細(xì)胞和顯微技術(shù)學(xué)實(shí)驗(yàn)ppt課件

1、細(xì)胞與顯微技術(shù)學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與顯微技術(shù)學(xué)實(shí)驗(yàn)河南師范大學(xué)河南師范大學(xué)生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一特殊顯微鏡的運(yùn)用及其察看特殊顯微鏡的運(yùn)用及其察看模塊一、細(xì)胞的形狀構(gòu)造模塊一、細(xì)胞的形狀構(gòu)造察看與各種顯微鏡技術(shù)察看與各種顯微鏡技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模阂弧?shí)驗(yàn)?zāi)康模?了解暗視野顯微鏡、相差顯微鏡任務(wù)了解暗視野顯微鏡、相差顯微鏡任務(wù)原理原理2掌握視野顯微鏡、相差顯微鏡和運(yùn)用掌握視野顯微鏡、相差顯微鏡和運(yùn)用方法。方法。 二、實(shí)驗(yàn)用品二、實(shí)驗(yàn)用品 和實(shí)驗(yàn)資料和實(shí)驗(yàn)資料 暗視野顯微鏡、倒置顯微鏡、相差顯微暗視野顯微鏡、倒置顯微鏡、相差顯微鏡、黑紙片、剪刀、圓規(guī)、鏡油、鏡、黑紙片、剪刀、圓規(guī)、

2、鏡油、 口腔黏膜口腔黏膜上皮細(xì)胞、活細(xì)胞暫時(shí)裝片。上皮細(xì)胞、活細(xì)胞暫時(shí)裝片。三、實(shí)驗(yàn)原理與方法三、實(shí)驗(yàn)原理與方法 1、暗視野顯微鏡、暗視野顯微鏡 1.1 原理和構(gòu)造特點(diǎn)原理和構(gòu)造特點(diǎn) 普通光學(xué)顯微鏡的的照明光線直接進(jìn)入視普通光學(xué)顯微鏡的的照明光線直接進(jìn)入視野，視野亮堂野，視野亮堂,活細(xì)胞不經(jīng)染色很難看清細(xì)胞活細(xì)胞不經(jīng)染色很難看清細(xì)胞內(nèi)部構(gòu)造。而暗視野顯微鏡那么利用特殊的聚內(nèi)部構(gòu)造。而暗視野顯微鏡那么利用特殊的聚光器實(shí)現(xiàn)斜射照明，給樣品照明的光不直接穿光器實(shí)現(xiàn)斜射照明，給樣品照明的光不直接穿過(guò)物鏡，而是由樣品反射或折射后再進(jìn)入物鏡過(guò)物鏡，而是由樣品反射或折射后再進(jìn)入物鏡圖圖 2-9，因此，整個(gè)視

3、野是暗的，而樣品，因此，整個(gè)視野是暗的，而樣品是亮堂的。在暗視野顯微鏡中由于樣品與背景是亮堂的。在暗視野顯微鏡中由于樣品與背景之間的反差增大，可以明晰地察看到在明視野之間的反差增大，可以明晰地察看到在明視野顯微鏡中不易看清的活菌體等透明的微小顆粒。顯微鏡中不易看清的活菌體等透明的微小顆粒。暗視野法主要用于察看活細(xì)胞。暗視野法主要用于察看活細(xì)胞。 1.2 制造中央遮光板制造中央遮光板 普通顯微鏡只需聚光器是可以裝配的，支架的普通顯微鏡只需聚光器是可以裝配的，支架的口徑適于安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯口徑適于安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯微鏡。在無(wú)暗視野聚光器時(shí)，可用厚黑紙片制造一微

4、鏡。在無(wú)暗視野聚光器時(shí)，可用厚黑紙片制造一個(gè)中央遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾個(gè)中央遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上，也能得到暗視野效果。光片框上，也能得到暗視野效果。保管好各自制造的中央遮光板，以便在后面的實(shí)驗(yàn)保管好各自制造的中央遮光板，以便在后面的實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用。中運(yùn)用。 1.3 運(yùn)用方法運(yùn)用方法 1把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。 2選用強(qiáng)的光源，但又要防止直射光線進(jìn)入物鏡，所以普通選用強(qiáng)的光源，但又要防止直射光線進(jìn)入物鏡，所以普通用顯微鏡燈照明。用顯微鏡燈照明。 3在聚光器和標(biāo)本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明在聚光

