后，將實驗包放于滅菌器然后，將實驗包放于滅菌器室內(nèi)排氣口處，關(guān)閉柜門；室內(nèi)排氣口處，關(guān)閉柜門；l 進行進行1345分鐘滅

4、菌處理分鐘滅菌處理完畢，打開柜門，觀察測試結(jié)果。完畢，打開柜門，觀察測試結(jié)果。l 實驗包由實驗包由4650cm8090cm純棉純棉布巾組成，布巾先橫折為三層，再縱折布巾組成，布巾先橫折為三層，再縱折成六層。將折好的布巾一條摞一條至成六層。將折好的布巾一條摞一條至25cm高度。摞放時，各層布巾按折疊側(cè)高度。摞放時，各層布巾按折疊側(cè)左右交替擺好，以使兩側(cè)厚度相等。布左右交替擺好，以使兩側(cè)厚度相等。布巾擺好后，將真空測試圖夾放于中央布巾擺好后，將真空測試圖夾放于中央布巾之間，然后用布包巾包好，外面用化巾之間，然后用布包巾包好，外面用化學(xué)指示膠帶固定好，成為一個實驗包。學(xué)指示膠帶固定好，成為一個實驗包

5、。整個實驗包的大小高約整個實驗包的大小高約25cm，寬約寬約23cm，長約長約27cm，重約重約5kg。l 實驗規(guī)定在實驗規(guī)定在134蒸汽條件下，蒸汽條件下，使用使用3.5分鐘觀察結(jié)果，最長不超分鐘觀察結(jié)果，最長不超4分鐘。分鐘。l 測試圖必須夾放于布包的中測試圖必須夾放于布包的中央層位置。央層位置。l 實驗包放在滅菌器底層，靠實驗包放在滅菌器底層，靠近柜門與排氣口處。近柜門與排氣口處。l 實驗在每天第一次滅菌前空實驗在每天第一次滅菌前空鍋進行。鍋進行。l結(jié)果判斷結(jié)果判斷合格：合格：測試圖變黑且均勻，即中央部測試圖變黑且均勻，即中央部分和邊緣部分顏色一致，表示滅菌分和邊緣部分顏色一致，表示滅菌

6、器抽真空系統(tǒng)良好。器抽真空系統(tǒng)良好。不合格：不合格：測試圖變色不均勻，通常中測試圖變色不均勻，通常中央比邊緣部分顏色淺，表示空氣排央比邊緣部分顏色淺，表示空氣排除不徹底，須檢查、修理后使用除不徹底，須檢查、修理后使用. 指示菌株：指示菌株：指示菌株為耐熱的嗜指示菌株為耐熱的嗜熱脂肪桿菌芽孢熱脂肪桿菌芽孢( (ATCC 7953ATCC 7953或或SSIK 31SSIK 31株株) )，菌片含菌量為，菌片含菌量為5.5.O Ol0l05 5cfu/cfu/片片5.5.O Ol0l06 6cfucfu片，在片，在121121O.5O.5條條件下，件下，D D值（殺滅值（殺滅90%90%微生物所需

7、時間）微生物所需時間）為為1.31.3min1.9minmin1.9min，殺滅時間殺滅時間( (KTKT值值 ) ) 1 91 9 m i nm i n ， 存 活 時 間存 活 時 間 ( ( S TS T 值值 ) ) 為為3.93.9minmin。 培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：試驗用培養(yǎng)基為溴甲酚試驗用培養(yǎng)基為溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。l 將兩個嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片分別將兩個嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標準試驗包中裝入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標準試驗包中心部位。心部位。l 在下排氣壓力蒸汽滅菌柜室內(nèi)，排在下排氣壓力蒸汽滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個標準試驗包

8、氣口上方放置一個標準試驗包( (由由3 3件平件平紋長袖手術(shù)衣，紋長袖手術(shù)衣，4 4塊小手術(shù)巾，塊小手術(shù)巾，2 2塊中手塊中手術(shù)巾，術(shù)巾，1 1塊大毛巾，塊大毛巾，3030塊塊lOcmlOcmlOcmlOcm 8 8層紗布敷料包裹成層紗布敷料包裹成(25(25cmcm30cm30cm30cm30cm大小大小) )。 預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣門上方放置菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣門上方放置一個標準測試包一個標準測試包(由由16條全棉手術(shù)巾條全棉手術(shù)巾4lcm66cm，將每條手術(shù)巾的長邊將每條手術(shù)巾的長邊先折成先折成3層，短邊折成層，短邊折成2層然后疊放，層

