最新小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬試驗精品課件講課講稿

1、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬試驗原原 理（體外法）理（體外法） 巨噬細(xì)胞具有吞噬異物的功能，將巨噬細(xì)胞與被吞巨噬細(xì)胞具有吞噬異物的功能，將巨噬細(xì)胞與被吞噬物噬物( (雞紅細(xì)胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等雞紅細(xì)胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等) )共同溫共同溫育，染色，在油鏡下計數(shù)吞噬異物的巨噬細(xì)胞的吞噬百育，染色，在油鏡下計數(shù)吞噬異物的巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，以此判斷巨噬細(xì)胞的吞噬功能，從而分率和吞噬指數(shù)，以此判斷巨噬細(xì)胞的吞噬功能，從而評價機體的免疫狀態(tài)。評價機體的免疫狀態(tài)。 本實驗擬檢測小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對白色念珠菌的吞噬本實驗擬檢測小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對白色念珠菌的吞噬功能。功能。（3）吞噬細(xì)胞

2、與菌混合培養(yǎng)）吞噬細(xì)胞與菌混合培養(yǎng) 取巨噬細(xì)胞取巨噬細(xì)胞0.5ml加白色念珠菌懸液加白色念珠菌懸液0.5ml，置，置37溫育溫育30min。 取取1滴混合液置玻片上加蓋玻片，在高倍鏡下觀察滴混合液置玻片上加蓋玻片，在高倍鏡下觀察計數(shù)。計數(shù)。高倍鏡下觀察計算：高倍鏡下觀察計算：吞噬率吞噬率=(吞噬白色念珠菌的巨噬細(xì)胞數(shù)吞噬白色念珠菌的巨噬細(xì)胞數(shù)/100個巨噬個巨噬 細(xì)胞細(xì)胞)100吞噬指數(shù)吞噬指數(shù)=100個巨噬細(xì)胞中吞噬白色念珠菌總數(shù)個巨噬細(xì)胞中吞噬白色念珠菌總數(shù) /100個巨噬細(xì)胞個巨噬細(xì)胞 *(吞噬指數(shù)式中巨噬細(xì)胞為陽性吞噬細(xì)胞吞噬指數(shù)式中巨噬細(xì)胞為陽性吞噬細(xì)胞)注注 意意 事事 項項1、菌

3、與細(xì)胞混合后充分混勻非常重要。對于此實驗，菌、菌與細(xì)胞混合后充分混勻非常重要。對于此實驗，菌與吞噬細(xì)胞之比與吞噬細(xì)胞之比10：1時吞噬作用容易觀察和計數(shù)。但時吞噬作用容易觀察和計數(shù)。但是吞噬效果好，能真正反映實際情況又可被檢測的比是吞噬效果好，能真正反映實際情況又可被檢測的比例為例為1：1。 2、菌和細(xì)胞在搖床中作用的時間不超過、菌和細(xì)胞在搖床中作用的時間不超過30 min，如果在，如果在37 C 條件下作用時間過長，被吞噬的菌很快會被裂解，條件下作用時間過長，被吞噬的菌很快會被裂解，也就不能計數(shù)為吞噬了菌的細(xì)胞。也就不能計數(shù)為吞噬了菌的細(xì)胞。 3、滴片時加入的細(xì)胞數(shù)依細(xì)胞的大小而定，如果使用

4、的、滴片時加入的細(xì)胞數(shù)依細(xì)胞的大小而定，如果使用的吞噬細(xì)胞是細(xì)胞系，細(xì)胞體積較大，那么加入的細(xì)胞吞噬細(xì)胞是細(xì)胞系，細(xì)胞體積較大，那么加入的細(xì)胞數(shù)就相應(yīng)的少一點。數(shù)就相應(yīng)的少一點。血球計數(shù)板計數(shù)法血球計數(shù)板計數(shù)法 血球計數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成，其中央有血球計數(shù)板是由一塊厚玻片特制而成，其中央有兩個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分出兩個計數(shù)室。每個計數(shù)室劃分出9個大方格（見下圖），個大方格（見下圖），每格面積每格面積1mm2，加蓋玻片后的深度為，加蓋玻片后的深度為0.1mm。因此，。因此，每大方格容積為每大方格容積為0.1mm3。 四角的大方格，又分為四角的大方格，又分為16個中方格，適用于白細(xì)個中方格

5、，適用于白細(xì)胞計數(shù)。中央大方格以雙線等分為胞計數(shù)。中央大方格以雙線等分為25個中方格。每個個中方格。每個中方格又分中方格又分16個小方格，通常我們?nèi)∷慕堑膫€小方格，通常我們?nèi)∷慕堑?個中方格個中方格和中間的和中間的1個中方格來計數(shù)紅細(xì)胞。個中方格來計數(shù)紅細(xì)胞。 首先用吸管吸取少許稀釋后的單細(xì)胞懸液，從蓋首先用吸管吸取少許稀釋后的單細(xì)胞懸液，從蓋片端滴一小滴（不宜過多），液體自行向內(nèi)滲入，靜置片端滴一小滴（不宜過多），液體自行向內(nèi)滲入，靜置數(shù)分鐘后，再放在微鏡下觀察計數(shù)。數(shù)分鐘后，再放在微鏡下觀察計數(shù)。 計數(shù)時，若細(xì)胞位于小方格的線上，應(yīng)遵循計數(shù)時，若細(xì)胞位于小方格的線上，應(yīng)遵循“數(shù)數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線”的原則，以減少誤差。的原則，以減少誤差。計數(shù)應(yīng)重復(fù)計數(shù)應(yīng)重復(fù)3次，取其平均值。次，取其平均值。數(shù)完畢后，依下式計算：數(shù)完畢后，依下式計算： 每每1mL白細(xì)胞懸液細(xì)胞數(shù)（白細(xì)胞懸液細(xì)胞數(shù)（4個中方格細(xì)胞總數(shù)個