5、器和標(biāo)本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線于聚光鏡上面進(jìn)展全反射，達(dá)不到被檢物體，而得不到暗光線于聚光鏡上面進(jìn)展全反射，達(dá)不到被檢物體，而得不到暗視野照明。視野照明。 4升降集光器，將集光鏡的焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)被檢物體，即以圓錐光升降集光器，將集光鏡的焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)被檢物體，即以圓錐光束的頂點(diǎn)照射被檢物。假設(shè)聚光器能程度挪動(dòng)并附有中心調(diào)理束的頂點(diǎn)照射被檢物。假設(shè)聚光器能程度挪動(dòng)并附有中心調(diào)理安裝，那么應(yīng)首先進(jìn)展中心調(diào)理，使聚光器的光軸與顯微鏡的安裝，那么應(yīng)首先進(jìn)展中心調(diào)理，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)厲位于不斷線上。光軸嚴(yán)厲位于不斷線上。 4升降集光器，將集光鏡的焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)被檢物體，即以圓錐升降集光器，

6、將集光鏡的焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)被檢物體，即以圓錐光束的頂點(diǎn)照射被檢物。假設(shè)聚光器能程度挪動(dòng)并附有中心光束的頂點(diǎn)照射被檢物。假設(shè)聚光器能程度挪動(dòng)并附有中心調(diào)理安裝，那么應(yīng)首先進(jìn)展中心調(diào)理，使聚光器的光軸與顯調(diào)理安裝，那么應(yīng)首先進(jìn)展中心調(diào)理，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴(yán)厲位于不斷線上。微鏡的光軸嚴(yán)厲位于不斷線上。 5選用與聚光器相應(yīng)的物鏡，調(diào)理焦距選用與聚光器相應(yīng)的物鏡，調(diào)理焦距(操作方法與普通操作方法與普通顯微鏡一樣顯微鏡一樣)，找到所需察看的物像。，找到所需察看的物像。 四察看四察看 察看示教臺(tái)上暗視野顯微鏡下的活細(xì)胞。在黑暗察看示教臺(tái)上暗視野顯微鏡下的活細(xì)胞。在黑暗的背景里，可見細(xì)胞、細(xì)胞核和細(xì)胞器的

7、衍射光圖像。的背景里，可見細(xì)胞、細(xì)胞核和細(xì)胞器的衍射光圖像。2、相差顯微鏡、相差顯微鏡 2.1 原理和構(gòu)造特點(diǎn)原理和構(gòu)造特點(diǎn) 光波有振幅亮度、波長(zhǎng)顏色及相位光波有振幅亮度、波長(zhǎng)顏色及相位(指在某一時(shí)指在某一時(shí)間上光的動(dòng)搖所能到達(dá)的位置間上光的動(dòng)搖所能到達(dá)的位置)的不同。當(dāng)光經(jīng)過(guò)物體時(shí)，如的不同。當(dāng)光經(jīng)過(guò)物體時(shí)，如波長(zhǎng)和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才干察看到，這就是普通波長(zhǎng)和振幅發(fā)生變化，人們的眼睛才干察看到，這就是普通顯微鏡下可以察看到染色標(biāo)本的道理。而活細(xì)胞和未經(jīng)染色顯微鏡下可以察看到染色標(biāo)本的道理。而活細(xì)胞和未經(jīng)染色的生物標(biāo)本，因細(xì)胞各部微細(xì)構(gòu)造的折射率和厚度略有不同，的生物標(biāo)本，因細(xì)胞各部微

8、細(xì)構(gòu)造的折射率和厚度略有不同，光波經(jīng)過(guò)時(shí)，波長(zhǎng)和振幅并不發(fā)生變化，僅相位有變化光波經(jīng)過(guò)時(shí)，波長(zhǎng)和振幅并不發(fā)生變化，僅相位有變化(相應(yīng)相應(yīng)發(fā)生的差別即相差發(fā)生的差別即相差)，而這種微小的變化，人眼是無(wú)法加以鑒，而這種微小的變化，人眼是無(wú)法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以察看到。相差顯微鏡可以改動(dòng)別的，故在普通顯微鏡下難以察看到。相差顯微鏡可以改動(dòng)直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉景象，把直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉景象，把相差變成振幅差相差變成振幅差(明暗差明暗差)，同時(shí)它還吸收部分直射光線，以增，同時(shí)它還吸收部分直射光線，以增大其明暗的反差。因此可用以察看活細(xì)胞或未染