9、然后疊放，作成作成23cm23cml5cm大小的測試大小的測試包包) 。l 手提壓力蒸汽滅菌器用通手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒氣貯物盒(22cml3cm6cm)代代替標準試驗包，盒內(nèi)盛滿中試管，替標準試驗包，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只滅指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管內(nèi)菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙試管口用滅菌牛皮紙包封包封)，將貯物盒平放于手提壓，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。力蒸汽滅菌器底部。l 經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌條件下，取出標準試驗包或通氣條件下，取出標準試驗包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入溴甲貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖

10、蛋白胨水培養(yǎng)基中，酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)經(jīng)565611培養(yǎng)培養(yǎng)7 7d(d(自含式生物自含式生物指示物按說明書執(zhí)行指示物按說明書執(zhí)行) )，觀察培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測時設(shè)陰性對照基顏色變化。檢測時設(shè)陰性對照和陽性對照。和陽性對照?？焖贆z測快速檢測(24小時出結(jié)果小時出結(jié)果)l 每個指示菌片接種的溴甲酚紫每個指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格：指示菌片之一接種的溴滅菌合格：指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時，則滅菌過程不合格。為黃色時，則滅菌過程不合格。l 注意事項：注意

11、事項：監(jiān)測所用菌片須經(jīng)監(jiān)測所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認可，并在有效期內(nèi)使用，衛(wèi)生部認可，并在有效期內(nèi)使用，生物指示物監(jiān)測應(yīng)生物指示物監(jiān)測應(yīng)1 1月月1 1次。次。l 1 1、化學(xué)檢測法、化學(xué)檢測法l 檢測方法：檢測方法：將既能指示溫度又將既能指示溫度又能指示溫度持續(xù)時間的化學(xué)指示劑能指示溫度持續(xù)時間的化學(xué)指示劑3 3個個5 5個分別放入待滅菌的物品中，并個分別放入待滅菌的物品中，并置于滅菌器最難達到滅菌的部位。經(jīng)一置于滅菌器最難達到滅菌的部位。經(jīng)一個滅菌周期后，取出化學(xué)指示劑，據(jù)其個滅菌周期后，取出化學(xué)指示劑，據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達到滅菌條顏色及性狀的改變判斷是否達到滅菌條件。件。 l 檢測時

12、，所放置的指示管檢測時，所放置的指示管的顏色及性狀均變至規(guī)定的條件，的顏色及性狀均變至規(guī)定的條件，則判為達到滅菌條件；若其中之則判為達到滅菌條件；若其中之一未達到規(guī)定的條件，則判為未一未達到規(guī)定的條件，則判為未達到滅菌條件。達到滅菌條件。 l 檢測方法：檢測方法：檢測時，將多點溫度檢測時，將多點溫度檢測儀的多個探頭分別放于滅菌器各層檢測儀的多個探頭分別放于滅菌器各層內(nèi)、中、外各點。關(guān)好柜門，將導(dǎo)線引內(nèi)、中、外各點。關(guān)好柜門，將導(dǎo)線引出，由記錄儀中觀察溫度上升與持續(xù)時出，由記錄儀中觀察溫度上升與持續(xù)時間。間。l 結(jié)果判定：結(jié)果判定：若所示溫度若所示溫度(曲線曲線)達達到頂置溫度，則滅菌溫度合格。

13、到頂置溫度，則滅菌溫度合格。 生物檢測法生物檢測法l 指示菌株：指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽枯草桿菌黑色變種芽孢孢 ( ( A T C C 9 3 7 2 )A T C C 9 3 7 2 ) ， 菌 片 含 菌 量 為菌 片 含 菌 量 為5.05.010105 5cfucfu/ /片片5.05.010106 6cfucfu/ /片。其抗片。其抗力要求同上。力要求同上。l 檢測方法：檢測方法：將枯草桿菌芽孢菌片將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入滅菌中試管內(nèi)分別裝入滅菌中試管內(nèi)(1(1片片/ /管管) )。滅菌。滅菌器與每層門把手對角線內(nèi)，外角處放置器與每層門把手對角線內(nèi)，外角處放置2 2個含菌片的試

