DNA的提取與鑒定學習教案

1、會計學1DNA的提取的提取(tq)與鑒定與鑒定第一頁，共25頁。第1頁/共25頁第二頁，共25頁。在NaCl溶液濃度 低 于 0 . 1 4 mol/L時，DNA的 溶 解 度 隨NaCl溶液濃度的增加(zngji)而逐漸降低；在0.14 mol/L時，DNA溶解度最小；當NaCl溶液濃度繼續(xù)增加(zngji)時，DNA的溶解度又逐漸增大。當氯化鈉的物質的量濃度為 2 molL時，DNA的溶解度最大，濃度為 014 molL時，DNA的溶解度最低。利用這一 原 理 ， 可 以 使DNA在鹽溶液中溶解或析出第2頁/共25頁第三頁，共25頁。(yngxing)第3頁/共25頁第四頁，共25頁。第4

2、頁/共25頁第五頁，共25頁。第5頁/共25頁第六頁，共25頁。討論：為什么加入蒸餾水能使雞血細胞破裂？第6頁/共25頁第七頁，共25頁。2、植物細胞植物細胞需要(xyo)先用一定的洗滌劑和食鹽溶解細胞膜實例：提取洋蔥DNA時，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液第7頁/共25頁第八頁，共25頁。討 論 ： 如 果 研 磨 不 充 分(chngfn)，會對實驗結果產生怎樣的影響？為了純化提取的DNA需要將濾液作進一步處理討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細胞成分？第8頁/共25頁第九頁，共25頁。為什么反復地溶解與析出DNA，能夠去除雜質第9頁/共25

3、頁第十頁，共25頁。討論：方案二與方案三的原理有什么不同第10頁/共25頁第十一頁，共25頁。第11頁/共25頁第十二頁，共25頁。第12頁/共25頁第十三頁，共25頁。1、以血液為實驗材料時，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。2、加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和玻璃棒攪拌時，動作要輕緩，以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成(xngchng)絮狀沉淀。3、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。第13頁/共25頁第十四頁，共25頁。 1.制雞血細胞液（活雞鮮血經分離(fnl)或沉淀獲得）0.1g/mL檸

4、檬酸鈉100mL活雞鮮血180mL500mL燒杯中，玻棒攪拌，離心(lxn)、分離或靜置沉淀。2.提取(tq)DNA。取血細胞5-10mL20mL蒸餾水，用玻棒沿一個方向快速攪拌。紗布過濾：濾液中含DNA和其他核物質，如蛋白質。.提取血細胞核物質：.溶解核內的DNA：濾液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一個方向輕緩攪拌。三、實驗步驟第14頁/共25頁第十五頁，共25頁。.析出(xch)含DNA的粘稠物：.濾取含DNA的粘稠(zhn chu)物：. DNA粘稠(zhn chu)物的再溶解： 在上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并沿一個方向輕輕攪拌，出現(xiàn)絲狀物；當絲狀物不在增加時，停止加水（此時

5、NaCl溶液的濃度相當于0.14mol/L）。 用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上。 20mL2mol/L的NaCl溶液步驟含DNA的粘稠物在20mL燒杯中輕緩攪拌3min，使盡可能多的DNA溶解在NaCl溶液。.過濾含有DNA的NaCl溶液：用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟所得的溶液，濾液中含有DNA。第15頁/共25頁第十六頁，共25頁。.提取(tq)含有雜質較少的DNA：步驟所得(su d)的濾液體積分數(shù)為95%的冷卻酒精50mL，用玻棒沿一個方向輕緩攪拌，溶液中（析出）出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻棒將絲狀物卷起，并用濾紙吸取上面的水分。3.DNA的鑒定(jindng)：加入二苯胺試劑4m

6、L，用玻棒攪拌使DNA溶解，沸水浴5min，觀察溶液是否出現(xiàn)淺藍色。1.共有“三次過濾，兩次析出，七次攪拌”2.加入“兩次蒸餾水，三次NaCl溶液，一次酒精”三、實驗小結第16頁/共25頁第十七頁，共25頁。四、實驗原理拓展(tu zhn)介紹。1.DNA的釋放(shfng)。 DNA主要在雞血細胞的細胞核內，正常情況下不會釋放出來，蒸餾水對于雞血細胞是一種低滲液，水分可以大量進入血細胞，使之脹破，同時加上玻璃棒快速攪拌(jiobn)的機械作用，加速血細胞的細胞膜和核膜的破裂。但釋放出來的大量DNA與RNA、蛋白質結合在一起，即釋放的不是純凈的DNA，常稱為DNA核蛋白。2.DNA與蛋白質分離