9、色標(biāo)本。大其明暗的反差。因此可用以察看活細(xì)胞或未染色標(biāo)本。相差顯微鏡相差顯微鏡(圖圖23)與普通顯微鏡的主要不同之處是：用環(huán)與普通顯微鏡的主要不同之處是：用環(huán)狀光闌替代可變光闌，用帶相板的物鏡狀光闌替代可變光闌，用帶相板的物鏡(通常標(biāo)有通常標(biāo)有PH的標(biāo)志的標(biāo)志)替代普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠(yuǎn)鏡。環(huán)狀光闌是由替代普通物鏡，并帶有一個(gè)合軸用的望遠(yuǎn)鏡。環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔構(gòu)成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同大小不同的環(huán)狀孔構(gòu)成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的。其作用是將直射光所構(gòu)成的像從一些衍射的物鏡相匹配的。其作用是將直射光所構(gòu)成的像從一些衍射旁像中分出來(lái)。相板安裝在物

10、鏡的后焦面處，相板裝有吸收旁像中分出來(lái)。相板安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。調(diào)衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發(fā)生變化的作用。調(diào)軸望遠(yuǎn)鏡是用來(lái)進(jìn)展合鈾調(diào)理的。相差顯微鏡在運(yùn)用時(shí)，聚軸望遠(yuǎn)鏡是用來(lái)進(jìn)展合鈾調(diào)理的。相差顯微鏡在運(yùn)用時(shí)，聚光鏡下面環(huán)光鏡下面環(huán)f狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在不斷線上，狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在不斷線上，必需調(diào)理光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合對(duì)齊，才干發(fā)揚(yáng)相必需調(diào)理光闌的亮環(huán)和相板的環(huán)狀圈重合對(duì)齊，才干發(fā)揚(yáng)相差顯

11、微鏡的效能。否那么直射光或衍射光的光路紊亂，應(yīng)被差顯微鏡的效能。否那么直射光或衍射光的光路紊亂，應(yīng)被吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了相差顯微鏡的作用。相差顯微鏡的作用。 相差顯微鏡的光路相差顯微鏡的光路2.2 運(yùn)用方法運(yùn)用方法 相差安裝為多功能系列顯微鏡中的附屬裝相差安裝為多功能系列顯微鏡中的附屬裝 置與普通顯微鏡配合運(yùn)用。置與普通顯微鏡配合運(yùn)用。1相差安裝的互換安裝相差安裝的互換安裝 卸下普通顯微鏡運(yùn)用的聚光器，將卸下普通顯微鏡運(yùn)用的聚光器，將環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，把綠色濾光片放在上面，它可環(huán)狀光闌裝在聚光器支架上，

12、把綠色濾光片放在上面，它可吸收紅色和藍(lán)色光，使波長(zhǎng)范圍小的單色光線進(jìn)展照明，并吸收紅色和藍(lán)色光，使波長(zhǎng)范圍小的單色光線進(jìn)展照明，并有吸熱作用，能使相差察看獲得良好的效果。再?gòu)霓D(zhuǎn)換器上有吸熱作用，能使相差察看獲得良好的效果。再?gòu)霓D(zhuǎn)換器上旋下普通物鏡，換上相差物鏡。旋下普通物鏡，換上相差物鏡。 2調(diào)焦調(diào)焦 翻開光源，旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤，將翻開光源，旋轉(zhuǎn)集光器轉(zhuǎn)盤，將“o對(duì)準(zhǔn)標(biāo)示孔，對(duì)準(zhǔn)標(biāo)示孔，使普通聚光器部分進(jìn)入光路。先運(yùn)用低倍相差物鏡，按普通使普通聚光器部分進(jìn)入光路。先運(yùn)用低倍相差物鏡，按普通顯微鏡操作方法進(jìn)展對(duì)光和調(diào)焦。顯微鏡操作方法進(jìn)展對(duì)光和調(diào)焦。 旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的旋轉(zhuǎn)環(huán)狀光闌，使光闌的直

