食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)

1、第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)概概 述述1 1、食品中微生物檢測的優(yōu)點(diǎn)和發(fā)展趨勢(shì)、食品中微生物檢測的優(yōu)點(diǎn)和發(fā)展趨勢(shì) 檢測食源細(xì)菌的傳統(tǒng)方法通常依賴于其在培養(yǎng)基里的生長檢測食源細(xì)菌的傳統(tǒng)方法通常依賴于其在培養(yǎng)基里的生長, ,即進(jìn)行目標(biāo)菌的分離和生化鑒定即進(jìn)行目標(biāo)菌的分離和生化鑒定, ,有時(shí)進(jìn)行血清學(xué)診斷繁瑣、有時(shí)進(jìn)行血清學(xué)診斷繁瑣、耗時(shí)。耗時(shí)。 隨著分子生物學(xué)和電子技術(shù)的飛速發(fā)展隨著分子生物學(xué)和電子技術(shù)的飛速發(fā)展, ,快速、準(zhǔn)確、特異快速、準(zhǔn)確、特異檢微生物的新技術(shù)、新方法不斷涌現(xiàn)檢微生物的新技術(shù)、新方法不斷涌

2、現(xiàn), ,微生物檢驗(yàn)技術(shù)由培養(yǎng)微生物檢驗(yàn)技術(shù)由培養(yǎng)水平向分子水平邁進(jìn)水平向分子水平邁進(jìn), ,并向儀器化、動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化方向發(fā)展并向儀器化、動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化方向發(fā)展, ,可可大大提高食品微生物檢驗(yàn)工作的高效性、準(zhǔn)確性和可靠性大大提高食品微生物檢驗(yàn)工作的高效性、準(zhǔn)確性和可靠性。 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)概概 述述2 2、食品中微生物檢測的局限性、食品中微生物檢測的局限性 大部分快速方法適用于檢測特定微生物，用于快速篩選大大部分快速方法適用于檢測特定微生物，用于快速篩選大量食品中所存在的特殊病原體。量食品中所存在的特殊病原體。 然而，快速檢方法抗干擾能力弱，所得結(jié)果必須用標(biāo)準(zhǔn)參然而，快速檢方法抗干擾

3、能力弱，所得結(jié)果必須用標(biāo)準(zhǔn)參考方法予以證實(shí)。考方法予以證實(shí)。 因此因此, ,隨著某些快速方法更加頻繁地被使用隨著某些快速方法更加頻繁地被使用, ,其優(yōu)點(diǎn)和局限其優(yōu)點(diǎn)和局限性同時(shí)變得更加明顯，使用在選擇和徹底評(píng)估這些快速檢測方性同時(shí)變得更加明顯，使用在選擇和徹底評(píng)估這些快速檢測方法時(shí)，必須綜合考慮各方面因素，在工作效率和可靠性上找到法時(shí)，必須綜合考慮各方面因素，在工作效率和可靠性上找到一個(gè)平衡點(diǎn)。一個(gè)平衡點(diǎn)。 第五章 食品中微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與分析技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)一、什么是一、什么是3M測試片？測試片？ 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M

4、3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)二、二、3M測試片的優(yōu)點(diǎn)測試片的優(yōu)點(diǎn) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)1. 工作效率的極大提高工作效率的極大提高 根據(jù)大量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，使用根據(jù)大量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，使用 3M Petrifilm， 可以提高實(shí)驗(yàn)室工作效可以提高實(shí)驗(yàn)室工作效率率 118% 以上。勞動(dòng)資源的最佳使用帶來生產(chǎn)能力的提高，最終的以上。勞動(dòng)資源的最佳使用帶來生產(chǎn)能力的提高，最終的效果就是效益的增加。效果就是效益的增加。 2. 標(biāo)準(zhǔn)化的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化的檢測方法 品質(zhì)穩(wěn)定的快速測試片克服了傳統(tǒng)的測試方法存在的由于使用不品質(zhì)穩(wěn)定的快速測試片

5、克服了傳統(tǒng)的測試方法存在的由于使用不同批次的培養(yǎng)基，不同的配制條件，不同配制人員而導(dǎo)致的差異性。同批次的培養(yǎng)基，不同的配制條件，不同配制人員而導(dǎo)致的差異性。 3. 國際化的認(rèn)證方法國際化的認(rèn)證方法 3M 快速測試的方法得到包括快速測試的方法得到包括 AOAC，AFNOR 在內(nèi)的國際權(quán)威機(jī)構(gòu)在內(nèi)的國際權(quán)威機(jī)構(gòu)的認(rèn)證，在全球許多國家也已獲得官方機(jī)構(gòu)的正式批準(zhǔn)，從而可以確的認(rèn)證，在全球許多國家也已獲得官方機(jī)構(gòu)的正式批準(zhǔn)，從而可以確保檢測結(jié)果的可靠性和在世界各地的廣泛認(rèn)可。保檢測結(jié)果的可靠性和在世界各地的廣泛認(rèn)可。二、二、3M測試片的優(yōu)點(diǎn)測試片的優(yōu)點(diǎn) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M

