DNA重組技術的基本工具-

1、大連市二十四中學 生物組定向定向地改造生物的性狀，獲得地改造生物的性狀，獲得人類所需要的品種。人類所需要的品種?？萍继剿髦房萍继剿髦? (閱讀）閱讀）二、技術發(fā)明使基因工程的實施成為可能二、技術發(fā)明使基因工程的實施成為可能一、基礎理論和技術的發(fā)展催生了基因工程一、基礎理論和技術的發(fā)展催生了基因工程工欲善其事，必先利其器！工欲善其事，必先利其器！你認為完成基因工你認為完成基因工程需要哪些工具？程需要哪些工具？分布：分布：主要在原核生物中主要在原核生物中。特點：特點：特異性特異性 識別特定序列識別特定序列（雙鏈（雙鏈DNA分子的某種特定核分子的某種特定核苷酸序列），苷酸序列），切割特定位點切割

2、特定位點（每一條鏈中特定部（每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵）。位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵）。 如如EcoEcoRI,RI,識別識別GAATTCGAATTC序列，并在序列，并在G G和和A A之間切開。之間切開。結果：結果：產生末端產生末端（黏性末端、平末端）（黏性末端、平末端） 一種限制酶只能識別一種特定的核苷一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列，并在特定的切割點上將酸序列，并在特定的切割點上將DNADNA分子切分子切斷。目前已發(fā)現(xiàn)的限制酶有斷。目前已發(fā)現(xiàn)的限制酶有40004000多種。多種。 EcoRI（在（在G與與A之間切割）之間切割）黏性末端黏性末端中軸線中軸線中軸

3、線兩側的雙鏈中軸線兩側的雙鏈DNA的堿基反向對稱的堿基反向對稱 SmaI（在（在G與與C之間切割）之間切割）平末端平末端中軸線中軸線中軸線兩側的雙鏈中軸線兩側的雙鏈DNA的堿基反向對稱的堿基反向對稱（1）種類：）種類：（2）作用部位：）作用部位：兩類兩類Ecoli DNA連接酶連接酶T4 DNA連接酶連接酶 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵 （3）連接黏性末端連接黏性末端連接黏性末端和平末端連接黏性末端和平末端DNA聚合酶和聚合酶和DNA連接酶有何相同連接酶有何相同和不同點？和不同點？相同：相同：DNA連接酶和連接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯鍵。聚合酶都是形成磷酸二酯鍵。不同：不同：（1）DNA聚合酶

4、只能將聚合酶只能將單個核苷酸單個核苷酸加到已有的核酸片加到已有的核酸片段的段的3末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵；而末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩連接酶是在兩個個DNA片段之間片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個核苷酸與形成磷酸二酯鍵，不是在單個核苷酸與DNA片段之間形成磷酸二酯鍵。片段之間形成磷酸二酯鍵。（2）DNA聚合酶是以聚合酶是以一條一條DNA鏈為模板鏈為模板，將單個核苷酸通過，將單個核苷酸通過磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補的DNA鏈；而鏈；而DNA連接酶連接酶是將是將DNA雙鏈上的雙鏈上的兩個缺口同時連接起來兩個缺口同時連接起來。因此。因

5、此DNA連接酶連接酶不需要模板不需要模板。大腸桿菌大腸桿菌DNA 質粒質?？股乜剐曰蚩股乜剐曰?是一種裸露的，結構簡單的，獨立于細菌擬核是一種裸露的，結構簡單的，獨立于細菌擬核DNADNA以以外的具有自我復制能力的小型環(huán)狀雙鏈外的具有自我復制能力的小型環(huán)狀雙鏈DNADNA分子。大小約分子。大小約為數(shù)千堿對。常有為數(shù)千堿對。常有1 - 31 - 3個抗藥性基因，以利于篩選。個抗藥性基因，以利于篩選?；蚬こ讨?，真正被用作載體的質粒，都是基因工程中，真正被用作載體的質粒，都是在天然質粒的基礎上進行過人工改造的。在天然質粒的基礎上進行過人工改造的。為什么細菌中限制酶不剪切細菌本身的DNA？ 細菌中限制酶之所以不切斷自身DNA，是因為微生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，對于外源入侵的DNA可以降解掉。生物在長期演化過程中，含有某種限制酶的細胞，其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識別