13、徑和孔寬與所運(yùn)用的相差物鏡相順應(yīng)，如相差物鏡為直徑和孔寬與所運(yùn)用的相差物鏡相順應(yīng)，如相差物鏡為40 x時(shí)運(yùn)用時(shí)運(yùn)用x40標(biāo)示孔的光闌。標(biāo)示孔的光闌。 3合鈾調(diào)整合鈾調(diào)整 拔出目鏡，插入合鈾望遠(yuǎn)鏡，一邊從望遠(yuǎn)鏡內(nèi)內(nèi)拔出目鏡，插入合鈾望遠(yuǎn)鏡，一邊從望遠(yuǎn)鏡內(nèi)內(nèi)察看，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動(dòng)望遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其下察看，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉(zhuǎn)動(dòng)望遠(yuǎn)鏡內(nèi)筒使其下降，當(dāng)對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的黑環(huán)，此時(shí)可降，當(dāng)對(duì)準(zhǔn)焦點(diǎn)就能看到環(huán)狀光闌的亮環(huán)和相板的黑環(huán)，此時(shí)可將望遠(yuǎn)鏡固定住。再升降集光器并調(diào)理其下的螺旋使亮環(huán)的大小將望遠(yuǎn)鏡固定住。再升降集光器并調(diào)理其下的螺旋使亮環(huán)的大小與黑環(huán)一致

14、，然后左右前后調(diào)理環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)理鈕，使與黑環(huán)一致，然后左右前后調(diào)理環(huán)狀光闌聚光器上的調(diào)理鈕，使兩環(huán)完全重合。合抽調(diào)整終了，抽出望遠(yuǎn)鏡，換回目鏡，按常規(guī)兩環(huán)完全重合。合抽調(diào)整終了，抽出望遠(yuǎn)鏡，換回目鏡，按常規(guī)要領(lǐng)進(jìn)展察看。在改換不同倍率的相差物鏡時(shí)，每一次都要運(yùn)用要領(lǐng)進(jìn)展察看。在改換不同倍率的相差物鏡時(shí)，每一次都要運(yùn)用相匹配的環(huán)狀光闌和重新合抽調(diào)整。相匹配的環(huán)狀光闌和重新合抽調(diào)整。 2.3 察看察看 在相差顯微鏡下察看活細(xì)胞，可清楚地分辨細(xì)胞的形在相差顯微鏡下察看活細(xì)胞，可清楚地分辨細(xì)胞的形狀，細(xì)胞核、核仁以及胞質(zhì)中存在的顆粒狀構(gòu)造。狀，細(xì)胞核、核仁以及胞質(zhì)中存在的顆粒狀構(gòu)造。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)

15、果四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1 1為什么暗視野顯微鏡不可以提高分辨率？為什么暗視野顯微鏡不可以提高分辨率？2 2為什么說(shuō)倒置相差顯微鏡是察看培育活為什么說(shuō)倒置相差顯微鏡是察看培育活細(xì)胞的最有效顯細(xì)胞的最有效顯 微鏡微鏡? ? 3 3繪出繪出3 34 4個(gè)相差顯微鏡下口腔粘膜細(xì)胞個(gè)相差顯微鏡下口腔粘膜細(xì)胞圖。圖。 六、六、 本卷須知本卷須知1 1視場(chǎng)光闌與聚光器的孔徑光闌必需全視場(chǎng)光闌與聚光器的孔徑光闌必需全部開大，而且光源要強(qiáng)。因環(huán)狀光闌遮掉大部開大，而且光源要強(qiáng)。因環(huán)狀光闌遮掉大部分光，物鏡相板上共軛面又吸收大部分光。部分光，物鏡相板上共軛面又吸收大部分光。2 2不同型號(hào)的光學(xué)部