6、3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)4. 快速得到檢測結(jié)果快速得到檢測結(jié)果 對(duì)比傳統(tǒng)的測試方法，對(duì)比傳統(tǒng)的測試方法， 3M快速測試片縮短檢測時(shí)間，使快速測試片縮短檢測時(shí)間，使您在更短的時(shí)間內(nèi)獲得樣品的測試結(jié)果，能更加迅速地采取有您在更短的時(shí)間內(nèi)獲得樣品的測試結(jié)果，能更加迅速地采取有效的措施解決發(fā)現(xiàn)的問題。效的措施解決發(fā)現(xiàn)的問題。 5. 方便進(jìn)行方便進(jìn)行HACCP 認(rèn)證認(rèn)證 由于檢測速度快，檢測項(xiàng)目全，準(zhǔn)確性高。由于檢測速度快，檢測項(xiàng)目全，準(zhǔn)確性高。3M為食品生為食品生產(chǎn)工藝過程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的監(jiān)控提供了較為完整的系列產(chǎn)品，產(chǎn)工藝過程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的監(jiān)控提供了較為完整的系列產(chǎn)品，可以對(duì)包括生產(chǎn)線

7、，生產(chǎn)設(shè)備和環(huán)境在內(nèi)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行全面可以對(duì)包括生產(chǎn)線，生產(chǎn)設(shè)備和環(huán)境在內(nèi)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行全面的測試。的測試。 三、三、3M測試片的操作過程（腸桿菌科為例）測試片的操作過程（腸桿菌科為例） 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)三、三、3M測試片的操作過程（腸桿菌科為例）測試片的操作過程（腸桿菌科為例） 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3

8、M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測

9、試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù)四、四、3M測試片的結(jié)果判讀圖例測試片的結(jié)果判讀圖例 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 3M3M測試片快速分析技術(shù)測試片快速分析技術(shù) 第五章 食品中微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與分析技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) Mi

10、ni-VIDAS Mini-VIDAS快速分析測試技術(shù)快速分析測試技術(shù)一、一、 Mini-VIDAS快速分析技術(shù)簡介快速分析技術(shù)簡介 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) Mini-VIDAS Mini-VIDAS快速分析測試技術(shù)快速分析測試技術(shù)二、二、 Mini-VIDAS快速分析技術(shù)原理快速分析技術(shù)原理 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) Mini-VIDAS Mini-VIDAS快速分析測試技術(shù)快速分析測試技術(shù)1、在固相包被抗體，捕獲目標(biāo)菌。2、二抗酶結(jié)合物結(jié)合目標(biāo)菌，催 化底物產(chǎn)生熒光。1、在固相包被抗體，捕獲目標(biāo)菌酶結(jié)合物。2、目標(biāo)菌抑制抗體和酶結(jié)合物結(jié)合，抑 制催

11、化底物產(chǎn)生熒光。三、三、 Mini-VIDAS快速分析技術(shù)優(yōu)勢(shì)快速分析技術(shù)優(yōu)勢(shì) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) Mini-VIDAS Mini-VIDAS快速分析測試技術(shù)快速分析測試技術(shù)三、三、 Mini-VIDAS快速分析技術(shù)優(yōu)勢(shì)快速分析技術(shù)優(yōu)勢(shì) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) Mini-VIDAS Mini-VIDAS快速分析測試技術(shù)快速分析測試技術(shù) 第五章 食品中微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)與分析技術(shù)第三節(jié)第三節(jié) 利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù)利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù)一、一、 電導(dǎo)率快速檢測微生物技術(shù)原理電導(dǎo)率快速檢測微生物技術(shù)原理 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)第三

