血型檢查方法學(xué)評價及其質(zhì)量控制

1、血型檢查方法學(xué)評價及其質(zhì)量控制血型概述血型概述主要內(nèi)容主要內(nèi)容l ABO血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)lABOABO血型系統(tǒng)抗原血型系統(tǒng)抗原lABOABO血型系統(tǒng)抗體血型系統(tǒng)抗體lABOABO血型系統(tǒng)亞型血型系統(tǒng)亞型l ABO血型鑒定血型鑒定 l檢測原理檢測原理l鑒定方法鑒定方法l方法學(xué)評價方法學(xué)評價l質(zhì)量控制質(zhì)量控制l RH血型系統(tǒng)血型系統(tǒng)lRHRH血型系統(tǒng)抗原血型系統(tǒng)抗原lRHRH血型系統(tǒng)抗體血型系統(tǒng)抗體l RH血型鑒定血型鑒定 l檢測原理檢測原理l鑒定方法鑒定方法l方法學(xué)評價方法學(xué)評價l質(zhì)量控制質(zhì)量控制ABO血型系統(tǒng)抗體血型系統(tǒng)抗體l 分為天然抗體和免疫性抗體分為天然抗體和免疫性抗體l 天然抗體主要為

2、天然抗體主要為IgMIgM型型免疫球蛋白免疫球蛋白l 免疫性抗體則來自母嬰血型不合的妊娠或血型不合免疫性抗體則來自母嬰血型不合的妊娠或血型不合的輸血，通常是來自母體的的輸血，通常是來自母體的IgGIgG型型免疫球蛋白。免疫球蛋白。ABO血型系統(tǒng)抗體血型系統(tǒng)抗體兩種抗體的比較兩種抗體的比較特性特性IgMIgM型型IgGIgG型型分子量（kD）1000160耐熱性（70）破壞穩(wěn)定與紅細胞結(jié)合最適溫度（）4-2537與紅細胞反應(yīng)介質(zhì)生理鹽水酶處理或清蛋白溶液被血型物質(zhì)中和能不能通過胎盤不能能ABO血型系統(tǒng)亞型血型系統(tǒng)亞型l A抗原的主要亞型有抗原的主要亞型有A1和和A2，均能與抗，均能與抗A血清發(fā)生

3、血清發(fā)生直接凝集反應(yīng)。直接凝集反應(yīng)。l AB血型中也存在相應(yīng)的血型中也存在相應(yīng)的A1 B和和A2 B亞型。亞型。l B亞型較少見，且抗原性弱，故臨床意義不大。亞型較少見，且抗原性弱，故臨床意義不大。ABO血型檢測原理血型檢測原理l 血型抗原與相應(yīng)抗體在反應(yīng)介質(zhì)中形成紅細胞和相血型抗原與相應(yīng)抗體在反應(yīng)介質(zhì)中形成紅細胞和相應(yīng)血型抗體結(jié)合的免疫復(fù)合物，出現(xiàn)肉眼可見的凝應(yīng)血型抗體結(jié)合的免疫復(fù)合物，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。集現(xiàn)象。l 正向定型（正向定型（direct typingdirect typing）l 反向定型（反向定型（indirect typingindirect typing）鑒定方法鑒定

4、方法l 血凝試驗血凝試驗 玻片法玻片法 試管法試管法l 全自動微板法全自動微板法 l 流式細胞技術(shù)流式細胞技術(shù)l 酶聯(lián)免疫吸附試驗酶聯(lián)免疫吸附試驗l 微柱凝膠試驗微柱凝膠試驗鑒定方法鑒定方法l 鹽水凝集法（鹽水凝集法（salt medium test）鑒定方法鑒定方法正定型，玻片法正定型，玻片法鑒定方法鑒定方法玻片法評價玻片法評價l 它是目前臨床常用的血型鑒定的初篩試驗方法。它是目前臨床常用的血型鑒定的初篩試驗方法。l 具有操作簡便，節(jié)省材料的優(yōu)點。具有操作簡便，節(jié)省材料的優(yōu)點。l 但弱凝集反應(yīng)需要借助顯微鏡觀察確定。但弱凝集反應(yīng)需要借助顯微鏡觀察確定。鑒定方法鑒定方法反定型，試管法反定型，試