16、件不能互換運(yùn)用。不同型號(hào)的光學(xué)部件不能互換運(yùn)用。3 3載玻片、蓋玻片的厚度應(yīng)遵照規(guī)范，載玻片、蓋玻片的厚度應(yīng)遵照規(guī)范，不能過(guò)薄或過(guò)厚。不能過(guò)薄或過(guò)厚。 實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二熒光顯微鏡的運(yùn)用及其察看熒光顯微鏡的運(yùn)用及其察看模塊一、細(xì)胞的形狀構(gòu)造模塊一、細(xì)胞的形狀構(gòu)造察看與各種顯微鏡技術(shù)察看與各種顯微鏡技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康牧私鉄晒怙@微鏡的構(gòu)造、原理及運(yùn)用方法。了解熒光顯微鏡的構(gòu)造、原理及運(yùn)用方法。 二、熒光顯微鏡的原理：二、熒光顯微鏡的原理： 一些物質(zhì)在遭到人眼所看不到的高能紫外一些物質(zhì)在遭到人眼所看不到的高能紫外線激發(fā)照射時(shí)，會(huì)產(chǎn)生比原激發(fā)波長(zhǎng)較長(zhǎng)的可線激發(fā)照射時(shí)，會(huì)產(chǎn)生比原激發(fā)波長(zhǎng)較長(zhǎng)的可見光

17、。人們把這種光叫做熒光。這種景象叫做見光。人們把這種光叫做熒光。這種景象叫做熒光景象。有兩種熒光景象：一種是受激發(fā)光熒光景象。有兩種熒光景象：一種是受激發(fā)光照射時(shí)，物質(zhì)本身能發(fā)熒光，叫做自體熒光。照射時(shí)，物質(zhì)本身能發(fā)熒光，叫做自體熒光。另一種是物質(zhì)要先經(jīng)過(guò)熒光色素染色，才會(huì)產(chǎn)另一種是物質(zhì)要先經(jīng)過(guò)熒光色素染色，才會(huì)產(chǎn)生熒光景象。這后一種被稱為繼發(fā)熒光，在生生熒光景象。這后一種被稱為繼發(fā)熒光，在生物學(xué)中大部分的丈量都是繼發(fā)熒光。不同的熒物學(xué)中大部分的丈量都是繼發(fā)熒光。不同的熒光物質(zhì)所需求的激發(fā)光的波長(zhǎng)不盡一樣。而且光物質(zhì)所需求的激發(fā)光的波長(zhǎng)不盡一樣。而且受激后所產(chǎn)生的熒光光波也不一樣。受激后所產(chǎn)生

18、的熒光光波也不一樣。 用熒光顯微鏡，可以察看到普通顯微鏡看不見的無(wú)色用熒光顯微鏡，可以察看到普通顯微鏡看不見的無(wú)色透明的組織或細(xì)胞。普通是先將這些標(biāo)本用熒光色素染色，透明的組織或細(xì)胞。普通是先將這些標(biāo)本用熒光色素染色，再將標(biāo)本放在熒光顯微鏡下，用紫外光線照射激發(fā)，使標(biāo)再將標(biāo)本放在熒光顯微鏡下，用紫外光線照射激發(fā)，使標(biāo)本發(fā)出熒光可見光然后經(jīng)過(guò)顯微鏡，察看標(biāo)本的熒光本發(fā)出熒光可見光然后經(jīng)過(guò)顯微鏡，察看標(biāo)本的熒光圖象。由此可見，熒光顯微鏡的光源不是作為照明用的，圖象。由此可見，熒光顯微鏡的光源不是作為照明用的，而是作為激發(fā)光，去激發(fā)熒光色素產(chǎn)生熒光。而是作為激發(fā)光，去激發(fā)熒光色素產(chǎn)生熒光。 三、實(shí)驗(yàn)

19、資料：三、實(shí)驗(yàn)資料： 洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞、大蔥葉肉細(xì)胞洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞、大蔥葉肉細(xì)胞四、實(shí)驗(yàn)方法：四、實(shí)驗(yàn)方法： 1、自發(fā)熒光：、自發(fā)熒光：1取大蔥葉肉細(xì)胞于載片取大蔥葉肉細(xì)胞于載片2加生理鹽水一滴加生理鹽水一滴3加蓋玻片，吸去多余水分加蓋玻片，吸去多余水分4察看察看 2、激發(fā)熒光：、激發(fā)熒光：1取洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞于載取洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞于載片片2加一滴溴化乙錠加一滴溴化乙錠1：1000，染，染1015分鐘分鐘3吸去染液，加生理鹽水一滴吸去染液，加生理鹽水一滴4加蓋玻片，吸去多余水分，察看加蓋玻片，吸去多余水分，察看五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告：五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告：1 1、表達(dá)熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡的區(qū)別、表達(dá)熒光顯微鏡與

