生化試驗論文

1、探究 牛奶中的物質并測定其含量姓名：方娜 學號：2021314003 學院：生命科學學院 專業(yè)：食品科學與工程 地址：山西大學 指導老師：李晨摘要：牛奶中含有各類活性物質，例如：水、脂類、蛋白質、乳糖等。各類物質的含量不一，利用不同的方法可以測定出不同物質的含量。此次試驗要論述的就是牛奶中水分、脂類、酪蛋白、乳糖的含量的測定，并且觀察乳糖的糖脎和葡萄糖的糖脎的不同形態(tài)。關鍵詞：牛奶；水；脂類；酪蛋白；乳糖；糖脎引言：通過本次試驗學習和掌握牛奶中水分測定的方法，學習和掌握用索式提取器提取脂肪的原理和方法，學習從牛奶中制備酪蛋白的原理和方法，學習和掌握牛奶中乳糖別離的方法，觀察糖脎的形狀。Abst

2、ract: milk contains various active substances, such as: water, lipids, casein, lactose. Various substances differ, using different methods can determine different substance content. This test is about water, milk, casein, lactose lipid content determination, and to observe the lactose osazone and gl

3、ucose osazone form different.Key words: milk, water, fat, casein , lactose, osazoneIntroduction: through the experiment study and master the methods of moisture determination in milk, learn and master the Soxhlet extractor for extracting fatty principle and method, learning the preparation of casein

4、 from milk principle and method, to learn and master the lactose in milk separation method, observation of osazone formation.材料: 1.設備 層析濾紙、烘箱枯燥器、分析天平、索式提取器、恒溫水浴鍋、試管、過濾裝置、抽濾裝置布氏漏斗、離心管50ml、離心機、小燒杯2.試劑 蒙牛純牛奶、無水乙醚、無水乙醇、醋酸醋酸鈉緩沖溶液0.2mol/l pH4.7 乙醇：乙醚1：1混合液、pH7的緩沖溶液如H3PO4緩沖液、50微克/毫升牛血清蛋白、50微克/毫升酵母核酸、50微克/毫

5、升牛血清蛋白和50微克/毫升酵母核酸的混合物內容方法：1、牛奶中水分及粗脂含量的測定1.1試驗目的 學習和掌握牛奶中水分含量的測定的方法 學習和掌握用索式提取器提取脂肪的原理和方法1.2試驗原理粗脂肪是脂肪游離脂酸、蠟磷脂、固醇及色素等脂溶性物質的總稱。索式提取器是一回流裝置，由浸提管、小燒瓶及冷凝管組成。浸提管兩側分別有虹吸管及通氣管。含有樣品的濾紙包放在浸提管內，試劑盛于小燒瓶中，加熱后，試劑蒸汽經通氣管至冷凝管，經冷凝后滴入浸提管浸提樣品，浸提液不斷積生，至發(fā)生虹吸，溶于浸提液的樣品一起流入小燒瓶。如此反復提取回流，可將樣品中的粗脂肪提盡，帶入小燒瓶，可通過小燒瓶質量的增加或濾紙包質量的

6、減少來測定粗脂的含量。1.3試驗方法水分的測定取一張烘干至恒重的層析濾紙，稱重為m濾紙，向濾紙上滴加新鮮的牛奶約4g，記下m牛奶，放入70烘箱，烘干后，稱濾紙與牛奶干物質的質量，記為m前=m紙+干物質那么 m水=m濾+m牛奶-m濾+干物質。1.3.2粗脂提取與測量 將洗凈的索式提取器烘干，連接，向小燒瓶中倒入1/22/3的體積的石油醚，將有干物質的層析濾紙用普通濾紙包好注意高度不要超過虹吸管放入浸提管，水浴鍋加熱回流24小時，控制水浴鍋的溫度，以每小時回流35次為宜，。提取完畢，石油醚完全流入小燒瓶后，取出濾紙包，晾至無石油醚味后放置70度烘箱烘20分鐘稱量提取后濾紙與干物質質量，記為m后。那

7、么m粗脂=m前-m后2、牛奶中酪蛋白的制備2.1實驗目的學習從牛奶中制備酪蛋白的原理及方法。2.2實驗原理蛋白質是由氨基酸構成的高分子化合物。蛋白質同氨基酸一樣是兩性電解質，調節(jié)蛋白質溶液的pH值可使蛋白質分子所帶的正負電荷數目相等，即溶液中的蛋白質以兼性離子形式存在，在外加電場中既不向陰極也不向陽極移動。這時溶液的pH值稱為該蛋白質的等電點。牛奶中主要的蛋白質是酪蛋白，含量約為35g/L，酪蛋白是一些含磷蛋白質的混合物等電點為4.7，利用pI時溶解度最低的原理將牛奶的pH調到4.7時酪蛋白就會沉淀出來，用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類后就可得到純的酪蛋白。2.3實驗步驟調pH量取15ml牛奶于50

8、ml小燒杯中40度水浴在攪拌下參加預熱至40度的醋酸緩沖液15ml，此時有絮狀的蛋白質沉淀析出，室溫放置分層，3000r/min離心15min，得到酪蛋白粗品，上清留作糖脎制備。水洗用蒸餾水洗滌粗品三次，分別離心10min，得到沉淀蛋白。去脂將粗制品參加10ml無水乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉入布氏漏斗中，抽干，用乙醚：乙醇=1:1的溶液洗滌沉淀2次，用乙醚洗滌沉淀2次，抽干待完全風干后稱量，計算酪蛋白含量g/100ml并和理論含量3.5g/100ml,作比擬計算實際得率。提取量g/100ml=酪蛋白g/15ml×100ml得率%=提取量/理論含量×100%3、牛奶中乳糖

9、的別離及糖脎的制備將上試驗中上清參加CaCO3粉末，倒入蒸發(fā)皿煮沸，趁熱過濾，濾液濃縮至5ml，取0.5ml做糖脎反響，剩余回收，回收的乳糖溶液加20ml乙醇，封口，4度放置12天，收集結晶，洗滌晾干后，稱重，計算得率。乳糖鑒定：糖脎反響:去兩個小試管，分別加0.5ml葡萄糖溶液和乳糖溶液，再參加1ml鹽酸苯肼溶液，煮沸2030min，冷卻后，于顯微鏡下觀察糖脎晶體。結果與分析：1牛奶中水分含量：=3.1944g=2.5517g m前=m紙+干物質=2.9800g m后=2.7879g 2.牛奶中酪蛋白的提取率與得率：提取量g/100ml= 得率%=圖2 葡萄糖結晶圖1 糖脎結晶3.糖脎： 討論：由于在進行酪蛋白提取時沒有對脂質進行去除，導致粗提的酪蛋白中含有粗脂使得實驗中測得的酪蛋白含量偏大，最終導致計算的得率大于100%參考文獻：1.國家精品課程配套教材 生物化學實驗第四版 2. 日 菅原潔副島正美著，張旭譯； 蛋白質的定量法第2版；農業(yè)出版社；1981.9：