5、管法鑒定方法鑒定方法試管法評價試管法評價優(yōu)點優(yōu)點l 試管法是交叉配血試驗中最基礎(chǔ)的試驗方法之一。試管法是交叉配血試驗中最基礎(chǔ)的試驗方法之一。l 與玻片法原理相同，但是借助試管更大的反應(yīng)空間，與玻片法原理相同，但是借助試管更大的反應(yīng)空間，并對待測紅細胞予以一定的濃度的稀釋或者加入更并對待測紅細胞予以一定的濃度的稀釋或者加入更多的待測紅細胞，通過低速離心后可根據(jù)有無肉眼多的待測紅細胞，通過低速離心后可根據(jù)有無肉眼可見凝集反應(yīng)來判斷結(jié)果?？梢娔磻?yīng)來判斷結(jié)果。l 由于待測紅細胞經(jīng)過稀釋，在一定程度上減少了血由于待測紅細胞經(jīng)過稀釋，在一定程度上減少了血液中非特異性抗體的濃度，從而提高了試驗的敏感液中

6、非特異性抗體的濃度，從而提高了試驗的敏感性。比玻片法更具有準確可靠的優(yōu)點。性。比玻片法更具有準確可靠的優(yōu)點。鑒定方法鑒定方法試管法評價試管法評價缺點缺點l 只能檢測出完全抗體（抗只能檢測出完全抗體（抗A、抗、抗B）引起的血型不）引起的血型不合，對免疫性抗體引起的血型不合不能檢出，有輸合，對免疫性抗體引起的血型不合不能檢出，有輸血史或不明輸血史及妊娠史不能用該法。血史或不明輸血史及妊娠史不能用該法。l 本實驗中的生理鹽水對血清（漿）中的抗體有稀釋本實驗中的生理鹽水對血清（漿）中的抗體有稀釋作用，易導(dǎo)致配血結(jié)果假陰性。作用，易導(dǎo)致配血結(jié)果假陰性。l 易受冷凝集素的干擾。易受冷凝集素的干擾。方法學(xué)評

7、價方法學(xué)評價鹽水凝集法鹽水凝集法 l 操作簡便，無需特殊儀器。操作簡便，無需特殊儀器。l 玻片法：無需離心，適用于血型普查。但反應(yīng)時間長，玻片法：無需離心，適用于血型普查。但反應(yīng)時間長，靈敏度差，凝集較弱時易導(dǎo)致定型錯誤。不適于反向靈敏度差，凝集較弱時易導(dǎo)致定型錯誤。不適于反向定型。定型。l 試管法：用離心法加速反應(yīng)，所需時間短，適于急診試管法：用離心法加速反應(yīng)，所需時間短，適于急診定型。因離心增強紅細胞凝集，可發(fā)現(xiàn)較弱的凝集現(xiàn)定型。因離心增強紅細胞凝集，可發(fā)現(xiàn)較弱的凝集現(xiàn)象，有助于檢出亞型，故為常用血型鑒定方法。象，有助于檢出亞型，故為常用血型鑒定方法。l 只能檢測完全抗體易受冷凝集素干擾只