7、。在高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高濃度的氯化鈉溶液中3.DNA的析出與獲取。因為DNA在低濃度（ 0.14mol/L ）的氯化鈉溶液中溶解度小，而蛋白質的在其中的溶解度大。所以在向含DNA的高濃度的氯化鈉溶液中加入大量蒸餾水稀釋氯化鈉溶液，從而使DNA溶解度下降，蛋白質溶解度增高。第17頁/共25頁第十八頁，共25頁。4.DNA的再溶解(rngji)。用高濃度（2mol/L）的氯化鈉溶液(rngy)再溶解DNA粘稠物。5.DNA的沉淀(chndin)和濃縮。 對于除去了蛋白質的DNA的氯化鈉溶液，必須再進一步沉淀和濃縮，常用酒精沉淀法。即往含有Na的D

8、NA溶液，加入體積分數(shù)為95%的冷卻酒精，混勻后可以使DNA沉淀、濃縮，形成含雜質較少的DNA絲狀物，懸浮于溶液中。若絲狀物較少，可將混合液再放入冰箱中冷卻幾分鐘即可。濃縮后的DNA絲狀物可以用玻棒（玻棒有吸附DNA的作用）緩緩旋轉的方法卷起。6.DNA的鑒定。100DNA二苯胺 藍色物鑒定時藍色的深淺與溶液中DNA的含量多少有關。第18頁/共25頁第十九頁，共25頁。方法步驟 加入物質 目的 1.制備雞血細胞液 檸檬酸鈉溶液 2.提取雞血細胞細胞核物質 20 m1蒸餾水 3.溶解細胞核內的DNA 2 m1L 的NaCI溶液40mL 幻燈片 17 4.析出含DNA的黏稠物 蒸餾水 5.濾取含D

9、NA的黏稠物 6.將DNA的黏稠物再溶解 2 molL 的NaCl溶液20 mL 7.過濾含DNA的NaCl 溶液 8.提取含有雜質較少的 DNA 冷卻的95的酒精50 mL A:(1)向試管中加入0.015 molL 的NaCl溶液5mL (2)加入DNA (3)4 mL二苯胺試劑 9.DNA的鑒定 B:(1)向試管中加入0.015molL 的NaCl溶液5mL (2)4 mL二苯胺試劑 第19頁/共25頁第二十頁，共25頁。加入檸檬酸鈉溶液的目的是防止(fngzh)血凝固加速(ji s)血細胞破裂 溶解(rngji)DNA 使2mol/L的NaCl溶液稀釋至0.14mol/L使得DNA最大

10、限度地釋出 使含DNA的黏稠物被留在紗布上使含DNA的黏稠物盡可能多的溶解于溶液中除去含DNA的濾液中的雜質提取DNA A出現(xiàn)藍色 B無變化第20頁/共25頁第二十一頁，共25頁。第21頁/共25頁第二十二頁，共25頁。2.實驗(shyn)中NaCl的物質的量濃度為2 molL和0.14 molL對DNA有何影響?1.在DNA的粗提取實驗過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品(yngpn)B.使血細胞破裂、降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血細胞破裂、提取含雜質較少的DNA答：B答：前者是溶解(rngji)DNA，后者是使DNA

11、析出第22頁/共25頁第二十三頁，共25頁。3.DNA遇二苯胺(bn n)(沸水浴)會染成( ) A.磚紅色 B.橘黃色 C.紫色 D.藍色4.提取雞血中的DNA時，為什么要除去(ch q)血液中的上清液?答：DNA的提取，關鍵是對雜質的去除，由于上清液是血液中的血漿部分，不含DNA，所以(suy)要除去上清液(含有蛋白質)。答：D第23頁/共25頁第二十四頁，共25頁。5.關于DNA粗提取的實驗材料的選擇，也經過了多次實驗效果的比較，最終選擇雞血做實驗材料的原因(yunyn)是什么？請回答下列問題：（1）雞血細胞中紅細胞含有細胞核，家雞屬于鳥類，新陳代謝旺盛，因而血液中 細胞數(shù)目較多，可以提供豐富的 。（2）實驗前由老師制備血細胞液供同學們做實驗材料，而不用雞全血，