應用參考測量程序?qū)γ笣舛荣x值過程及不確定度評定指南

1、本標準規(guī)定了應用參考測量程序?qū)γ复呋钚詽舛荣x值及其不確定度評定的方法。本標準適用于體外診斷系統(tǒng)的參考測量實驗室應用參考測量程序?qū)γ复呋钚詽舛荣x值及其不確定度評定工作。GB/T 15000.3 標準樣品工作則（3） 標準樣品 定值的一般原則和統(tǒng)計方法YY/T 0638 體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)中酶催化濃度賦值的計量學溯源性（ISO 18153）WS/T 403-2012 臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量指標賦值、測量不確定度評定、測量結(jié)果及其不確定度評定結(jié)果的報告限值在其他文獻或活動中給出的信息、酶學參考測量程序信息表、LDH賦值過程及不確定度評定方法舉例、使用

2、靈敏系數(shù)進行LDH測量不確定評定舉例建立溯源性的途徑： 參考物質(zhì) 參考測量程序的選擇 SI單位定義參考測量程序： 目前IFCC頒布的37時酶學測量的參考方法主要有ALT、AST、ALP、AMY、GGT、CK、LDH七個項目。2002年JCTLM（由BIPM、IFCC、ILAC組成）開始運行參考測量程序?qū)嶒炇抑g的質(zhì)量評價（RELA）活動，為酶學測量的標準化起到了重要的推動作用。參考測量程序的選擇：參考測量程序主要包括：JCTLM網(wǎng)站列表的參考測量程序（見附錄A）國家標準行業(yè)標準SI單位定義：SI單位定義為“摩爾每秒立方米（mol s-1 m-3）”。國際計量局將其命名為“卡特每立方米（kata

3、l m-3）”。是溯源等級的最高級，通常以kat/L 或U/L表示，1 katal m-3=103kat/L=6104 U/L。為了建立、證明活性濃度測量的溯源性，對參考測量程序中規(guī)定的以下步驟應進行嚴格控制： 稱量、純度、溫度控制、分光光度計、容量器具、統(tǒng)計方法 具體溯源性建立過程參見YY/T 0638標準中的規(guī)定。參考測量程序的評定：CRM驗證=預定限度（技術(shù)水平、應用價值）認可方案的限度，如從CRM定值報告中獲得；程序使用者或組織者給出的限度，如從正確度驗證物質(zhì)提供者獲得；經(jīng)驗的限度，程序使用者根據(jù)先前測量過程中獲得的值制定預定的限度或依據(jù)多家實驗室測量結(jié)果的中位值制定預定的限度；采用標

4、準文件給定的限度，如CNAS-CL33文件規(guī)定：IFCC參考方法對酶學參考物質(zhì)的測量結(jié)果應在統(tǒng)計學達到無差異。CRM的選擇：溯源性：CRM的特性值應有計量溯源性，并附有合理有效的測量不確定度；水平：CRM的標示值應在參考測量程序的測量范圍內(nèi)；基質(zhì)：CRM的基質(zhì)盡可能接近人血清基質(zhì)； 分析物：CRM的分析物應與參考測量程序相同或是參考測量程序分析物的同工酶；最小取樣量：CRM規(guī)定的最小取樣量應小于參考測量程序規(guī)定用量；數(shù)量：CRM的量應滿足整個實驗用量；穩(wěn)定性：CRM的穩(wěn)定性應滿足參考測量程序相關(guān)要求。參考測量程序測量精密度評定：精密度的評定，是將重復性條件或其他規(guī)定條件下實驗室內(nèi)SD（或CV）

5、與預定的限度進行比較。推薦的測量次數(shù)不少于10次。結(jié)果：用Grubbs法或其他適用統(tǒng)計方法進行異常值異常值（1 1）取舍取舍后2.850.5(約等于單側(cè)檢驗的95%)推薦的限值：參考測量程序測量正確度評定：正確度的評定正確度的評定，是將測量結(jié)果的平均值與CRM標示值或正確度驗證物質(zhì)允許的限度進行比較。測量結(jié)果的平均值與CRM標示值進行比較時，應考慮測量程序精密度的各實驗室之間的分量，不應把CRM的不確定度簡單的當做Bias的允許限值使用。參考測量程序的測量結(jié)果不應使用修正因子不應使用修正因子進行修正。偏倚可接受的限值 實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制由于參考測量程序的特殊性，對質(zhì)量控制物質(zhì)有一定的特殊要求，