8、能檢測完全抗體易受冷凝集素干擾鑒定方法鑒定方法l 凝膠微柱法凝膠微柱法鑒定方法鑒定方法l 凝膠微柱法的結(jié)果凝膠微柱法的結(jié)果方法學(xué)評價方法學(xué)評價凝膠微柱法凝膠微柱法l 重復(fù)性好，特異性和靈敏度高，結(jié)果準確。重復(fù)性好，特異性和靈敏度高，結(jié)果準確。l 試劑成本較高，需用離心設(shè)備。試劑成本較高，需用離心設(shè)備。l 根據(jù)不同需要可選用中性凝膠、特異凝膠或抗球蛋根據(jù)不同需要可選用中性凝膠、特異凝膠或抗球蛋白凝膠作為反應(yīng)介質(zhì)。白凝膠作為反應(yīng)介質(zhì)。l 結(jié)果既可肉眼觀察，也可用血型分析儀分析。結(jié)果既可肉眼觀察，也可用血型分析儀分析。鑒定方法鑒定方法l 全自動微板法全自動微板法 標準化加樣、孵育、離心、標準化加樣、

9、孵育、離心、懸浮、靜止懸浮、靜止 反應(yīng)前后反應(yīng)前后吸光度值增加吸光度值增加數(shù)數(shù)值的計算值的計算 對血型進行正定型與反定對血型進行正定型與反定型型方法學(xué)評價方法學(xué)評價全自動微板法全自動微板法l 此法正反定型試驗，準確率高，且能提高檢測靈敏此法正反定型試驗，準確率高，且能提高檢測靈敏度，使弱凝集樣本更加易顯現(xiàn)。度，使弱凝集樣本更加易顯現(xiàn)。l 快速、準確、自動化程度高等優(yōu)點，適合批量操作?？焖?、準確、自動化程度高等優(yōu)點，適合批量操作。l 血型微量化檢測具有節(jié)約大量昂貴抗血清、縮短檢血型微量化檢測具有節(jié)約大量昂貴抗血清、縮短檢測時間、操作程序簡單等優(yōu)點，目前在各大采供血測時間、操作程序簡單等優(yōu)點，目前

10、在各大采供血機構(gòu)已得到廣泛應(yīng)用。機構(gòu)已得到廣泛應(yīng)用。鑒定方法鑒定方法l 流式細胞技術(shù)流式細胞技術(shù) 稀釋：將待測血樣的紅細胞用生理鹽水稀釋成百分之五稀釋：將待測血樣的紅細胞用生理鹽水稀釋成百分之五的紅細胞懸液。的紅細胞懸液。 標記：分裝各管分別等比加入熒光素標記抗體，避光放標記：分裝各管分別等比加入熒光素標記抗體，避光放置置15min待受檢紅細胞上的待受檢紅細胞上的血型抗原與相應(yīng)熒光標記抗血型抗原與相應(yīng)熒光標記抗體結(jié)合體結(jié)合后，用生理鹽水洗滌離心除去未結(jié)合抗體。后，用生理鹽水洗滌離心除去未結(jié)合抗體。 檢測：重懸后立即用流式細胞儀檢測與熒光標記抗體結(jié)檢測：重懸后立即用流式細胞儀檢測與熒光標記抗體結(jié)

11、合的紅細胞，通過軟件分析，從而得到待測樣本的紅細合的紅細胞，通過軟件分析，從而得到待測樣本的紅細胞血型。胞血型。方法學(xué)評價方法學(xué)評價流式細胞術(shù)流式細胞術(shù)l在細胞分型方面具有速度快、靈敏度高、特異性好，在細胞分型方面具有速度快、靈敏度高、特異性好，檢測結(jié)果準確，重復(fù)性好。檢測結(jié)果準確，重復(fù)性好。l特別適合應(yīng)用于特別適合應(yīng)用于ABO血型亞型的快速鑒定。血型亞型的快速鑒定。l目前有研究指出流式細胞技術(shù)亦可通過分離孕婦血液目前有研究指出流式細胞技術(shù)亦可通過分離孕婦血液中的胎兒紅細胞用于產(chǎn)前非侵入性胎兒血型檢測。中的胎兒紅細胞用于產(chǎn)前非侵入性胎兒血型檢測。質(zhì)量控制質(zhì)量控制1.1.標準血清標準血清 u要求

