劉老師 第三章蛋白質(zhì)化學(xué)ppt課件

1、第三章第三章 蛋白質(zhì)化學(xué)蛋白質(zhì)化學(xué)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)- -英文為英文為“Protein”“Protein”第一重要第一重要第一節(jié)第一節(jié) 蛋白質(zhì)分子的組成成分蛋白質(zhì)分子的組成成分 一、蛋白質(zhì)的元素組成一、蛋白質(zhì)的元素組成二、蛋白質(zhì)的水解二、蛋白質(zhì)的水解三、蛋白質(zhì)的基本單位三、蛋白質(zhì)的基本單位氨基酸氨基酸一、蛋白質(zhì)的元素組成一、蛋白質(zhì)的元素組成主要的：主要的： C H O N S 5055% 68% 2023% 1319% 04% 微量的：微量的： P Fe Cu Zn Mo I Se 大多數(shù)蛋白質(zhì)含氮量較恒定，平均大多數(shù)蛋白質(zhì)含氮量較恒定，平均16%，即即1g氮相當(dāng)于氮相當(dāng)于6.25g蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)。

2、6.25稱為蛋白稱為蛋白質(zhì)系數(shù)。質(zhì)系數(shù)。 每克樣品含氮量每克樣品含氮量6.25100=蛋白質(zhì)含量蛋白質(zhì)含量g%）二、蛋白質(zhì)的水解二、蛋白質(zhì)的水解w1.1.酸水解酸水解 條件：條件：5 51010倍的倍的20%20%的鹽酸煮沸回流的鹽酸煮沸回流16162424小時(shí)，或加壓于小時(shí)，或加壓于120120水解水解2 2小時(shí)。小時(shí)。 優(yōu)點(diǎn)：可蒸發(fā)除去鹽酸，水解徹底，優(yōu)點(diǎn)：可蒸發(fā)除去鹽酸，水解徹底，終產(chǎn)物為終產(chǎn)物為L-L-氨基酸，產(chǎn)物單一，無氨基酸，產(chǎn)物單一，無消旋現(xiàn)象。消旋現(xiàn)象。 缺陷：色氨酸破壞，并產(chǎn)生一種黑色缺陷：色氨酸破壞，并產(chǎn)生一種黑色的物質(zhì)：腐黑質(zhì)，水解液呈黑色。的物質(zhì)：腐黑質(zhì)，水解液呈黑色。

3、二、蛋白質(zhì)的水解二、蛋白質(zhì)的水解w2.2.堿水解堿水解條件：條件：4mol/L Ba(OH)24mol/L Ba(OH)2或或6mol/L 6mol/L NaOHNaOH煮沸煮沸6 6小時(shí)。小時(shí)。優(yōu)點(diǎn)：水解徹底，色氨酸不被破優(yōu)點(diǎn)：水解徹底，色氨酸不被破壞，水解液清亮。壞，水解液清亮。缺陷：產(chǎn)生消旋產(chǎn)物，破壞的氨缺陷：產(chǎn)生消旋產(chǎn)物，破壞的氨基酸多，一般很少使用?；岫啵话愫苌偈褂谩６?、蛋白質(zhì)的水解二、蛋白質(zhì)的水解w3.3.蛋白酶水解蛋白酶水解條件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白條件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶，常溫酶，常溫37374040， pH pH值值5 58 8 。優(yōu)點(diǎn)：氨基酸不被破壞，不發(fā)生

4、消旋優(yōu)點(diǎn)：氨基酸不被破壞，不發(fā)生消旋現(xiàn)象。現(xiàn)象。缺陷：水解不完全，中間產(chǎn)物多。缺陷：水解不完全，中間產(chǎn)物多。 蛋白質(zhì)酸堿水解常用于蛋白質(zhì)的組成分蛋白質(zhì)酸堿水解常用于蛋白質(zhì)的組成分析，而酶水解用于制備蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。析，而酶水解用于制備蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物。 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 月示月示 胨胨 多肽多肽 二肽二肽 氨基酸氨基酸 104 5000 2000 1000500 200 100 蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物：蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物：飽和硫飽和硫酸銨，酸銨，硫酸鋅硫酸鋅沉淀沉淀煮煮沸沸凝固凝固磷鎢酸磷鎢酸等復(fù)鹽等復(fù)鹽沉淀沉淀三、蛋白質(zhì)的基本單位三、蛋白質(zhì)的基本單位氨基酸氨基酸蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)多聚氨基酸多聚氨基酸 如圖如圖什

