項(xiàng)目一紫外分光光度計(jì)的使用

1、2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)1任務(wù)2：紫外可見分光光度計(jì)的使用紫外-可見分光光度法模塊之2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)22022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)3 最新設(shè)計(jì)的 UV1801是通用型具有掃描功能的紫外可見分光光度計(jì)，可滿足各種應(yīng)用的要求，可用在生物研究、生物工業(yè)、藥物分析、制藥、教學(xué)研究、環(huán)保、食品衛(wèi)生、臨床檢驗(yàn)、衛(wèi)生防疫等領(lǐng)域。波長范圍： 1901100nm顯示方式： 六英寸高亮度藍(lán)色液晶顯示屏檢測器： 進(jìn)口硅光二極管光源： 進(jìn)口氘燈，進(jìn)口鎢燈2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)4波長范圍： 1901100nm顯示方式： 液晶檢測器： 進(jìn)口硅光電池光源： 進(jìn)口氘燈、進(jìn)口鹵鎢燈具有波長掃描、時(shí)間掃描、

2、多波長測定等多種測量方法，可滿足不同測量的要求。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)5l1 1、定性分析、定性分析 通常根據(jù)吸收光譜的形狀、吸收峰的數(shù)目以及最大吸收波長的位置和相應(yīng)的摩爾吸收系數(shù)進(jìn)行定性鑒定。 一般采用比較光譜法：即在相同的測定條件下，比較待測物與已知標(biāo)準(zhǔn)物的吸收光譜曲線，如果它們的吸收光譜曲線完全等同，則可認(rèn)為是同一物質(zhì)。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)62022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)7在進(jìn)行定性鑒定時(shí)，需要注意：在進(jìn)行定性鑒定時(shí)，需要注意：1 1）. .測試溶劑測試溶劑：應(yīng)當(dāng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物和待測物有良好的溶解：應(yīng)當(dāng)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物和待測物有良好的溶解度，本身在測定的波長內(nèi)無光的吸收，有良好的穩(wěn)度，本身

3、在測定的波長內(nèi)無光的吸收，有良好的穩(wěn)定性。定性。2 2）. .測試的條件測試的條件：標(biāo)準(zhǔn)物和待測物測試條件要完全相：標(biāo)準(zhǔn)物和待測物測試條件要完全相同，如溶劑、同，如溶劑、PHPH、離子強(qiáng)度、溫度及所用儀器等。、離子強(qiáng)度、溫度及所用儀器等。3 3）. .更改測試條件更改測試條件：為了防止測試數(shù)據(jù)的假象，要對(duì)：為了防止測試數(shù)據(jù)的假象，要對(duì)現(xiàn)有某些條件進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖儞Q，改變其中的某些測現(xiàn)有某些條件進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖儞Q，改變其中的某些測定條件，然后看標(biāo)準(zhǔn)物和待測物的吸收光譜是否仍定條件，然后看標(biāo)準(zhǔn)物和待測物的吸收光譜是否仍然完全相同。然完全相同。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)8l二、定量分析二、定量分析-標(biāo)準(zhǔn)曲

4、線法 配制一系列不同含量的待測組分的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以不含待測組分的空白溶液為參比，測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度。并繪制吸光度濃度曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線（工作曲線），然后再在相同條件下測定試樣溶液的吸光度。由測得的吸光度在曲線上查得試樣溶液中待測組分的濃度，最后計(jì)算得到試樣中待測組分的含量。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)9ACCxAx標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線/ /工作曲線制作工作曲線制作根據(jù)光的吸收定律根據(jù)光的吸收定律: :吸光度與吸光物質(zhì)吸光度與吸光物質(zhì)的含量成正比，這的含量成正比，這是光度法進(jìn)行定量是光度法進(jìn)行定量的基礎(chǔ)，的基礎(chǔ)，標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線就是根據(jù)這一原理就是根據(jù)這一原理制作的。制作的。2022-6-4儀器分析

5、實(shí)驗(yàn)10定性分析與定量分析的基礎(chǔ)定性分析與定量分析的基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收物質(zhì)的電子結(jié)構(gòu)不同，所能物質(zhì)的電子結(jié)構(gòu)不同，所能吸收光的波長也不同，這就吸收光的波長也不同，這就構(gòu)成了物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收構(gòu)成了物質(zhì)對(duì)光的選擇吸收基礎(chǔ)?；A(chǔ)。ABA )(maxA)(maxB在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，在一定的實(shí)驗(yàn)條件下，物質(zhì)對(duì)光的吸收與物質(zhì)物質(zhì)對(duì)光的吸收與物質(zhì)的濃度成正比。的濃度成正比。A C增增大大2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)11l 未知物的定性分析未知物的定性分析 未知物未知物40-60ug/mL稀釋稀釋未知物未知物10ug/mL210350n