6、實驗室應選擇適宜的質(zhì)量控制物質(zhì)，可以選擇以下幾種來源的物質(zhì)：a）RELA 樣品；b）商品質(zhì)量控制物質(zhì)；c) 混合人血清等；質(zhì)量控制物質(zhì)的均勻性、特性值濃度水平和穩(wěn)定性應能滿足預期要求。樣本測量在運行參考測量程序之前，實驗室應對主要測量設備關(guān)鍵參數(shù)進行驗證或內(nèi)部校準，性能應符合參考測量程序要求。當參考測量程序的正確度滿足要求后方可進行樣本的賦值。賦值應至少進行兩個實驗批次，每個批次應至少進行3次測量。賦值結(jié)果的處理應使用統(tǒng)計學方法進行，適當時應對結(jié)果進行異常值（離群值）的取舍后再進行統(tǒng)計學處理。數(shù)據(jù)處理對所有測量結(jié)果使用Grubbs或其他適用統(tǒng)計方法進行異常值檢查，剔除離群值后計算所有結(jié)果的平均

7、值和SD（或CV），當SD（或CV）落在預定的限值內(nèi)時，可報告結(jié)果；如SD（或CV）未落在預定的限值內(nèi)時，應分析原因，適當時重新進行賦值。 不確定度的來源分析測量模型的建立標準不確定度的評定合成標準不確定度的計算擴展不確定度的確定 不確定度的來源分析測量不確定度是根據(jù)所用到的信息，表征賦予被測量值分散性的非負參數(shù)。國家認可機構(gòu)發(fā)布的相關(guān)文件中規(guī)定，參考測量實驗室（校準實驗室）出具的測量結(jié)果應附有測量不確定度，因此，使用參考測量程序賦值時應進行測量不確定度的評定。 不確定度的來源分析比如定義的不完整或測量方法的局限性、樣本基質(zhì)不同、試劑、測量條件、儀器設備、所涉及常數(shù)引起的不確定度、統(tǒng)計學處理以

8、及實驗室測量精密度等方面。但對于酶學參考測量程序賦值的不確定度來說，還應進行參考測量程序規(guī)定限值的不確定度的評定，本文評定方法中不包括該類不確定度的評定。 定義的不完整或測量方法的局限性對于酶學測量，由于定義的不完整或測量方法的局限性引起的不確定度主要是分析物的結(jié)構(gòu)不一，絕大多數(shù)的酶存在同工酶，不同的同工酶和反應液具有不同的反應性。 樣本基質(zhì)不同當評定不同于人血清基質(zhì)樣本的不確定度時，應考慮樣本的基質(zhì)效應。試劑試劑來源主要有兩個方面：配制反應液、啟動液所需的原料試劑原料試劑。如試劑純度不足或雜質(zhì)超限、試劑中含有酶的抑制劑或激活劑、不同批次試劑之間的差異、顯色物質(zhì)最大吸收波長等；酶學反應所需的反

9、應液、啟動液反應液、啟動液。如已配制好的溶液具有不穩(wěn)定性、底物濃度或緩沖液。 測量條件影響結(jié)果的測量條件主要有：測量時的環(huán)境溫度、濕度；反應過程中試劑的蒸發(fā)；反應過程中混合液的溫度；反應時間；延遲時間；反應過程中的混勻；反應混合液的pH值。 儀器設備下列儀器設備會影響測量結(jié)果：容量瓶：使用容量瓶定容時的溫度、容量瓶體積；酸度計：調(diào)節(jié)pH時，酸度計的溫度補償；分光光度計：波長準確度、半波寬、透射比的準確度、穩(wěn)定性、讀數(shù)重復性；秒表：時間的準確性；比色皿：光徑；加樣設備：加樣準確度、重復性、試劑樣本加樣的體積比；天平：準確度、重復性、偏載誤差；溫度計：溫度測量的準確度。 所涉及常數(shù)引起的不確定度最

10、終顯色物質(zhì)的摩爾消光系數(shù)（ ）的不確定度影響測量結(jié)果。統(tǒng)計學處理測量數(shù)據(jù)統(tǒng)計處理中的數(shù)值修約、異常值（離群值）取舍影響測量結(jié)果。實驗室測量精密度酶學測量其測量條件比較嚴格，反應過程中的溫度控制、溶液pH值的下降或上升、樣本中分析物特性值的不穩(wěn)定性直接影響測量結(jié)果，因此，測量精密度是影響測量結(jié)果可靠程度的主要因素。 可忽略的不確定度來源下列不確定度來源在此文件中予以忽略：a)在酶學測量中，考慮到底物濃度過量，同時稱量使用萬分之一天平進行，定容使用至少10mL的容量瓶進行，質(zhì)量和體積引起的不確定度非常小，因此，溶液配制過程中引起的不確定度在此予以忽略。b) 測量過程中，由于試劑提前加熱到37且反應在密閉的環(huán)境中進行，試劑蒸發(fā)引起的不確定度在此予以忽略。 c) 每次實驗前配制試劑，因此試劑不穩(wěn)定引起的不確定度在此予以忽略。d) 時間的不確定度對于測量結(jié)果的不確定度貢獻及其微小，在此予以忽略。e) 光徑的不確定度引起吸光度的測量不確定度，光徑的相對標準不確定度為0.05%，酶學測量中精密度引起的測量不確定度約為1%。因此，光徑的不確定度在此予以忽略。f)