遺傳實(shí)驗(yàn)03：革蘭氏染色與芽孢染色

1、實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 革蘭氏染色和芽孢染色革蘭氏染色和芽孢染色一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)器材（詳略）三、實(shí)驗(yàn)器材（詳略）四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及思考題五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及思考題實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康娘@微鏡油浸系物鏡的原理和用法顯微鏡油浸系物鏡的原理和用法革蘭氏染色的原理和方法革蘭氏染色的原理和方法芽孢染色的原理和方法芽孢染色的原理和方法d =0.5 n sin：所用光源波長n：玻片與物鏡間介質(zhì)的折射率：光線最大入射角的半數(shù)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理很多原來由于在透鏡及載片表面的反射和折射而損失的很多原來由于在透鏡及載片表面的反射和折射而損失的光線可以進(jìn)入物鏡，使照明亮度提

2、高，改善觀察效果。光線可以進(jìn)入物鏡，使照明亮度提高，改善觀察效果。用浸沒油取代空氣的作用：用浸沒油取代空氣的作用：介質(zhì)折射率提高介質(zhì)折射率提高數(shù)值孔徑值和分辨力均得到提高數(shù)值孔徑值和分辨力均得到提高浸沒油與玻璃的折射率相近浸沒油與玻璃的折射率相近Air:1, water:1.33, oil:1.52, glass:1.54實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理G+：單層：肽聚糖（厚且致密，：單層：肽聚糖（厚且致密，20-80nm）；磷壁酸）；磷壁酸G-：多層：肽聚糖（薄且稀疏，：多層：肽聚糖（薄且稀疏，7-8nm，含脂質(zhì)）；外膜，含脂質(zhì)）；外膜G G+ + 菌菌：G G- - 菌菌實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理核心核心皮層皮層芽

3、孢衣芽孢衣孢外壁孢外壁用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠或用著色力強(qiáng)的染色劑孔雀綠或石炭酸復(fù)紅，在加熱條件下染石炭酸復(fù)紅，在加熱條件下染色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可色，使染料不僅進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料進(jìn)入芽孢內(nèi)，進(jìn)入菌體的染料經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)經(jīng)水洗后被脫色，而芽孢一經(jīng)著色難以被水洗脫，當(dāng)用對比著色難以被水洗脫，當(dāng)用對比度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍度大的復(fù)染劑染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，而菌體和保留初染劑的顏色，而菌體和芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色，芽孢囊被染成復(fù)染劑的顏色，使芽飽和菌體更易于區(qū)分。使芽飽和菌體更易于區(qū)分。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟1. 準(zhǔn)備準(zhǔn)備2. 顯微觀察顯微觀察低

4、倍鏡觀察低倍鏡觀察高倍鏡觀察高倍鏡觀察油鏡觀察油鏡觀察3. 顯微鏡用畢后的處理顯微鏡用畢后的處理實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟革革蘭蘭氏氏染染色色法法 涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定結(jié)晶紫初染結(jié)晶紫初染12min,水洗水洗碘液碘液沖去多余水滴，沖去多余水滴，媒染媒染1 min,水洗水洗水洗水洗沙黃（即番紅）沙黃（即番紅）復(fù)染（復(fù)染（2min）水洗水洗油鏡鏡檢：藍(lán)紫色油鏡鏡檢：藍(lán)紫色 G+；紅色；紅色G-乙醇乙醇快速?zèng)_去多余水滴，快速?zèng)_去多余水滴，脫色（約脫色（約30s左右）左右）芽芽孢孢染染色色法法 涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定 孔雀綠染色（加熱）孔雀綠染色（加熱） 冷卻、水洗冷卻、水洗 番紅復(fù)染番紅復(fù)染 水洗、吸干水洗、吸干鏡檢鏡檢 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟實(shí)驗(yàn)內(nèi)容步驟3、使用油鏡應(yīng)注意哪些問題？5、為什么芽孢染色需要進(jìn)行加熱？能否用簡單染色法觀察到細(xì)菌芽孢？2、繪圖表示枯草芽孢桿菌的形態(tài)，注意芽孢的形狀、位置及芽孢囊的形狀特征。1、繪圖并說明大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的形狀、顏色和革