12、節(jié) 利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù)利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù) 微生物在生長過程中利用低電導(dǎo)率的大分子物質(zhì)微生物在生長過程中利用低電導(dǎo)率的大分子物質(zhì)(如蛋白如蛋白質(zhì)，多肽及碳水化合物等質(zhì)，多肽及碳水化合物等)進(jìn)行新陳代謝，生成低分子帶電荷進(jìn)行新陳代謝，生成低分子帶電荷的分解物，使電導(dǎo)率發(fā)生變化。的分解物，使電導(dǎo)率發(fā)生變化。 電信號(hào)經(jīng)放大后顯示并記錄，檢測系統(tǒng)每電信號(hào)經(jīng)放大后顯示并記錄，檢測系統(tǒng)每10分鐘檢測一分鐘檢測一次電導(dǎo)率的變化，由計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)次電導(dǎo)率的變化，由計(jì)算機(jī)實(shí)時(shí)監(jiān)控并自動(dòng)給出結(jié)果。監(jiān)控并自動(dòng)給出結(jié)果。 因此只要先用標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)比因此只要先用標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)比做出標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以達(dá)到快速做出標(biāo)準(zhǔn)曲

13、線，就可以達(dá)到快速定量檢測菌數(shù)的目的。定量檢測菌數(shù)的目的。 一、一、 電導(dǎo)率快速檢測微生物技術(shù)原理電導(dǎo)率快速檢測微生物技術(shù)原理 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)第三節(jié) 利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù)利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù) 樣品中微生物數(shù)量越多，越快進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期。培養(yǎng)基電導(dǎo)率樣品中微生物數(shù)量越多，越快進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期。培養(yǎng)基電導(dǎo)率發(fā)生躍遷的時(shí)間越短。發(fā)生躍遷的時(shí)間越短。二、二、 電導(dǎo)率快速檢測微生物技術(shù)特點(diǎn)電導(dǎo)率快速檢測微生物技術(shù)特點(diǎn) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)第三節(jié) 利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù)利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù) 1. 采用測量培養(yǎng)基電導(dǎo)采用測量培養(yǎng)基電導(dǎo)(M值值)和電

14、極電導(dǎo)和電極電導(dǎo)(E值值)結(jié)合的結(jié)合的方法，測量相對(duì)電導(dǎo)率變化，使靈敏度大大提高，方法，測量相對(duì)電導(dǎo)率變化，使靈敏度大大提高，E值測值測量法尤其適用于一些高鹽分量法尤其適用于一些高鹽分(高電導(dǎo)率高電導(dǎo)率)的選擇性增菌培養(yǎng)的選擇性增菌培養(yǎng)基，使電導(dǎo)率法用于致病菌快速初篩成為可能?；闺妼?dǎo)率法用于致病菌快速初篩成為可能。 2. 對(duì)難以測量電導(dǎo)變化的微對(duì)難以測量電導(dǎo)變化的微生物，采用測間接電導(dǎo)率的方法生物，采用測間接電導(dǎo)率的方法，通過測量，通過測量KOH吸收微生物代謝吸收微生物代謝產(chǎn)生產(chǎn)生CO2后電導(dǎo)率的變化反映微后電導(dǎo)率的變化反映微生物的生長情況。生物的生長情況。三、三、 電導(dǎo)率快速檢測微生物技

15、術(shù)優(yōu)勢(shì)電導(dǎo)率快速檢測微生物技術(shù)優(yōu)勢(shì) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)第三節(jié) 利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù)利用電導(dǎo)率快速分析測試技術(shù) 1. 靈敏度高。最低可檢測出靈敏度高。最低可檢測出0.2-1個(gè)個(gè)/mL(克克)樣品。樣品。 2. 可檢測樣品種類廣，檢測的微生物項(xiàng)目多?？蓹z測樣品種類廣，檢測的微生物項(xiàng)目多。 3. 檢測速度快。大部分項(xiàng)目檢測速度快。大部分項(xiàng)目24小時(shí)內(nèi)出結(jié)果，樣品含菌小時(shí)內(nèi)出結(jié)果，樣品含菌量越高，出結(jié)果越快，只需數(shù)小時(shí)即給出結(jié)果。量越高，出結(jié)果越快，只需數(shù)小時(shí)即給出結(jié)果。 4. 檢測步驟簡單。廠家提供特殊配方的培養(yǎng)基，只需將檢測步驟簡單。廠家提供特殊配方的培養(yǎng)基，只需將樣品加

16、入培養(yǎng)基中，放入儀器，然后啟動(dòng)程序即可自動(dòng)出樣品加入培養(yǎng)基中，放入儀器，然后啟動(dòng)程序即可自動(dòng)出結(jié)果。對(duì)于液體樣品無需復(fù)雜前處理，固體樣品只需進(jìn)行結(jié)果。對(duì)于液體樣品無需復(fù)雜前處理，固體樣品只需進(jìn)行必要的均質(zhì)和稀釋即可。必要的均質(zhì)和稀釋即可。 一、一、 膜過濾熒光染色法原理膜過濾熒光染色法原理 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 膜過濾熒光染色法膜過濾熒光染色法二、二、 膜過濾熒光染色法步驟膜過濾熒光染色法步驟 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 膜過濾熒光染色法膜過濾熒光染色法三、三、 膜過濾熒光染色法儀器膜過濾熒光染色法儀器 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 膜

