水中微生物的測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定水中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康膙掌握水樣的采取方法。v掌握水樣細(xì)菌總數(shù)測(cè)定的方法；了解水源水的平板菌落計(jì)數(shù)的原則。v學(xué)習(xí)檢測(cè)水中大腸菌群的原理和方法。v了解大腸菌群數(shù)量與水質(zhì)狀況的關(guān)系。v了解大腸菌群的數(shù)量在飲水中的重要性。實(shí)驗(yàn)原理v飲用水是否合乎標(biāo)準(zhǔn)，通常通過(guò)水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)來(lái)確定。v細(xì)菌總數(shù)是指1毫升水樣在一定的培養(yǎng)基平板（普通瓊脂培養(yǎng)基）中，3724小時(shí)培養(yǎng)后所生長(zhǎng)的菌落數(shù)，此值僅是一種近似值。一般規(guī)定，1毫升自來(lái)水的總菌數(shù)不得超過(guò)100個(gè)。v如果水源被糞便污染，則有可能也被腸道病原菌污染而引起傷寒、痢疾、霍亂等腸道病的流行，但腸道病原菌在水中數(shù)量較少，又易

2、變異與死亡，故從水中特別是自來(lái)水中分離出病原菌，常常有困難。v而大腸菌群是腸道好氧菌中最普遍和數(shù)量最多的一種，所以常將其作為糞便污染的標(biāo)志，即根據(jù)水中大腸菌群的數(shù)目來(lái)判斷水源是否被糞便所污染，并間接推測(cè)水源受腸道病原菌污染的可能性。一般規(guī)定每1000毫升自來(lái)水中大腸菌群不超過(guò)三個(gè)。實(shí)驗(yàn)材料v普通瓊脂培養(yǎng)基；乳糖蛋白胨發(fā)酵管；3倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管，復(fù)紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基。v無(wú)菌空瓶；滅菌水；滅菌培養(yǎng)皿、吸管、試管。v自來(lái)水、池水、河水或湖水實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟v水樣的采取水樣的采取自來(lái)水：自來(lái)水： 先將自來(lái)水龍頭用火焰灼燒先將自來(lái)水龍頭用火焰灼燒3min3min，再，再開(kāi)放水龍頭水流開(kāi)放水龍頭水流5

3、min5min，以滅菌三角燒瓶接取，以滅菌三角燒瓶接取水樣。水樣。池水、河水或湖水：池水、河水或湖水： 取距水面取距水面10-15cm10-15cm的深層水樣，將具的深層水樣，將具塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，除去玻璃塞，盛滿后將瓶塞蓋好再?gòu)乃腥〕ゲＡ?，盛滿后將瓶塞蓋好再?gòu)乃腥〕觥３?。v細(xì)菌總數(shù)測(cè)定細(xì)菌總數(shù)測(cè)定1）自來(lái)水 吸取1ml水樣與平皿內(nèi)冷卻至45的培養(yǎng)基混勻，于37下培養(yǎng)24h計(jì)數(shù)，共兩皿。同時(shí)做不接水樣的空白皿對(duì)照試驗(yàn)。2） 池水、河水或湖水 采用平板菌落計(jì)數(shù)法：一般中等污穢水樣，取101、102、103三個(gè)稀釋度，污穢嚴(yán)重的

4、取102、103、104三個(gè)稀釋度。 最后三個(gè)稀釋度的稀釋水樣重復(fù)上述自來(lái)水的細(xì)菌測(cè)定試驗(yàn)。水樣稀釋過(guò)程示意圖水樣稀釋過(guò)程示意圖v菌落計(jì)數(shù)方法菌落計(jì)數(shù)方法（1）計(jì)算相同稀釋度的平均菌落數(shù)有較大片菌苔生長(zhǎng)時(shí)，棄用；以無(wú)片菌苔生長(zhǎng)的平皿計(jì)數(shù)。若片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半，其余一半分布均勻，將此一半計(jì)數(shù)2（2）選擇平均菌落數(shù)在30300之間的平板只有一個(gè)符合此范圍時(shí)只有一個(gè)符合此范圍時(shí)，以該平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。有兩個(gè)在有兩個(gè)在30300間時(shí)間時(shí)，按兩者菌落總數(shù)比值決定：比值小于2，取平均；比值大于2，取較小的菌落總數(shù)。（3）所有菌落數(shù)均大于300，取稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。（4） 所有菌

5、落數(shù)均小于30，取稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。（5） 所有菌落數(shù)均不在30300之間，以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。計(jì)算菌數(shù)落總數(shù)方法舉例計(jì)算菌數(shù)落總數(shù)方法舉例 例次例次不同稀釋的平均菌落數(shù)不同稀釋的平均菌落數(shù)兩個(gè)稀釋度兩個(gè)稀釋度菌落數(shù)之比菌落數(shù)之比菌落總烽（個(gè)菌落總烽（個(gè)/ml）10-110-210-31136516420-16400或或1.610422760295461.637750或或3.810432890271602.227100或或2.71044無(wú)法計(jì)數(shù)無(wú)法計(jì)數(shù)1650513-513000或或5.1105527115-270或或2.71046無(wú)法計(jì)數(shù)無(wú)法計(jì)數(shù)305

6、12-30500或或3.1104備注備注兩位兩位以后以后的數(shù)的數(shù)字采字采取四取四舍五舍五入的入的方法方法去掉去掉五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1結(jié)果結(jié)果（1）自來(lái)水）自來(lái)水平板平板菌落數(shù)菌落數(shù)1ml自來(lái)水中細(xì)自來(lái)水中細(xì)菌總數(shù)菌總數(shù)12（2）池水、河水或湖水等）池水、河水或湖水等稀釋稀釋度度10-110-210-3平板平板121212菌落菌落數(shù)數(shù)平均平均菌落菌落數(shù)數(shù)計(jì)算計(jì)算方法方法細(xì)菌細(xì)菌總數(shù)總數(shù)/mLv大腸菌群檢查 濾膜法過(guò)濾水樣過(guò)濾水樣用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，帖放在已滅菌的濾床上、，固定好濾器，將100mL水浴(如水樣含菌數(shù)較多，可減少過(guò)濾水樣量，或?qū)⑺畼酉♂?注入濾器中，打開(kāi)濾器閥門，在負(fù)0.5大氣壓下抽濾。 v培養(yǎng)培養(yǎng)水樣濾完后，再抽氣約5s，關(guān)上濾器閥門，取下濾器，用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(36.1.3.1)上，濾膜截留細(xì)菌面向上，濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然后將平皿倒置，放入37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)2224h。 v觀察結(jié)果 挑出符合下列特征菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。 紫紅色，具有金屬光澤的菌落。 深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落淡紅色，中心色較深的菌落。v凡革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽胞桿菌，再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)基液，于37培養(yǎng)24h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則判定為總大腸菌群陽(yáng)性。 v計(jì)算濾膜上生長(zhǎng)的總大腸