14、管，試管帽置于試管旁，個含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜門，經(jīng)一個滅菌周期后，待溫度關(guān)好柜門，經(jīng)一個滅菌周期后，待溫度降至降至8080時，加蓋試管帽后取出試管。時，加蓋試管帽后取出試管。 l在無菌條件下在無菌條件下 ，加入普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，加入普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(5(5mlml管管) )，以，以363611培養(yǎng)培養(yǎng)4848h h，觀察初步觀察初步結(jié)果，無菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第七日。結(jié)果，無菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第七日。l 結(jié)果判定結(jié)果判定: :若每個指示菌片接種的肉湯若每個指示菌片接種的肉湯管均澄清，判為滅菌合格，若指示菌片之一管均澄清，判為滅菌合格，若指示菌片之一接種的肉湯管混濁，判為不合

15、格。接種的肉湯管混濁，判為不合格。l對難以判定的肉湯管，取對難以判定的肉湯管，取o o1ml1ml接種于營養(yǎng)接種于營養(yǎng)瓊脂甲板，用滅菌瓊脂甲板，用滅菌L L棒涂勻，放棒涂勻，放363611培培養(yǎng)養(yǎng)4848h h，觀察菌落形態(tài)，并做涂片染色鏡檢，觀察菌落形態(tài)，并做涂片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長，若有指示菌生長，判斷是否有指示菌生長，若有指示菌生長，判為滅菌不合格；若無指示菌生長，判為滅判為滅菌不合格；若無指示菌生長，判為滅菌合格。菌合格。 l 滅菌效果監(jiān)測滅菌效果監(jiān)測l 每次每次滅菌均應(yīng)進行程序監(jiān)測滅菌均應(yīng)進行程序監(jiān)測l 每個每個滅菌物品的外包裝應(yīng)粘貼包外滅菌物品的外包裝應(yīng)粘貼包外化學(xué)指示膠

16、帶，作為滅菌過程的標志；化學(xué)指示膠帶，作為滅菌過程的標志；包內(nèi)放置化學(xué)指示卡，作為滅菌效果的包內(nèi)放置化學(xué)指示卡，作為滅菌效果的參考。參考。l 每月每月應(yīng)做生物監(jiān)測，移植物必須等應(yīng)做生物監(jiān)測，移植物必須等生物監(jiān)測結(jié)果為陰性時方可使用。生物監(jiān)測結(jié)果為陰性時方可使用。 l 一般每月用生物指示物監(jiān)測一次。生物一般每月用生物指示物監(jiān)測一次。生物指示物用枯草桿菌黑色變種芽孢指示物用枯草桿菌黑色變種芽孢( (ATCC9372)ATCC9372)，抗 力 要 求 為 ： 菌 量 在抗 力 要 求 為 ： 菌 量 在 5 5 1 01 05 5c f uc f u 片片5510106 6cfucfu片，在環(huán)氧乙

17、烷劑量為片，在環(huán)氧乙烷劑量為600600mgmgL L30mg/L30mg/L，作用溫度為作用溫度為545422，相對濕，相對濕度為度為60601010條件下，其殺滅條件下，其殺滅9090該微生該微生物的物的D D值為值為2.62.6minmin5.8min5.8min，存活時間應(yīng)存活時間應(yīng)7.87.8minmin，死亡時間應(yīng)死亡時間應(yīng)5858minmin。l 菌量為菌量為5 510103 3cfucfu片片5510104 4cfucfu片。通片。通常做常采用以下數(shù)量的生物指示物較為適宜：常做常采用以下數(shù)量的生物指示物較為適宜：l 滅菌器柜室可用體積小于滅菌器柜室可用體積小于5m3時，至少時，

18、至少放置放置10個菌片；個菌片；l 滅菌器柜室可用體積為滅菌器柜室可用體積為5m3至至10m3時，時，每增加每增加1m3，增加增加1個菌片；個菌片；l 滅菌器柜室可用體積大于滅菌器柜室可用體積大于10m3時，每增時，每增加加2m3，增加增加1個菌片。個菌片。l生物指示物應(yīng)放在那些在性能鑒定時發(fā)現(xiàn)是最生物指示物應(yīng)放在那些在性能鑒定時發(fā)現(xiàn)是最難滅菌的部位，并均勻分布于整個滅菌物品中。難滅菌的部位，并均勻分布于整個滅菌物品中。 每次滅菌都應(yīng)進行滅菌過程監(jiān)測。每次滅菌都應(yīng)進行滅菌過程監(jiān)測。l 檢測所用化學(xué)和微生物指示物必檢測所用化學(xué)和微生物指示物必須經(jīng)衛(wèi)生部批準，并在有效期內(nèi)使用。須經(jīng)衛(wèi)生部批準，并在