17、過濾熒光染色法膜過濾熒光染色法一、利用葡萄糖醛酸酶定量檢測一、利用葡萄糖醛酸酶定量檢測E. Coli 大腸桿菌重要衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，是環(huán)境監(jiān)測、食品安全、衛(wèi)生防大腸桿菌重要衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，是環(huán)境監(jiān)測、食品安全、衛(wèi)生防疫監(jiān)測中必檢的一個(gè)項(xiàng)目。傳統(tǒng)的大腸菌群檢測法試驗(yàn)過程繁疫監(jiān)測中必檢的一個(gè)項(xiàng)目。傳統(tǒng)的大腸菌群檢測法試驗(yàn)過程繁雜、檢測工作量大、費(fèi)用較高，而且不適合進(jìn)行大腸桿菌定量雜、檢測工作量大、費(fèi)用較高，而且不適合進(jìn)行大腸桿菌定量檢測。檢測。 絕大多數(shù)大腸桿菌具有葡萄糖醛酸絕大多數(shù)大腸桿菌具有葡萄糖醛酸酶，能分解葡萄醛酸苷。使無色原性酶，能分解葡萄醛酸苷。使無色原性-底物（底物（4甲基傘花內(nèi)脂甲基傘花內(nèi)脂

18、-D葡萄糖苷酸）葡萄糖苷酸）生成甲基傘形酮葡萄糖苷酸，在生成甲基傘形酮葡萄糖苷酸，在365nm紫外燈下觀察出現(xiàn)藍(lán)亮色熒光，可以實(shí)紫外燈下觀察出現(xiàn)藍(lán)亮色熒光，可以實(shí)現(xiàn)定量檢測。現(xiàn)定量檢測。 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物二、二、 ATP熒光法檢測總菌落數(shù)熒光法檢測總菌落數(shù) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物 螢火蟲會(huì)發(fā)光是由于它能合成螢火蟲會(huì)發(fā)光是由于它能合成將化學(xué)物質(zhì)的化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽艿膶⒒瘜W(xué)物質(zhì)的化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽艿纳锎呋瘎┥锎呋瘎晒馑孛?、蟲熒光素?zé)晒馑孛浮?/p>

19、蟲熒光素(D-luciferin)以及所有細(xì)胞生物以及所有細(xì)胞生物都產(chǎn)生的生物能量物質(zhì)都產(chǎn)生的生物能量物質(zhì)三磷酸腺苷（三磷酸腺苷（ATP）。）。 在有氧的條件下，蟲光素酶催化蟲熒光素和在有氧的條件下，蟲光素酶催化蟲熒光素和ATP之間發(fā)生之間發(fā)生氧化反應(yīng)，形成氧化熒光素并發(fā)出熒光，其生化反應(yīng)式如下：氧化反應(yīng)，形成氧化熒光素并發(fā)出熒光，其生化反應(yīng)式如下：二、二、 ATP熒光法檢測總菌落數(shù)熒光法檢測總菌落數(shù) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物 上式表明，只要具備適當(dāng)條件，不僅螢火蟲，即使在試管中上式表明，只要具備適當(dāng)條件，不僅螢火蟲，即

20、使在試管中也能發(fā)出熒光。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中，蟲光素酶和蟲熒光素處于過量也能發(fā)出熒光。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中，蟲光素酶和蟲熒光素處于過量的情況下，熒光的強(qiáng)弱取決于的情況下，熒光的強(qiáng)弱取決于ATPATP的數(shù)量。的數(shù)量。 在食品樣品中，細(xì)菌細(xì)胞越多，在食品樣品中，細(xì)菌細(xì)胞越多，ATPATP量越高，發(fā)出的熒光也量越高，發(fā)出的熒光也就越強(qiáng)。就越強(qiáng)。 所以，在排除樣品中非細(xì)菌所以，在排除樣品中非細(xì)菌ATPATP干擾的情況下，通過熒光值干擾的情況下，通過熒光值就能確定樣品中細(xì)菌就能確定樣品中細(xì)菌ATPATP的含量，從而確定細(xì)胞數(shù)量。的含量，從而確定細(xì)胞數(shù)量。ATP+ O +Luciferin+Luciferase =2O