6、m 波 長 (nm) Abs確定未知物及最大吸收波長確定未知物及最大吸收波長2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)12 波 長 (nm) Abs 波 長 (nm) Abs苯甲酸苯甲酸水楊酸水楊酸2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)13l 未知物定量分析未知物定量分析 水楊酸標(biāo)水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mg/mL精密吸取精密吸取10ml10ml定容至定容至100ml100ml，移取移取測量吸測量吸光度光度4ml6ml8ml10ml定容定容至至50ml50ml8ug/mL12ug/mL16ug/mL20ug/mL水楊酸未水楊酸未知液知液精密吸取精密吸取10ml10ml定容至定容至50ml50mlAx水楊酸水楊酸濃度

7、？2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)14苯甲酸標(biāo)苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)儲(chǔ)備液1mg/mL精密吸取精密吸取5ml5ml定容至定容至100ml100ml，移取移取測量吸測量吸光度光度2ml4ml6ml8ml定容定容至至50ml50ml2ug/mL4ug/mL6ug/mL8ug/mL水楊酸水楊酸未知未知液液精密吸取精密吸取5ml5ml定容至定容至50ml50mlAx苯甲酸苯甲酸2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)15UV1101分光光度計(jì)的使用分光光度計(jì)的使用l1.初始化l2.主菜單2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)16l3 3、定量分析、定量分析l選擇選擇PhotometryPhotometry（ 定量運(yùn)算）定量運(yùn)算）

8、時(shí)，時(shí)， 按數(shù)字鍵按數(shù)字鍵11， 則則畫面進(jìn)入下一級(jí)子菜單，畫面進(jìn)入下一級(jí)子菜單， 即即PhotometryPhotometry（ 定量運(yùn)算）定量運(yùn)算） 子菜單。子菜單。l如果希望返回上一級(jí)菜單，如果希望返回上一級(jí)菜單， 請(qǐng)按請(qǐng)按CLEAR RETURNCLEAR RETURN。如果。如果希望返回到主菜單畫面，希望返回到主菜單畫面， 請(qǐng)按請(qǐng)按MAIN MENUMAIN MENU。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)17l3.1 透過率/吸光度（%T/Abs）測定模式12022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)18條件設(shè)定條件設(shè)定2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)19l（ 2） 自動(dòng)調(diào)零（自動(dòng)調(diào)零（ AUTOZERO） 條

9、件設(shè)定完成后， 儀器的顯示屏進(jìn)入如圖3-8所示的畫面。此時(shí)將裝有空白樣品（ 例如蒸餾水） 的比色皿放入樣品室中， 再按START/STOP鍵， 可進(jìn)行零點(diǎn)的自動(dòng)調(diào)整。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)20l3） 測定測定l自動(dòng)調(diào)零完成后，即可進(jìn)行樣品的測定。將裝有空白樣品的比色皿取出， 換成裝有被測樣品的比色皿，再按START/STOP鍵進(jìn)行測量。得到各對(duì)應(yīng)波長的數(shù)據(jù)值后， 儀器的顯示屏進(jìn)入如圖3-9 所示的畫面。如果希望更改測定條件，如果希望更改測定條件， 只要按只要按CLEAR RETURNCLEAR RETURN鍵，鍵， 即可返回條件設(shè)定畫面。即可返回條件設(shè)定畫面。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)

10、21l3.2 掃描測定模式主菜單主菜單2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)22l在 MAIN MENU 主菜單畫面（ 圖3-2） 中， 按數(shù)字鍵2， 則畫面進(jìn)入波長掃描子菜單， 如圖2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)23（1）條件測定2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)24l2 2） 基線校正（基線校正（ Baseline CalibrationBaseline Calibration）條件設(shè)定完成后， 儀器的顯示屏進(jìn)入如圖3-39 所示的畫面。此時(shí)將裝有空白樣品（ 例如蒸餾水） 的比色皿放入樣品室中， 再按START/STOP鍵， 則可進(jìn)行基線的自動(dòng)校正。在掃描測定過程中，在掃描測定過程中， 如果按如果按START/STOP鍵，鍵， 則該鍵則該鍵起起STOP（ 停止）功能；停止）功能； 在其他情況下按在其他情況下按START/STOP鍵，鍵， 則該鍵起則該鍵起START（ 啟動(dòng)）啟動(dòng)） 功能。功能。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)25l3） 樣品測定樣品測定l基線校正完成后， 儀器的顯示屏?xí)M(jìn)入如圖3-41 所示的畫面。2022-6-4儀器分析實(shí)驗(yàn)26l將裝有被測樣品的比色皿放入樣品室中， 按 START/STOP鍵， 則