19、有效期內(nèi)使用。l 紫外線燈管輻照度值的測定紫外線燈管輻照度值的測定l 1 1、紫外線輻照計測定法：、紫外線輻照計測定法：l 開燈開燈5min后，將測定波長為后，將測定波長為253.7nm的紫外線輻照計探頭置于的紫外線輻照計探頭置于被檢紫外線燈下，待儀表穩(wěn)定后，被檢紫外線燈下，待儀表穩(wěn)定后，讀數(shù)。讀數(shù)。 l 開啟紫外線燈開啟紫外線燈5min后，將指示后，將指示卡置紫外燈下垂直距離卡置紫外燈下垂直距離lm處，有圖處，有圖案一面朝上，照射案一面朝上，照射lmin(紫外線照射紫外線照射后，圖案正中光敏色塊由乳白色變后，圖案正中光敏色塊由乳白色變成不同程度的淡紫色成不同程度的淡紫色)，觀察指示卡，觀察指

20、示卡色塊的顏色，將其與標準色塊比較，色塊的顏色，將其與標準色塊比較，讀出照射強度。讀出照射強度。l 普通普通30w直管型紫外線燈，新燈輻直管型紫外線燈，新燈輻照強度照強度90W/cm2為合格；使用中紫為合格；使用中紫外線燈輻照強度外線燈輻照強度70W/cm2為合格；為合格；30W高強度紫外線新燈的輻照強度高強度紫外線新燈的輻照強度180W/cm2為合格。為合格。l注意：測定時電壓注意：測定時電壓220V5V，溫度溫度2025，相對濕度，相對濕度60%，紫外線，紫外線輻照計必須檢定。指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生許輻照計必須檢定。指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生許可批件?？膳?。l 無菌檢驗是檢查無菌物品是否無菌無菌檢驗是檢

21、查無菌物品是否無菌的一種方法。的一種方法。l 注意：注意：l 1、無菌檢驗應(yīng)在潔凈度為無菌檢驗應(yīng)在潔凈度為100級單級單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行，應(yīng)嚴格遵守?zé)o菌向流空氣區(qū)域內(nèi)進行，應(yīng)嚴格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染；對單向流空氣操作，避免微生物污染；對單向流空氣區(qū)域及工作臺面，必須進行潔凈度驗證。區(qū)域及工作臺面，必須進行潔凈度驗證。l 2、采樣時間在滅菌后，保存有效采樣時間在滅菌后，保存有效期內(nèi)。期內(nèi)。l 洗脫液與培養(yǎng)基無菌性試洗脫液與培養(yǎng)基無菌性試驗：無菌試驗前驗：無菌試驗前3d，于需于需-厭養(yǎng)厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種lml洗脫液，分別置洗脫液，分別置3035與與2

22、025培養(yǎng)培養(yǎng)72h，應(yīng)無菌生應(yīng)無菌生長。長。l 取縫合針、針頭、刀片取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械等小件醫(yī)療器械5件直接浸入件直接浸入6管需管需厭氧培養(yǎng)管厭氧培養(yǎng)管(其中一管其中一管作陽性對照作陽性對照)與與4管霉菌培養(yǎng)管。管霉菌培養(yǎng)管。培養(yǎng)基用量為培養(yǎng)基用量為15ml/管。管。l 取取5付注射器，在付注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)洗脫液中反復(fù)抽吸抽吸5次，洗下管內(nèi)細菌，混和后接種需次，洗下管內(nèi)細菌，混和后接種需-厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管(共共6管，其中管，其中1管作陽性對管作陽性對照照)與霉菌培養(yǎng)管與霉菌培養(yǎng)管(共共4管管)。接種量：。接種量：lml注射器為注射器為0.5ml，2ml注射