21、xyluciferin+AM P+ PPi+ CO2檢測原理熒光素?zé)晒馑孛赶佘找涣姿嵫鹾蠠晒馑責(zé)晒馊⑷?MTT法檢測總菌落數(shù)法檢測總菌落數(shù) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物 檢測原理為活體微生物線粒體中含有琥珀酸脫氫酶琥珀酸脫氫酶，能使外源性MTT（噻唑藍(lán)）還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。 Formazan結(jié)晶形成的量與活菌數(shù)成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活菌細(xì)胞數(shù)量。 該方法的特點(diǎn)是檢測靈敏度高、快速。在腫瘤細(xì)胞殺傷藥物篩選中應(yīng)用廣泛

22、，在食品衛(wèi)生監(jiān)測中也有應(yīng)用的報(bào)道。三、三、 MTT法檢測總菌落數(shù)法檢測總菌落數(shù) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物利用酶促反應(yīng)定量檢測微生物應(yīng)用實(shí)例1：巴氏消毒奶中活菌素快速檢測 取巴斯消毒奶10mL ，至于無菌離心管中3000rpm離心5分鐘，棄去上清。加入10mL無菌生理鹽水洗滌離心管，再次3000 rpm離心5分鐘，棄去上清取出奶液基質(zhì)。加入1mL生理鹽水重懸底部的微生物，取0.2mL到96孔酶標(biāo)板中，同時(shí)加入標(biāo)準(zhǔn)菌液做標(biāo)準(zhǔn)曲線，統(tǒng)一加入底物反應(yīng)30分鐘，讀數(shù)。一、一、 血清學(xué)方法血清學(xué)方法 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)第六節(jié) 利用免疫反應(yīng)

23、快速檢測微生物利用免疫反應(yīng)快速檢測微生物圖圖示示幾幾種種操操作作類類型型的的原原理理一、一、 血清學(xué)方法血清學(xué)方法(基本原理回顧第基本原理回顧第3章章) 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)第六節(jié) 利用免疫反應(yīng)快速檢測微生物利用免疫反應(yīng)快速檢測微生物實(shí)例實(shí)例1：化膿性鏈球菌的免疫聚集快速檢測：化膿性鏈球菌的免疫聚集快速檢測菌體凝集試驗(yàn)菌體凝集試驗(yàn)免疫散射比濁法免疫散射比濁法二、二、 酶聯(lián)免疫吸附檢測方法酶聯(lián)免疫吸附檢測方法 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)第六節(jié) 利用免疫反應(yīng)快速檢測微生物利用免疫反應(yīng)快速檢測微生物 ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高

24、效催化作用相結(jié)合的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。 分點(diǎn)理解分點(diǎn)理解: 1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記； 2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性； 3. 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留其酶的活性。 在ELISA測定方法中有3種必要的試劑： 固相的抗原或抗體（免疫吸附劑） 酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物） 酶作用的底物（顯色劑）固相載體抗體抗原酶抗體酶標(biāo)記抗體1.將抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗原，則結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。3.再加入酶標(biāo)記抗體，則結(jié)合為抗體-抗原-酶標(biāo)記抗體復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色。實(shí)例：雙抗體夾心實(shí)例：雙抗體夾心ELISA法檢測霍

25、亂弧菌法檢測霍亂弧菌 以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細(xì)血管以硝酸纖維素膜為載體，利用了微孔膜的毛細(xì)血管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，通過抗原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測原抗體結(jié)合，并利用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測抗原抗原/ /抗體?？贵w。最常用的是雙抗夾心法檢測抗原最常用的是雙抗夾心法檢測抗原三、三、 免疫膠體金層析快速檢測方法免疫膠體金層析快速檢測方法 第六章 食品中微生物快速檢驗(yàn)技術(shù)第六節(jié)第六節(jié) 利用免疫反應(yīng)快速檢測微生物利用免疫反應(yīng)快速檢測微生物膠體金原理示意圖（檢測單增李斯特菌為例）膠體金原理示意圖（檢測單增李斯特菌為例）檢測線檢測線質(zhì)檢線質(zhì)檢線吸收墊吸收墊樣品墊樣品墊硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜連接墊連接墊（膠體金墊）（膠體金墊）背襯背襯（底板）（底板）p病毒性疾?。翰《拘约膊。簜魅拘苑ㄊ夏也?、禽流感、新城疫、傳染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬細(xì)小病毒、豬瘟等。犬細(xì)小病毒、豬瘟等。p寄生蟲疾?。杭纳x疾?。貉x病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙血吸蟲病、旋毛蟲病、囊蟲病、恙蟲病。蟲