12、：新鮮，在有效期內(nèi)，效價高，凝集力強，嚴防污要求：新鮮，在有效期內(nèi)，效價高，凝集力強，嚴防污染染u常用的抗血清有：常用的抗血清有：人血清人血清ABOABO血型抗體：穩(wěn)定性高，已滅活補體血型抗體：穩(wěn)定性高，已滅活補體人人ABOABO血型單克隆抗體：穩(wěn)定性較人血清抗體的穩(wěn)定性血型單克隆抗體：穩(wěn)定性較人血清抗體的穩(wěn)定性差差質(zhì)量控制質(zhì)量控制2.2.被檢紅細胞被檢紅細胞 l 標本新鮮，嚴防污染。標本新鮮，嚴防污染。l 某些疾病出現(xiàn)假凝集，可加做自身血清和紅細胞，某些疾病出現(xiàn)假凝集，可加做自身血清和紅細胞，自身紅細胞和生理鹽水對照試驗及結(jié)合反定型結(jié)果自身紅細胞和生理鹽水對照試驗及結(jié)合反定型結(jié)果進行鑒定。進

13、行鑒定。l 當(dāng)疑有血漿成分干擾血型鑒定時可用生理鹽水反復(fù)當(dāng)疑有血漿成分干擾血型鑒定時可用生理鹽水反復(fù)洗滌紅細胞以除干擾。洗滌紅細胞以除干擾。質(zhì)量控制質(zhì)量控制3.3.試驗器材試驗器材 l 器材清潔、干燥、標記清楚。器材清潔、干燥、標記清楚。l 用試管法定型時，應(yīng)同時進行正向和反向定型。須設(shè)置對用試管法定型時，應(yīng)同時進行正向和反向定型。須設(shè)置對照。照。l 紅細胞濃度按要求配置，紅細胞與相應(yīng)抗體的比例適當(dāng)。紅細胞濃度按要求配置，紅細胞與相應(yīng)抗體的比例適當(dāng)。l 反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、離心時間。反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間、離心時間。l 弱弱A A亞型和弱亞型和弱B B亞型，肉眼判斷必同時須用顯微鏡復(fù)查。亞型，肉眼

14、判斷必同時須用顯微鏡復(fù)查。Rh血型系統(tǒng)抗原及抗體血型系統(tǒng)抗原及抗體l RhRh血型系統(tǒng)抗原血型系統(tǒng)抗原l目前已發(fā)現(xiàn)的目前已發(fā)現(xiàn)的RhRh抗原有抗原有4545種，其中與人類關(guān)系最為密切的種，其中與人類關(guān)系最為密切的是是D D、E E、C C、c c、e e五種。五種。lD D抗原的抗原性最強。抗原的抗原性最強。l RhRh血型系統(tǒng)抗體血型系統(tǒng)抗體l絕大多數(shù)絕大多數(shù)RhRh抗體由輸血或妊娠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體由輸血或妊娠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的IgGIgG型免疫性抗體。型免疫性抗體。l主要主要RhRh血型系統(tǒng)抗體有抗血型系統(tǒng)抗體有抗D D、抗、抗E E、抗、抗C C、抗、抗c c、抗、抗e e

15、五種，其五種，其中抗中抗D D最為常見。最為常見。Rh血型檢測方法血型檢測方法l 酶介質(zhì)法酶介質(zhì)法l 聚凝胺試驗聚凝胺試驗（polybrene testpolybrene test）Rh血型檢測方法血型檢測方法l抗球蛋白試驗（抗球蛋白試驗（antiglobulin testantiglobulin test）Rh血型檢測方法血型檢測方法l人源鹽水介質(zhì)抗人源鹽水介質(zhì)抗D D試驗試驗l低離子強度溶液試驗低離子強度溶液試驗方法學(xué)評價方法學(xué)評價 方方 法法 評評 價價酶介質(zhì)法（直接法） 簡單、快速、經(jīng)濟，但靈敏度低。酶介質(zhì)法（間接法） 簡單、經(jīng)濟、靈敏?？设b定抗原和檢測抗體。 但較費時，準確性和穩(wěn)定性