5、么是氨基酸呢？什么是氨基酸呢？ 牛胰臟核糖核酸酶蛋白分子氨基酸組成w含有氨基的羧酸含有氨基的羧酸氨基酸氨基酸AAAA）w1. 1. 化學(xué)結(jié)構(gòu)化學(xué)結(jié)構(gòu)wR-CH(NH2)-COOHR-CH(NH2)-COOHwR R 代代 表表 氨氨 基基 酸酸 之之 間間 相相 異異 的的 部部 分分 ， 叫叫 R R 基基 (R group) (R group)， 又又 稱稱 為為 側(cè)側(cè) 鏈鏈 (sidechain) (sidechain) 。w無色晶體、溶于水無色晶體、溶于水不帶電形式不帶電形式 H2NCHCOOHR 酪氨酸分子酪氨酸分子 2. 2. 結(jié)構(gòu)通式結(jié)構(gòu)通式w地地 球球 上上 天天 然然 形形

6、成成 的的 氨氨 基基 酸酸 有有 300 300 種種 以以 上上 ， 但但 是是 構(gòu)構(gòu) 成成 蛋蛋 白白 質(zhì)質(zhì) 的的 氨氨 基基 酸酸 只只 有有 22 22 種種 , , 且都是且都是-氨基酸可能還存在更多氨基酸可能還存在更多的）。的）。w提問：什么是提問：什么是-氨基酸？氨基酸？w答：答：-C-C-C-C-COOH-C-C-C-C-COOHw w-C-C-C-C(NH2)-COOH -C-C-C-C(NH2)-COOH -氨基酸氨基酸 w-C-C-C(NH2)- C - COOH -C-C-C(NH2)- C - COOH -氨基酸氨基酸 w-C-C(NH2)- C - C - COO

7、H -C-C(NH2)- C - C - COOH -氨基酸氨基酸一）、構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸一）、構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸1 1、按酸堿性質(zhì)分類：、按酸堿性質(zhì)分類：（1 1酸性氨基酸：一氨基二羧基氨酸性氨基酸：一氨基二羧基氨基酸天冬氨酸、谷氨酸）基酸天冬氨酸、谷氨酸）（2 2堿性氨基酸：二氨基一羧基氨堿性氨基酸：二氨基一羧基氨基酸賴氨酸、精氨酸、組氨酸）基酸賴氨酸、精氨酸、組氨酸）（3 3中性氨基酸：一氨基一羧基氨中性氨基酸：一氨基一羧基氨基酸甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮基酸甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯酸、苯丙

8、氨酸、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸）蘇氨酸）2 2、按側(cè)基、按側(cè)基R R基的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分：基的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分：（1 1脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸（2 2芳香族氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、芳香族氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸酪氨酸（3 3雜環(huán)氨基酸：脯氨酸、組氨酸雜環(huán)氨基酸：脯氨酸、組氨酸3 3、按側(cè)基、按側(cè)基R R基與水的關(guān)系分：基與水的關(guān)系分：（1 1非極性氨基酸：甘氨酸、丙氨酸、非極性氨基酸：甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、

9、色氨酸、酪氨酸、脯氨酸。脯氨酸。（2 2極性不帶電氨基酸：天冬酰胺、谷極性不帶電氨基酸：天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸。氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸。（3 3極性帶電氨基酸：天冬氨酸、谷氨極性帶電氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸。酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸。4 4、按氨基酸是否能在人體內(nèi)合成分：、按氨基酸是否能在人體內(nèi)合成分：（1 1必需氨基酸：指人體內(nèi)不能合成的氨基必需氨基酸：指人體內(nèi)不能合成的氨基酸，必須從食物中攝取，有八種：賴氨酸、酸，必須從食物中攝取，有八種：賴氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮色氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸。氨酸、