20、普通光學(xué)顯微鏡的區(qū)別 ？ 2 2、繪圖示熒光顯微鏡下大蔥葉肉細(xì)胞和洋蔥內(nèi)、繪圖示熒光顯微鏡下大蔥葉肉細(xì)胞和洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞。表皮細(xì)胞。 高倍鏡下葉綠體和線粒體六、本卷須知：六、本卷須知： 1 1、 熒光顯微鏡的運(yùn)用和自我維護(hù)。熒光顯微鏡的運(yùn)用和自我維護(hù)。 2 2、 凡凡DNADNA特異性染料均有較強(qiáng)的致癌性，特異性染料均有較強(qiáng)的致癌性，不與皮膚不與皮膚 直接接觸。萬(wàn)一染液接觸皮膚，須立直接接觸。萬(wàn)一染液接觸皮膚，須立刻用清水洗刻用清水洗 干凈。干凈。 3 3、 實(shí)驗(yàn)臺(tái)的清理。實(shí)驗(yàn)臺(tái)的清理。實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三DNA的的Feulgen染色法染色法模塊二、細(xì)胞化學(xué)技模塊二、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)與免疫熒光染色術(shù)與免疫

21、熒光染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握掌握Feulgen反響的根本原理反響的根本原理二、實(shí)驗(yàn)資料 小鼠的肝細(xì)胞小鼠的肝細(xì)胞 了解了解DNA在細(xì)胞內(nèi)的分布在細(xì)胞內(nèi)的分布三、實(shí)驗(yàn)原理Feulgen反響的根本原理： 稀HCl水解DNA，破壞嘌呤和脫氧核糖間的配糖鍵，并在脫氧核糖C1端構(gòu)成游離的醛基，醛基和Schiff試劑結(jié)合，構(gòu)成紫紅色的化合物。因此在有DNA的部位，就會(huì)呈現(xiàn)除紫紅色陽(yáng)性反響。四、實(shí)驗(yàn)步驟取固定的小鼠肝細(xì)胞，涂片，取固定的小鼠肝細(xì)胞，涂片，450C450C烘烤烘烤30min;30min;復(fù)水復(fù)水1min1min；冷冷1 mol/L 1 mol/L 鹽酸鹽酸(40C )(40C )過(guò)一下過(guò)一下;

22、;1 mol/L 1 mol/L 鹽酸鹽酸 600C 600C 水解水解8-10 min;8-10 min;蒸餾水稍洗；蒸餾水稍洗；置置SchiffSchiff試劑中室溫染色試劑中室溫染色30min30min左右；左右；分色漂洗，亞硫酸鹽溶液洗分色漂洗，亞硫酸鹽溶液洗3 3次，總時(shí)間為次，總時(shí)間為6 min;6 min;自來(lái)水沖洗自來(lái)水沖洗1min1min；顯微鏡察看。顯微鏡察看。五、總結(jié)與思索 簡(jiǎn)述簡(jiǎn)述Feulgen反響的原理。反響的原理。 本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟及本卷須知。本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟及本卷須知。 比較各種方法顯示細(xì)胞核的異同。比較各種方法顯示細(xì)胞核的異同。實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四高碘酸高碘酸-希夫反響

23、希夫反響PAS反響反響模塊二、細(xì)胞化學(xué)技模塊二、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)與免疫熒光染色術(shù)與免疫熒光染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握掌握PAS反響的根本原理反響的根本原理二、實(shí)驗(yàn)資料 小鼠的肝細(xì)胞小鼠的肝細(xì)胞 了解糖類在細(xì)胞內(nèi)的分布了解糖類在細(xì)胞內(nèi)的分布三、實(shí)驗(yàn)原理PAS反響的根本原理：反響的根本原理： 利用強(qiáng)氧化劑使多糖產(chǎn)利用強(qiáng)氧化劑使多糖產(chǎn)生游離的醛基，醛基和生游離的醛基，醛基和Schiff試劑結(jié)合，構(gòu)成紫紅試劑結(jié)合，構(gòu)成紫紅色的化合物。因此在有多色的化合物。因此在有多糖的部位，就會(huì)呈現(xiàn)除紫糖的部位，就會(huì)呈現(xiàn)除紫紅色陽(yáng)性反響。紅色陽(yáng)性反響。四、實(shí)驗(yàn)步驟取固定的小鼠肝細(xì)胞，涂片，取固定的小鼠肝細(xì)胞，涂片，450C4