16、較差低離子強度溶液試驗 反應(yīng)時間短，靈敏度高聚凝胺試驗 快速、靈敏、準確性高，應(yīng)用較多抗球蛋白試驗 檢查不完全抗體最可靠方法，但操作復(fù)雜， 費時，試劑較貴。多用于新生兒溶血病的診 斷及因血型不合輸血產(chǎn)生的血型抗體的檢測人源鹽水介質(zhì)抗D試驗 操作簡單，特異性和靈敏度均高，應(yīng)用廣泛， 但試劑昂貴質(zhì)量保證質(zhì)量保證l 檢測前檢測前l(fā)標本處理：標本新鮮，嚴防污染。為避免假陰性，標本處理：標本新鮮，嚴防污染。為避免假陰性，被檢紅細胞要用生理鹽水充分洗滌。被檢紅細胞要用生理鹽水充分洗滌。l試劑和器材：使用有效期內(nèi)的合格試劑。抗血清要試劑和器材：使用有效期內(nèi)的合格試劑?？寡逡咨票４?，防治污染。使用的儀器、

17、器材清潔干燥。妥善保存，防治污染。使用的儀器、器材清潔干燥。質(zhì)量保證質(zhì)量保證l 檢測中檢測中 抗原抗體比例、介質(zhì)濃度抗原抗體比例、介質(zhì)濃度 反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、離心條件反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、離心條件 陰性對照、陽性對照及試劑對照陰性對照、陽性對照及試劑對照 紅細胞上的紅細胞上的Rh抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)形成的抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)形成的凝集較弱凝集較弱，觀察結(jié)果觀察結(jié)果不可用力振搖不可用力振搖 當(dāng)結(jié)果可疑時，須用當(dāng)結(jié)果可疑時，須用顯微鏡觀察確認顯微鏡觀察確認質(zhì)量保證質(zhì)量保證l 檢測后檢測后 復(fù)查實驗全過程，填寫試驗報告，查對無誤后方復(fù)查實驗全過程，填寫試驗報告，查對無誤后方可發(fā)出報告?？砂l(fā)出報告。 標本

18、置標本置4保存保存1周以上，以備復(fù)查。周以上，以備復(fù)查。臨床上血型檢查的質(zhì)量控制臨床上血型檢查的質(zhì)量控制1 1、 醫(yī)務(wù)人員的問題醫(yī)務(wù)人員的問題臨床醫(yī)生臨床醫(yī)生臨床護士抽取血標本時，未校對患者的姓名、床號臨床護士抽取血標本時，未校對患者的姓名、床號檢驗科人員沒有對報告核對正確，造成血型鑒定錯檢驗科人員沒有對報告核對正確，造成血型鑒定錯誤誤臨床上血型檢查的質(zhì)量控制臨床上血型檢查的質(zhì)量控制2 2、 被檢紅細胞被檢紅細胞 血型測定的錯誤血型：檢測時只用肉眼觀察結(jié)果，微弱血型測定的錯誤血型：檢測時只用肉眼觀察結(jié)果，微弱、細小的凝集未看到、細小的凝集未看到 冷凝集素：在支原體肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素：在支原體肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，嚴重干擾血型鑒定。冷凝集素很高，嚴重干擾血型鑒定。 ABOABO亞型：抗原結(jié)構(gòu)和位點數(shù)改變導(dǎo)致的弱表現(xiàn)。亞型：抗原結(jié)構(gòu)和位點數(shù)改變導(dǎo)致的弱表現(xiàn)。 ABOABO血型抗體減弱：當(dāng)獻血者血清中抗