蛋白質(zhì)含量的測(cè)定測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法

1、蛋白質(zhì)含量的測(cè)定蛋白質(zhì)含量的測(cè)定掌握蛋白質(zhì)含量測(cè)定的原理和方法掌握蛋白質(zhì)含量測(cè)定的原理和方法學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制熟練使用分光光度計(jì)熟練使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法 測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法較多測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法較多基本上都是根據(jù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生基本上都是根據(jù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性建立起來(lái)的。物學(xué)活性建立起來(lái)的。二、比色法：二、比色法：利用蛋白質(zhì)與不同試劑的呈色反應(yīng)，測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，如雙縮尿法和利用蛋白質(zhì)與不同試劑的呈色反應(yīng)，測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，如雙縮尿法和酚酚試劑法試劑法（lowrylowrys methods method）。）。三、紫外分光

2、光度法：三、紫外分光光度法：利用蛋白質(zhì)對(duì)利用蛋白質(zhì)對(duì)280nm280nm紫外光有最大的吸光度而采用紫外光有最大的吸光度而采用蛋白質(zhì)呈色試劑: 還原型蛋白質(zhì)與酚試劑呈色蛋白質(zhì)與酚試劑呈色深淺深淺與蛋白質(zhì)的與蛋白質(zhì)的含量含量成正比成正比，利用蛋白質(zhì)的濃度與呈，利用蛋白質(zhì)的濃度與呈色的關(guān)系，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，來(lái)測(cè)定樣色的關(guān)系，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，來(lái)測(cè)定樣品中的蛋白質(zhì)含量。品中的蛋白質(zhì)含量。用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白溶用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白溶液（濃度為液（濃度為50mg%50mg%）配成一系列不）配成一系列不同濃度的蛋白質(zhì)溶液。同濃度的蛋白質(zhì)溶液。取七支試管，編號(hào)，按下表操作取七支試管，編號(hào)，按下表操作

3、 混勻混勻) 冷卻后在波長(zhǎng)冷卻后在波長(zhǎng)650nm650nm條件下比色條件下比色, ,測(cè)定其光密度測(cè)定其光密度值。以空白管調(diào)零值。以空白管調(diào)零. .50水浴10分鐘,標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以蛋白質(zhì)的含量（以蛋白質(zhì)的含量（gg）為橫坐標(biāo)，）為橫坐標(biāo)，光密度值（光密度值（ODOD）為縱坐標(biāo)，繪制出蛋）為縱坐標(biāo)，繪制出蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品中的根據(jù)樣品中的OD650, OD650, 從蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)從蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線中找到樣品中蛋白質(zhì)的曲線中找到樣品中蛋白質(zhì)的gg數(shù)。數(shù)。 計(jì)計(jì) 算算 每100ml血清中所含蛋白質(zhì)的克數(shù)為： g%=樣品中蛋白質(zhì)含量（g數(shù)） 1/0.510010-6500注

4、注 意意 事事 項(xiàng)項(xiàng)測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度最好在25100g之間，故血清稀釋倍數(shù)一般為200500。各管加酚試劑應(yīng)快，必須立即混勻，否則就會(huì)出現(xiàn)渾濁。 2、繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線：要求規(guī)范作圖 鉛筆作圖、 橫、縱坐標(biāo)名稱及單位 日期、作者 、曲線名稱 曲線上體現(xiàn)出待測(cè)樣品的OD值及 ug數(shù)。 3、計(jì)算：100ml血清中的蛋白質(zhì)含量。 要求： 寫(xiě)出公式、代入數(shù)據(jù)、寫(xiě)出結(jié)果。1、 原始數(shù)據(jù):各管的OD值 分析實(shí)驗(yàn)誤差產(chǎn)生的原因 總結(jié)該方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)缺點(diǎn)。測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法 測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法較多測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法較多基本上都是根據(jù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生基本上都是根據(jù)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性建立起來(lái)的。物學(xué)活性建立起來(lái)的。注注 意意 事事 項(xiàng)項(xiàng)測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度最好在25100g之間，故血清稀釋倍