10、異亮氨酸、蘇氨酸。（2 2非必需氨基酸：指人體內(nèi)可以合成的氨非必需氨基酸：指人體內(nèi)可以合成的氨基酸。有十種?；?。有十種。（3 3半必需氨基酸：指人體內(nèi)可以合成但合半必需氨基酸：指人體內(nèi)可以合成但合成量不能滿足人體需要特別是嬰幼兒時(shí)期成量不能滿足人體需要特別是嬰幼兒時(shí)期的氨基酸，有兩種：組氨酸、精氨酸。的氨基酸，有兩種：組氨酸、精氨酸。 20種基本氨基酸圖示w構(gòu)構(gòu) 成成 蛋蛋 白白 質(zhì)質(zhì) 的的 前前 二二 十十 種種 氨氨 基基 酸酸 的的 名名 稱稱 、 符符 號(hào)號(hào) 、 化化 學(xué)學(xué) 結(jié)結(jié) 構(gòu)構(gòu) 和和 疏疏 水水 性性 指指 數(shù)數(shù) 。 指指 數(shù)數(shù) 愈愈 正正 表表 示示 疏疏 水水 性性 愈愈

11、 強(qiáng)強(qiáng) 。 天冬氨酸天冬氨酸賴氨酸賴氨酸精氨酸精氨酸組氨酸組氨酸酪氨酸酪氨酸色氨酸色氨酸谷氨酸谷氨酸黑色素、甲亢黑色素、甲亢腦白金腦白金苯丙氨酸苯丙氨酸半胱氨酸半胱氨酸蛋氨酸蛋氨酸絲氨酸絲氨酸蘇氨酸蘇氨酸天冬酰胺天冬酰胺谷氨酰胺谷氨酰胺甘氨酸甘氨酸丙氨酸丙氨酸纈氨酸纈氨酸亮氨酸亮氨酸異亮氨酸異亮氨酸脯氨酸脯氨酸蛋白質(zhì)中不常見的氨基酸蛋白質(zhì)中不常見的氨基酸NHHOCOOH4-羥基脯氨酸H2NCH2CHCH2CH2CHCOOHOHNH25-羥基賴氨酸NH2CH3NHCH2CHCH2CH2CHCOOH6-N-甲基賴氨酸HOIICH2CHCOOHNH23,5-二碘酪氨酸 （二非蛋白氨基酸（二非蛋白氨基

12、酸 鳥氨酸、胍氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸、鳥氨酸、胍氨酸、高半胱氨酸、高絲氨酸、-丙氨酸、丙氨酸、-氨基丁酸等氨基丁酸等第二節(jié)氨基酸的性質(zhì)第二節(jié)氨基酸的性質(zhì)一、氨基酸的光學(xué)活性和光吸收值一、氨基酸的光學(xué)活性和光吸收值二、氨基酸的解離和兩性性質(zhì)二、氨基酸的解離和兩性性質(zhì)三、氨基酸的化學(xué)反應(yīng)三、氨基酸的化學(xué)反應(yīng)一、氨基酸的光學(xué)活性和光吸收值一、氨基酸的光學(xué)活性和光吸收值w構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸除甘氨酸外，均含構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸除甘氨酸外，均含有有-碳原子，在空間各原子有兩種排列碳原子，在空間各原子有兩種排列方式：方式：L-L-構(gòu)型與構(gòu)型與D-D-構(gòu)型，它們的關(guān)系就構(gòu)型，它們的關(guān)系就像左右手的關(guān)系，互為