23、器為注射器為lml，5ml10ml注射器為注射器為2ml，20ml50ml注射注射器為器為5ml。l 培養(yǎng)基用量：培養(yǎng)基用量：接種量為接種量為2ml以下為以下為15ml/管，接種量管，接種量5ml為為40ml/管。管。l 手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取取2件用沾有無菌洗脫液的棉拭子件用沾有無菌洗脫液的棉拭子反反復(fù)復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無無菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需于需厭氧培養(yǎng)管厭氧培養(yǎng)管(共共6管，其中管，其中1管管作陽性對照作陽性對照)與霉菌培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基(共共4管管)。接種量為接種量為1ml/管

24、，培養(yǎng)基用量為管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。管。l 將需將需厭氧培養(yǎng)管以及陽性與陰性厭氧培養(yǎng)管以及陽性與陰性對照管均于對照管均于3035培養(yǎng)培養(yǎng)5d，霉菌培霉菌培養(yǎng)管與陰性對照管于養(yǎng)管與陰性對照管于2025培養(yǎng)培養(yǎng)7d，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長。培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長。l 如加入供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或如加入供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀判斷時，可沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀判斷時，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h72h后觀察。后觀察。 （1）送檢時間不得超過送檢時間不得超過6h，若若樣

25、品保存于樣品保存于04，則不得超過，則不得超過24h。 （2）被采樣本表面積被采樣本表面積30m2，設(shè)設(shè)4角及中央角及中央5點，點，4角的布點部位距墻壁角的布點部位距墻壁lm處。處。 l 2、采樣方法：、采樣方法：將普通營養(yǎng)瓊脂平將普通營養(yǎng)瓊脂平板（直徑為板（直徑為9cm）放在室內(nèi)各采樣點處，放在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度為距地面采樣高度為距地面1.5m采樣時將平板蓋采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露打開，扣放于平板旁，暴露5min，蓋好蓋好立即送檢。立即送檢。l 細菌總數(shù)細菌總數(shù)(cfu/m3)=50000N/(AT)l 式中式中A為平板面積為平板面積(cm2);T為平板為平板暴露時間暴露

26、時間(min)；N為平均菌落數(shù)為平均菌落數(shù)(cfu)。 l I類區(qū)域：類區(qū)域：細菌總數(shù)細菌總數(shù)10cfu/m3(或或0.2cfu/平板平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；溶血性鏈球菌為消毒合格；l 類區(qū)域：類區(qū)域：細菌總數(shù)細菌總數(shù)200cfu/m3(或或4cfu平板平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格：溶血性鏈球菌為消毒合格：l 類區(qū)域：類區(qū)域：細菌總數(shù)細菌總數(shù)500cfu/m3(或或l0cfu平板平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。溶血性鏈球菌為消毒合格。l1、在消毒處

27、理后、操作前進在消毒處理后、操作前進行采樣。行采樣。l2、采樣前，關(guān)好門、窗，在采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動的情況下，靜止無人走動的情況下，靜止10min進行采樣。進行采樣。 l有效氯含量測定有效氯含量測定 , ,可以用試紙法測定?？梢杂迷嚰埛y定。l 使用方法：使用方法：l 1、消毒劑溶液有效成分濃度在測消毒劑溶液有效成分濃度在測定范圍內(nèi)時，取試紙浸于消毒液中，即定范圍內(nèi)時，取試紙浸于消毒液中，即刻取出，半分鐘內(nèi)在自然光下與標準色刻取出，半分鐘內(nèi)在自然光下與標準色塊比較，讀值。塊比較，讀值。l 2、消毒液濃度高于試紙測定范圍消毒液濃度高于試紙測定范圍時，可先稀釋消毒劑，再測定。時，可先稀釋

28、消毒劑，再測定。l注意：試紙浸濕后時間超過注意：試紙浸濕后時間超過1分鐘，顏分鐘，顏色逐漸消退，結(jié)果不準確。色逐漸消退，結(jié)果不準確。戊二醛濃度測定戊二醛濃度測定l 試紙法：試紙法：1、從小瓶中取出一條；從小瓶中取出一條；2 2、將指示色塊完全浸沒于戊二醛溶液，將指示色塊完全浸沒于戊二醛溶液，一秒內(nèi)取出；一秒內(nèi)取出；3 3、沾下瓶蓋上的紙墊，去除多余的液體；沾下瓶蓋上的紙墊，去除多余的液體；4 4、橫置于瓶蓋上，注意不要將色塊面朝橫置于瓶蓋上，注意不要將色塊面朝下以免受到污染；下以免受到污染；5 5、等候等候5858分鐘判讀結(jié)果。分鐘判讀結(jié)果。l 1 1、涂抹法：、涂抹法：用無菌吸管吸取消毒用無