24、50C烘烤烘烤30min30min；復(fù)水復(fù)水1min1min；氧化，入氧化，入 Lillies Lillies 氧化劑氧化氧化劑氧化10 min10 min；水洗，流水洗水洗，流水洗10 min10 min；蒸餾水稍洗；蒸餾水稍洗；置置SchiffSchiff試劑中室溫染色試劑中室溫染色30min30min左右；左右；分色漂洗，亞硫酸鹽溶液洗分色漂洗，亞硫酸鹽溶液洗3 3次，總時(shí)間為次，總時(shí)間為3 min;3 min;自來(lái)水沖洗自來(lái)水沖洗1min1min；顯微鏡察看。顯微鏡察看。五、總結(jié)與思索 簡(jiǎn)述簡(jiǎn)述PAS反響的原理及意義。反響的原理及意義。 本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟及本卷須知。本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟及本

25、卷須知。 畫出糖類在細(xì)胞中的分布。畫出糖類在細(xì)胞中的分布。實(shí)驗(yàn)五實(shí)驗(yàn)五 RNA顯示方法與制片技術(shù)顯示方法與制片技術(shù)模塊二、細(xì)胞化學(xué)技模塊二、細(xì)胞化學(xué)技術(shù)與免疫熒光染色術(shù)與免疫熒光染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模阂?、?shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)會(huì)顯示學(xué)會(huì)顯示RNARNA的細(xì)胞化學(xué)方法，了解的細(xì)胞化學(xué)方法，了解RNARNA在細(xì)在細(xì)胞內(nèi)分布。胞內(nèi)分布。 二、實(shí)驗(yàn)原理：二、實(shí)驗(yàn)原理： 甲基綠甲基綠哌洛寧對(duì)哌洛寧對(duì)DNADNA和和RNARNA有選擇性有選擇性的染色效果。堿性的甲基綠的染色效果。堿性的甲基綠- -哌洛寧混合染料哌洛寧混合染料處置細(xì)胞后，由于處置細(xì)胞后，由于DNADNA、RNARNA對(duì)染料具有的親和對(duì)染料具有的親和力不

26、同，力不同， 而使這兩種染料對(duì)兩類核酸具有了而使這兩種染料對(duì)兩類核酸具有了選擇性。選擇性。 DNA DNA被甲基綠染成綠色，被甲基綠染成綠色，RNARNA被哌洛被哌洛寧染成紅色，寧染成紅色， 這樣就能使細(xì)胞中兩種核酸分這樣就能使細(xì)胞中兩種核酸分布顯示出來(lái)。布顯示出來(lái)。 三、器材與試劑三、器材與試劑 1、 器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、燒片、培器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、燒片、培育皿、吸管、鑷子、刀片或切片機(jī)、分液漏斗育皿、吸管、鑷子、刀片或切片機(jī)、分液漏斗等等.2、Unna試劑：試劑： 1) 甲基綠的精制：先配制甲基綠的精制：先配制2甲基綠水溶液，甲基綠水溶液，置于分液漏斗置于分液漏斗 中中 ，然后加氯仿洗滌數(shù)次，然后加氯仿洗滌數(shù)次，棄除氯仿，反復(fù)多次直至氯仿層中不顯紫色，棄除氯仿，反復(fù)多次直至氯仿層中不顯紫色，水層備用。水層備用。 2派羅寧的精制：先配制派羅寧的精制：先配制5水溶液，置于分水溶液，置于分液漏斗中，用液漏斗中，用 氯仿洗滌數(shù)次，待氯仿不顯紅色為止，棄除氯仿洗滌數(shù)次，待氯仿不顯紅色為止，棄除氯仿水層備用。氯仿水層備用。 3) 0.2mol/L醋酸緩沖液，醋酸緩沖液，pH4.8 (0.2mol/L醋酸醋酸 40ml+0.2mol/L醋酸醋酸60ml)。 4) 甲基綠甲基綠派羅寧溶液：派羅寧溶液：1ml2甲基綠水溶甲基綠水