13、鏡像關(guān)系。像左右手的關(guān)系，互為鏡像關(guān)系。旋光性：除甘氨酸外的氨基酸均有旋光性。旋光性：除甘氨酸外的氨基酸均有旋光性。光吸收：氨基酸在可見光范圍內(nèi)無光吸收，光吸收：氨基酸在可見光范圍內(nèi)無光吸收，在近紫外區(qū)含苯環(huán)氨基酸大在近紫外區(qū)含苯環(huán)氨基酸大鍵有光的吸鍵有光的吸收。蛋白質(zhì)故也具有紫外吸光性，實(shí)驗(yàn)室收。蛋白質(zhì)故也具有紫外吸光性，實(shí)驗(yàn)室利用紫外分光光度儀在利用紫外分光光度儀在280nm280nm處測定蛋白質(zhì)處測定蛋白質(zhì)含量；含量；以以丙丙氨氨酸酸為為例：例：二、氨基酸的解離和兩性性質(zhì)二、氨基酸的解離和兩性性質(zhì) 氨基酸既含有氨基，可接受氨基酸既含有氨基，可接受H+H+，又含有羧基，可電，又含有羧基，可

14、電離出離出H+H+，所以氨基酸具有酸堿兩性性質(zhì)。通常情況下，所以氨基酸具有酸堿兩性性質(zhì)。通常情況下，氨基酸以兩性離子的形式存在，如下圖所示：氨基酸以兩性離子的形式存在，如下圖所示： “ + ” “ “ + ” “ 不帶電不帶電 ” “ ” ” “ ”pIpI等電點(diǎn)時(shí)的等電點(diǎn)時(shí)的pHpH不同氨基酸等電點(diǎn)不同氨基酸等電點(diǎn)pIpI不同不同提問：為什么？提問：為什么？H3NCHCOOHR+酸性溶液中酸性溶液中（pHpHpIpI）H3NCHCOO-R+在晶體狀態(tài)在晶體狀態(tài)或水溶液中或水溶液中即等電點(diǎn)即等電點(diǎn)pIpI）H2NCHCOO-R堿性溶液中堿性溶液中（pHpHpIpI）（-R -R 有電性區(qū)別）有

15、電性區(qū)別） 氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被氨基酸的水溶液既可被酸滴定，又可被堿滴定，所以具有兩性電離的性質(zhì)，現(xiàn)以堿滴定，所以具有兩性電離的性質(zhì)，現(xiàn)以甘氨酸為例來說明氨基酸兩性電離的特點(diǎn)。甘氨酸為例來說明氨基酸兩性電離的特點(diǎn)。甘氨酸的電離酸堿滴定曲線：甘氨酸的電離酸堿滴定曲線：從左向右是用從左向右是用NaOHNaOH滴滴定的曲線，溶液的定的曲線，溶液的pHpH由由小到大逐漸升高；從右小到大逐漸升高；從右向左是用鹽酸滴定的曲向左是用鹽酸滴定的曲線，溶液的線，溶液的pHpH由大到小由大到小逐漸降低。曲線中從左逐漸降低。曲線中從左向右第一個(gè)拐點(diǎn)是氨基向右第一個(gè)拐點(diǎn)是氨基酸羧基解離酸羧基解離50%5

16、0%的狀態(tài)，的狀態(tài)，第二個(gè)拐點(diǎn)是氨基酸的第二個(gè)拐點(diǎn)是氨基酸的等電點(diǎn)，第三個(gè)拐點(diǎn)是等電點(diǎn)，第三個(gè)拐點(diǎn)是氨基酸氨基解離氨基酸氨基解離50%50%的狀的狀態(tài)。態(tài)。 w由氨基酸的滴定曲線，可用下列由氨基酸的滴定曲線，可用下列 Henderson-Hasselbalch Henderson-Hasselbalch 方程求出方程求出各解離基團(tuán)的解離常數(shù)各解離基團(tuán)的解離常數(shù)pKpK）：）： 根據(jù)根據(jù)pKpK可求出氨基酸的等電點(diǎn)，可由其等可求出氨基酸的等電點(diǎn)，可由其等電點(diǎn)左右兩個(gè)電點(diǎn)左右兩個(gè)pKpK值的算術(shù)平均值求出。值的算術(shù)平均值求出。氨基酸等電點(diǎn)的計(jì)算氨基酸等電點(diǎn)的計(jì)算:w中性氨基酸：中性氨基酸：pK1p