29、菌吸管吸取消毒液液1.0ml，加入加入9.0ml含有相應(yīng)中和劑的含有相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無菌吸管吸取上述溶采樣管內(nèi)混勻，用無菌吸管吸取上述溶液液0.2ml，滴于干燥普通瓊脂平板，每滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時做份樣品同時做2個平行樣，一平板置個平行樣，一平板置20培養(yǎng)培養(yǎng)7d，觀察霉菌生長情況，另一觀察霉菌生長情況，另一個平板置個平板置35溫箱培養(yǎng)溫箱培養(yǎng)72h記數(shù)菌落數(shù)，記數(shù)菌落數(shù)，同時按十五的原則檢測致病菌。同時按十五的原則檢測致病菌。l 消毒液染菌量消毒液染菌量(cfu/ml)=每個平板上的每個平板上的菌落數(shù)菌落數(shù)50 2 2、傾注法、傾注法l 用無菌吸管吸取消毒液用無菌吸

30、管吸取消毒液1.Oml，加入加入到到9.0ml含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水采含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取樣管中混勻，分別取0.5ml放入放入2只滅菌平只滅菌平皿內(nèi)，加入已熔化的皿內(nèi)，加入已熔化的4548的營養(yǎng)瓊的營養(yǎng)瓊脂脂15ml18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置固，一平板置20培養(yǎng)培養(yǎng)7d，觀察霉菌生長觀察霉菌生長情況；另一個平板置情況；另一個平板置361培養(yǎng)培養(yǎng)72h，計數(shù)菌落數(shù)，同時按十五的原則檢測致病計數(shù)菌落數(shù)，同時按十五的原則檢測致病菌。菌。l 消毒液染菌量消毒液染菌量(cfu/ml)=每個平板上的每個平板上的菌落數(shù)菌落數(shù)20l 消毒液

31、染菌量消毒液染菌量100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。并未檢出致病菌為合格。l 采樣后采樣后1h內(nèi)檢測。內(nèi)檢測。 l 采樣時間：采樣時間：在消毒后、使用在消毒后、使用前進行采樣。前進行采樣。l 采樣方法：采樣方法：將將2.0cm2.5cm無菌濾紙片于無菌洗脫液中浸濕均無菌濾紙片于無菌洗脫液中浸濕均勻，貼在食具表面，經(jīng)勻，貼在食具表面，經(jīng)5min取下，取下，每每10張濾紙合為一份樣本張濾紙合為一份樣本(相當于相當于50cm2采樣面積采樣面積)，投入含，投入含50m1生理生理鹽水的鹽水的lOOml三角燒瓶中，于三角燒瓶中，于4h內(nèi)內(nèi)送檢。送檢。 l 紡 織 品 ： 細 菌 總 數(shù)紡 織 品

32、： 細 菌 總 數(shù)5cfu/cm2，大腸菌群末檢出。大腸菌群末檢出。l 餐具若用化學(xué)消毒劑消毒，餐具若用化學(xué)消毒劑消毒，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。 l 采樣時間：采樣時間：在消毒后、使用前進在消毒后、使用前進行采樣。行采樣。l 采樣方法：采樣方法：便器、尿壺等容器可便器、尿壺等容器可用沾有含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的用沾有含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水的棉拭子，反復(fù)涂擦容器的內(nèi)表面及內(nèi)口棉拭子，反復(fù)涂擦容器的內(nèi)表面及內(nèi)口處，剪占手接觸部位后，將棉拭子投入處，剪占手接觸部位后，將棉拭子投入5ml無菌生理鹽水試管中，立即送檢。無菌生理鹽水試管中，立即送檢。l 拖把、抹布等物品可用無菌的方法剪拖把、抹布等物品可用無菌的方法剪取取lcm3cm，直接投入直接投入5ml含相應(yīng)中和含相應(yīng)中和劑的無菌生理鹽水中，立即送檢。劑的無菌生理鹽水中，立即送檢。 l未檢出致病菌為消毒合格。未檢出致病菌