17、K1為為-羧基的解離常數(shù)羧基的解離常數(shù), ,pK2pK2為為-氨基的解離常數(shù)。氨基的解離常數(shù)。pI=(pK1 + pK2)/2氨基酸等電點(diǎn)氨基酸等電點(diǎn)PI的計(jì)算的計(jì)算中性氨基酸：PI=1/2pk1+pK2)酸性氨基酸：PI=1/2pk1+pKR)堿性氨基酸：PI=1/2pk2+pKR)w中性氨基酸中性氨基酸pIpI一般為一般為6.06.0w 提問：為什么偏酸性？提問：為什么偏酸性？w 答：答：-COOH-COOH解離程度略大于解離程度略大于-NH2-NH2的得電子能力的得電子能力w提問：酸性氨基酸的提問：酸性氨基酸的pI(pI(更偏酸、更偏酸、更偏堿）？更偏堿）？w 答：更酸答：更酸3.0 3

18、.0 左左 右）右）w 堿堿 性性 氨氨 基基 酸酸pI pI 更更 堿堿7.67.610.7)( 10.7)( 只只 有有 三三 種）種）w 提提 問：問： 大大 多多 數(shù)數(shù) 氨氨 基基 酸酸 在在 中中 性性pH=7pH=7） 時(shí)，時(shí)， 帶帶 電？電？- - 等電點(diǎn)時(shí)的氨基酸等電點(diǎn)時(shí)的氨基酸溶解度溶解度最小，易于沉淀最小，易于沉淀w提問：為什么？提問：為什么？ （較小的同性排斥）（較小的同性排斥）三、氨基酸的化學(xué)反應(yīng)三、氨基酸的化學(xué)反應(yīng)w由由-氨基參加的反應(yīng)：氨基參加的反應(yīng)：(1) (1) 與亞硝酸反應(yīng)：放出氮?dú)?，氮?dú)獾囊慌c亞硝酸反應(yīng)：放出氮?dú)?，氮?dú)獾囊话雭碜园被话雭碜詠喯跛?，在通?/p>

19、半來自氨基氮，一半來自亞硝酸，在通常情況下測定生成的氮?dú)獾捏w積量可計(jì)算氨情況下測定生成的氮?dú)獾捏w積量可計(jì)算氨基酸的量，此反應(yīng)可用于測定蛋白質(zhì)的水基酸的量，此反應(yīng)可用于測定蛋白質(zhì)的水解程度。解程度。（2 2與甲醛的反應(yīng)：氨基酸的甲醛滴定法與甲醛的反應(yīng)：氨基酸的甲醛滴定法 用過量的中性甲醛與氨基酸反應(yīng)，可游離出氫離子，用過量的中性甲醛與氨基酸反應(yīng)，可游離出氫離子，然后用然后用NaOHNaOH滴定，從消耗的堿量可以計(jì)算出氨基酸的含滴定，從消耗的堿量可以計(jì)算出氨基酸的含量。此法稱為間接滴定法。量。此法稱為間接滴定法。RCHCOO-NH3+RCHCOO-NH2+ H+OH-中和滴定中和滴定HCHORCH

20、COO-NHCH2OHHCHORCHCOO-N(CH2OH)2（3 3酰化反應(yīng)：?；磻?yīng)：RCHCOOHNH2RCHCOOH + HCL NHCO RRCOCL與芐基苯甲氧甲酰氯反應(yīng)：與芐基苯甲氧甲酰氯反應(yīng)：COOHCOOH（4 4與與2,4-2,4-二硝基氟苯二硝基氟苯(DNFB)(DNFB)的反應(yīng)：的反應(yīng)：-肽鏈末端分析肽鏈末端分析NO2FO2N+ HNCHCOOHRNO2O2NHNCHCOOHR+ HF弱堿性弱堿性DNP-氨基酸氨基酸（5 5成鹽反應(yīng)：成鹽反應(yīng)：RCHCOOH + HClNH2RCHCOOH NH2HCl（6 6與醛類的反應(yīng)：與醛類的反應(yīng)：西佛堿西佛堿由由-羧基參加的反應(yīng)

21、：羧基參加的反應(yīng)：（1 1成鹽反應(yīng)：成鹽反應(yīng)：AA + 堿堿鹽鹽AA + NaOH 氨基酸鈉鹽氨基酸鈉鹽(重金屬鹽不溶于水重金屬鹽不溶于水)（2 2成酯反應(yīng)：成酯反應(yīng)：RCHCOOH + C2H5OHNH2RCHCOOC2H5NH2 HCl氣 當(dāng)羧基變成乙酯后，羧基的化學(xué)性質(zhì)就當(dāng)羧基變成乙酯后，羧基的化學(xué)性質(zhì)就被掩蔽了，而氨基的化學(xué)性質(zhì)就突出地顯示被掩蔽了，而氨基的化學(xué)性質(zhì)就突出地顯示出來。出來。（3 3酰化反應(yīng)：?；磻?yīng)：YNHCRHCOOH + PCl5?；被狨；被醂NHCRHCOCl?；被Ｂ弱；被Ｂ?使氨基酸的羧基活化，易于另一氨基酸的使氨基酸的羧基活化，易于另一氨基酸的

22、氨基結(jié)合，在合成肽的工作上常用。氨基結(jié)合，在合成肽的工作上常用。（4 4脫羧反應(yīng)：脫羧反應(yīng)：H2NCHRCOOH脫羧酶脫羧酶CO2 + RCH2NH2胺胺-氨基與氨基與-羧基共同參加的反應(yīng)羧基共同參加的反應(yīng) 茚三酮可與脯氨酸、羥脯氨酸生成黃茚三酮可與脯氨酸、羥脯氨酸生成黃色化合物，與其它氨基酸生成藍(lán)紫色化合色化合物，與其它氨基酸生成藍(lán)紫色化合物。物。蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)反應(yīng)名稱反應(yīng)名稱試試 劑劑顏色顏色反應(yīng)有關(guān)基反應(yīng)有關(guān)基團(tuán)團(tuán)有此反應(yīng)的有此反應(yīng)的蛋白質(zhì)或氨蛋白質(zhì)或氨基酸基酸雙 縮 脲 反雙 縮 脲 反應(yīng)應(yīng)N a O H 、CuSO2紫 色 或紫 色 或粉紅色粉紅色二 個(gè) 以 上二

23、個(gè) 以 上肽鍵肽鍵所有蛋所有蛋白質(zhì)白質(zhì)米倫反應(yīng)米倫反應(yīng)H g N O 3 、Hg(NO3)2、HNO3紅色紅色 Tyr黃色反應(yīng)黃色反應(yīng)濃濃 H N O 3H N O 3 及及NH3NH3黃 色 、黃 色 、橘色橘色 T y r 、Phe乙 醛 酸 反乙 醛 酸 反應(yīng)應(yīng)乙醛酸試劑乙醛酸試劑及濃及濃H2SO4H2SO4紫色紫色 Try坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)SakaguchiSakaguchi-萘酚、萘酚、NaClO紅色紅色胍基胍基Arg酚試劑反應(yīng)酚試劑反應(yīng)FolinuFolinu）堿性堿性CuSO4CuSO4及磷鎢酸及磷鎢酸- -鉬酸鉬酸藍(lán)色藍(lán)色酚 基 、 吲酚 基 、 吲哚基哚基Tyr OHN第三節(jié)氨基酸的分離與測定第三節(jié)氨基酸的分離與測定w層析法層析法w電泳法電泳法w氨基酸的顯色反應(yīng)氨基酸的顯色反應(yīng)一、層析法一、層析法 層析法是利用被分離樣品混合物中各組分層析法是利用被分離樣品混合物中各組分的化學(xué)性質(zhì)的差異，使各組分以不同程度分布的化學(xué)性質(zhì)的差異，使各組分以不同程度分布在兩個(gè)相中，這兩個(gè)相一個(gè)為固定相，另一個(gè)在兩個(gè)相中，這兩個(gè)相一個(gè)為固定相，另一個(gè)為流動(dòng)相。當(dāng)流動(dòng)相流進(jìn)固定相時(shí)，由于各組為流動(dòng)相。當(dāng)流動(dòng)相流進(jìn)固定相時(shí)，由于各組分